福建省科技厅社会发展重点项目(2009Y0009)
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 相关作者：沈晓丽王孟丽林丽芳唐海燕韩莉莉更多>>
- 相关机构：福建省立医院更多>>
- 发文基金：福建省科技厅社会发展重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢病毒载体感染人皮肤成纤维细胞的研究
- 2009年
- 目的:建立慢病毒-绿色荧光蛋白载体有效感染人包皮成纤维细胞的方法,为利用慢病毒载体介导外源基因导入人包皮成纤维细胞,后者直接诱导分化为多能干细胞的研究奠定基础。方法:采用0.1%Ⅰ型胶原酶冷消化联合组织块贴壁法培养人包皮成纤维细胞,在细胞培养液中分别加入不同感染复数的慢病毒和具有促进病毒感染的细胞增强液,并于感染48h后观察慢病毒转导情况。结果:成功建立人包皮成纤维细胞培养模型,当慢病毒对人包皮成纤维细胞的感染复数为20及在培养基中加入细胞增强液时,感染效率可以达到80%,能满足后续实验的需要。结论:慢病毒较易感染人包皮成纤维细胞,是具有发展潜力的多能干细胞细胞技术研究的新载体。
- 王孟丽沈晓丽韩莉莉林丽芳浦晓东
- 关键词：慢病毒载体皮肤成纤维细胞多能干细胞
- 人皮肤成纤维细胞分离培养的研究被引量：5
- 2009年
- 目的:探讨人包皮成纤维(human foreskin fibroblast,HFF)细胞分离培养方法,通过分析HFF细胞体外培养条件,建立稳定的HFF细胞系。方法:用0.25%dispaseⅡ酶消化包皮环切术后皮肤组织,分离表皮和真皮,真皮组织用0.1%Ⅰ型胶原酶消化,收集细胞于含20%胎牛血清的DMEM培养液中,置CO2培养箱孵育,待细胞长成单层后消化传代。结果:消化法得到的人皮肤成纤维细胞24h内贴壁,刚开始贴壁时细胞多数呈圆形,HFF细胞随贴壁时间延长,逐渐伸展成梭形或多边形。传代后的成纤维细胞12h开始贴壁,24h内完全贴壁。HFF细胞采用SABC法染色细胞浆呈棕色,前10代细胞活力均在98%以上。结论:该方法可获得高产量、高活力的HFF细胞,是一种可靠的HFF细胞培养方法。
- 王孟丽沈晓丽林真林丽芳
- 关键词：成纤维细胞多能干细胞细胞分离
- Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因慢病毒载体的构建
- 2011年
- 目的构建Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因慢病毒表达载体,为诱导性多能干细胞研究奠定基础。方法将Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4基因利用Infusion技术重组构建慢病毒载体穿梭质粒pGC-FU-Oct4、pGC-FU-Sox2、pGC-FU-c-Myc、pGC-FU-Klf4,经PCR和测序后与与结构质粒pHelper1.0和包膜质粒pHelper2.0在脂质体Lipofectamine2000介导下共转染293T细胞包装生产慢病毒,浓缩纯化后检测滴度。结果 PCR扩增和测序结果证实成功构建Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4的慢病毒载体并包装慢病毒,检测Oct4基因重组慢病毒、Sox2基因重组慢病毒、c-Myc基因重组慢病毒的滴度均为1×109TU/mL,Klf4基因重组慢病毒的滴度为1.9×109TU/mL。结论成功建立重组慢病毒载体的三质粒包装细胞系统。
- 唐海燕沈晓丽林立芳韩莉莉
- 关键词：OCT4SOX2C-MYCKLF4慢病毒载体
- 诱导性多能干细胞形成过程中转录因子的研究进展被引量：1
- 2010年
- 诱导性多能干细胞(iPS)是以反转录病毒为载体将胚胎特异性转录因子导入体细胞,使其诱导分化为具有胚胎干细胞(ESCs)特性的细胞。这种多能干细胞在细胞形态、增殖速率、致瘤性、基因表达以及形成嵌合小鼠的能力上与ESCs有许多相似之处,将来可能成为ESCs在临床应用中的替代。现对iPS细胞相关的几种转录因子及其在重编程过程中的作用,以及转导基因的选择予以综述。
- 唐海燕沈晓丽
- 关键词：诱导性多能干细胞转录因子重编程
