广东出入境检验检疫局科技计划项目(2012GDK35)
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 相关作者：卓锦雪许龙岩陈碧玲袁慕云张旺更多>>
- 相关机构：广东出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：广东出入境检验检疫局科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基于TaqMan探针三重荧光PCR检测MRSA被引量：6
- 2014年
- 目的建立基于TaqMan探针三重荧光PCR检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)方法。方法根据nuc(GenBank:EF529607.1)、mecA(GenBank:JN108029.1)和femA gene(GenBank:DQ352463.1)基因序列,分别设计特异性引物和Taqman探针,nuc探针5、端标记TET、mecA探针5、端标记HEX、femA探针5、端标记FAM,建立基于Taqman探针三重荧光PCR检测MRSA的方法,并对69株金黄色葡萄球菌分离株进行基因检测与耐药表型比较。结果 MRSA出现femA、mecA、nuc基因扩增曲线,而表皮葡萄球菌等14株对照菌株扩增结果呈阴性;femA、mecA、nuc基因的扩增效率分别为104%、90.3%、98%,线性系数R2分别为0.999、0.994、0.998;69株分离株中femA、nuc基因阳性率为100%,mecA基因阳性率为13.04%,mecA与耐甲氧西林表型符合率为100%。结论建立的方法特异性强、准确,为金黄色葡萄球菌鉴定和耐药基因分析提供参考依据。
- 袁慕云张旺卓锦雪谢力陈碧玲许龙岩
- 关键词：MRSATAQMAN探针耐药基因
- 金黄色葡萄球菌焦磷酸测序检测及耐药研究
- 2013年
- [目的]探讨用norA基因特异检测金黄色葡萄球菌方法及耐药情况。[方法]根据金黄色葡萄球菌的norA基因设计扩增引物和测序引物,先用PCR特异性地扩增目的片段,再制备单链模板在测序引物引导下进行焦磷酸测序,将测序结果与GenBank中的norA基因序列比对进行鉴定;用Vitek2进行药敏试验,分析金黄色葡萄球菌耐药情况。[结果]扩增引物和测序引物表现出良好的特异性,28株金黄色葡萄球菌均扩增出大小113bp的DNA片段,焦磷酸测序结果与norA基因序列100%匹配,而阴性对照菌株均未扩增出DNA条带,焦磷酸测序结果阴性;28株金黄色葡萄球菌有14种耐药谱,青霉素、红霉素、苯唑西林和四环素的耐药率分别为71.4%、35.7%、32.1%和28.6%;6株菌株发生C-T突变,对喹诺酮类抗生素菌敏感。[结论]用norA基因可特异性的检测金黄色葡萄球菌;norA基因第354和377碱基位点的突变和喹诺酮类抗生素耐药性无关。
- 袁慕云卓锦雪许龙岩陈碧玲张旺
- 关键词：金黄色葡萄球菌焦磷酸测序耐药
