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抗人宫颈癌单链抗体的表达、结构预测和功能分析被引量：4: 2006年; 目的扩增、表达抗人宫颈癌单链抗体(ScFv)基因;对ScFv蛋白进行活性鉴定、二级结构、三维结构预测和理化性质分析。方法采用基因重组技术构建抗人宫颈癌ScFv基因,进行TG1和HB2151两个原核体系的表达:SDS-PAGE、 Western bloRing、竞争抑制实验、免疫组化反应检测ScFv;用Antheprot4．3软件、Swiss-model、3dpssm进行蛋白理化性质分析和立体结构模拟。结果抗人宫颈癌可溶性ScFv大小为32 000左右,与预计蛋白相对分子质量相符:可溶性和展示性ScFv均可与人宫颈癌细胞株细胞膜表面抗原结合。免疫组化显示能与宫颈癌组织特异性结合而不与正常宫颈组织和其他肿瘤组织结合。ScFv蛋白等电点预测值为7．215,属于α+β蛋白;VH和VL区均有多个蛋白激酶C磷酸化位点和酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位点。三维结构预测显示linker贴近,使VL和VH形成一个疏水的“口袋”,这一结构有利于抗原的结合。结论经基因工程方法制备的抗人宫颈癌ScFv具有与亲本单克隆抗体相似的抗体活性和特异性。抗人宫颈癌ScFv构建为进一步构建双特异性ScFv和双功能ScFv基因创造了条件:其成功的表达为人宫颈癌的早期诊断和特异性治疗打下了基础。计算机对ScFv蛋白的空间结构的模拟和理化性质的分析为ScFv的进一步政建和抗原、抗体反应的研究提供了宝贵的资料。; 王莹李旭陈葳; 关键词：宫颈癌单链抗体

抗人宫颈癌单链抗体的基因构建、空间结构和进化分析被引量：1: 2005年; 目的:构建抗人宫颈癌单链抗体(scFv)基因CSAs-1,并进行二级结构和三级结构预测、理化性质分析及进化树构建。方法:采用重叠延伸PCR方法,以能特异性分泌抗人宫颈癌mAb的杂交瘤细胞株CSA125为原料,构建抗人宫颈癌scFv基因CSAs-1,进行测序;并通过Internet对其进行结构预测和进化树构建。结果:抗人宫颈癌scFv基因CSAs-1有834bp,对应278个氨基酸的多肽,等电点预测值7.215,为碱性蛋白质;PHDsec二级结构显示CSAs-1属于α+β蛋白,VH和VL区均有多个蛋白激酶C磷酸化位点、酪蛋白激酶II磷酸化位点;CSAs-1三级结构建模显示VL和VH形成一个疏水的“口袋”,Linker游离于此结构之外。以上结果表明:CSAs-1符合scFv的结构特点,明显具有抗原结合位点的空间构象,理论上应该具有良好的抗原结合活性。进化分析发现脊椎动物V基因形成三个进化群,CSAs-1V区分布于进化树的A群中。结论:构建一个鼠源性抗人宫颈癌scFv基因CSAs-1,为该基因的进一步原核和真核表达打下了基础;应用信息学技术所获得的预测和分析结果为CSAs-1表达、纯化和活性研究提供了大量的信息;为进一步分析抗体VH、VL在抗体功能中的作用、改造抗体、实现抗体的人源化、提高抗体的活性等方面提供了一定的依据。; 王莹李旭陈葳; 关键词：宫颈癌单链抗体进化分析

扩增抗体重链可变区的一个高效方法: 2006年; 从杂交瘤细胞或脾细胞中扩增抗体可变区,是构建单链抗体(Single-chainFvfragment,ScFv)、克隆单克隆抗体和研究抗原与抗体相互作用的关键一步。而抗体可变区(Variableregions,Fv)高度变异,扩增相对困难,至今仍是一个难点,有待解决。我们在构建ScFv过程中,发现2株杂交瘤细胞用普通方法难于扩增出抗体重链可变区(Heavy-chainvariableregion,VH)抗体。于是提出了一种多序列比对和简并引物设计算法,并加以实现,设计出通用的鼠源性抗体VH引物;应用上述引物,采用反向多聚酶链反应(Reversepolymerasechainreaction,reversePCR)方法——3'RACE和5'RACE法,准确地扩增出2株杂交瘤细胞的VH基因。该算法很好地解决了引物特异性和最小化问题,具有简单、实现容易的特点,可用于基因家族中未知基因克隆和文库构建中的引物设计。与反向PCR方法结合,提高了难扩增的未知基因的成功率。; 王莹陈葳李旭程兵; 关键词：反向PCR

亚低温对HIBD新生鼠大脑皮质神经元NSE表达及血糖水平影响的研究被引量：8: 2002年; 目的　通过亚低温对新生鼠缺氧缺血脑损伤 (HIBD)大脑皮质神经元特异性烯醇化酶 (NSE)及血糖水平影响的研究 ,探讨亚低温对HIBD的保护作用机制。方法　建立新生鼠HIBD标准化动物模型 ,将其随机分为对照组、31℃亚低温和 34℃亚低温干预组及假手术组 ,应用免疫组化染色观察大脑皮质区NSE阳性神经元数目 ,并利用微量血糖监测仪测定血糖。结果　缺血缺氧后 12h ,2 4h亚低温干预组大脑皮质NSE阳性神经元数目均显著低于对照组 [31℃亚低温组 :(5 4 .3± 6 .5 )vs (82 .3± 6 .0 ) ,(34.6± 5 .6 )vs (5 3.3± 5 .6 ) ,P <0 .0 5或0 .0 1;34℃亚低温组 :(5 6 .8± 7.1)vs (82 .3± 6 .0 ) ,(32 .9± 4 .9)vs (5 3.3± 5 .6 ) ,P <0 .0 5 ]。缺氧缺血后 12h ,2 4h血糖水平 [31℃亚低温组 :(5 .74± 1.5 2 ) ,(5 .89± 1.6 2 )mmol/L ;34℃亚低温组 :(5 .6 9± 1.4 8) ,(5 .91± 1.5 3)mmol/L]亦显著高于对照组 [(3.6 4± 1.2 2 ) ,(4.16± 1.5 4 )mmol/L](P <0 .0 1)。 31℃亚低温和 34℃亚低温干预两组间各个时期大脑皮质区NSE阳性神经元数目及血糖水平差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　亚低温可通过抑制神经元内NSE活性及升高血糖水平。; 李占魁李瑞林郭亚乐苏宝山黄绍平周熙惠; 关键词：亚低温脑缺氧烯醇化酶新生鼠

围产期窒息母儿血浆催乳素水平变化研究被引量：3: 2003年; 为探讨窒息新生儿母、儿血浆催乳素 (PRL)水平变化与相关性及其意义 ,采用放射免疫分析法对25例围产期窒息儿及20例正常对照组母血、脐血及新生儿血浆PRL水平进行测定并进行动态观察。结果显示窒息组母血、脐血及新生儿血浆PRL水平均显著高于正常对照组 (P均<0.01) ;重度窒息组母血、脐血及新生儿血浆PRL水平均高于轻度窒息组 ,差异具有显著性(P<0.01 ,<0.001,<0.01) ,窒息儿母血、脐血及新生儿血浆PRL水平具有显著的正相关关系 (r=0.54,P<0.05)。窒息新生儿复苏后血浆PRL水平显著增高 ,生后第2dPRL水平逐渐下降 ,生后第10d血浆PRL水平虽高于正常对照组 ,但差异无显著性 (P>0.05)。提示围产期窒息新生儿血浆、脐血、母血PRL水平显著增高 ,其可能的机理是窒息时缺氧缺血导致脑组织释放兴奋性氨基酸增加 ,进而刺激垂体前叶释放PRL ,导致血浆及脐血PRL水平增高。因此认为 ,血浆PRL水平可作为判断新生儿窒息程度及由窒息缺氧所致新生儿脑损伤恢复状况的一项参考指标。; 李占魁冯晋兴段钊刘明李静薛翔; 关键词：围产期窒息血浆催乳素

新生儿缺氧缺血性脑病血浆神经肽Y水平的检测及分析被引量：3: 2002年; 李占魁辛芳琴李静郑纯礼; 关键词：新生儿缺氧缺血性脑病血浆 HIE

新生儿缺氧缺血性脑病血浆肿瘤坏死因子-α与降钙素基因相关肽水平变化的研究被引量：3: 2000年; 目的探讨肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）和降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）在新生儿缺氧缺血性脑病（ＨＩＥ）中的变化及临床意义。方法采用放射免疫分析法对３８例ＨＩＥ患儿和１８例健康足月新生儿血浆ＴＮＦ－α与ＣＧＲＰ水平进行了同期动态观察。结果ＨＩＥ患儿急性期ＴＮＦ—α，ＣＧＲＰ水平分别为（１．１２±０．４２）ｎｇ／ｍｌ，（８８．９２±２３．１６）ｎｇ／ｍｌ；恢复期分别为（０．６１±０．１８）ｎｇ／ｍｌ，（６８．３９±１９．３２）ｎｇ／ｍｌ；对照组分别为（０．５４±０．１５）ｎｇ／ｍｌ，（６６．２± １４．５４）ｎｇ／ｍｌ。急性期血浆ＴＮＦ－ α和ＣＧＲＰ水平较恢复期显著增高（Ｐ＜０．０１），并明显高于同期对照组水平（Ｐ＜０．０１），恢复期与正常对照组无显著差异，急性期不同程度ＨＩＥ与对照组ＴＮＦ— α，ＣＧＲＰ水平比较，重度ＨＩＥ组ＴＮＦ—α，ＣＧＲＰ分别为（１．２８±０．４１）ｎｇ／ｍｌ，（１１８．１２ ± ３０．２５）ｎｇ／ｍｌ；中度ＨＩＥ组分别为（０．９５±０．３）ｎｇ／ｍｌ，（８６．４９±２４．３６）ｎｇ／ｍｌ，轻度ＨＩＥ组分别为（０．６３±０．１９）ｎｇ／ｍｌ，（６８．３±１８．３８）ｎｇ／ｍｌ，?; 李占魁王玲陈尔秀陈玺刘雅郭亚乐郑纯礼; 关键词：缺氧缺血性脑病肿瘤坏死因子Α CGRP 新生儿

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陕西省自然科学基金(99SM52)

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