国家自然科学基金(39970014)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：张臻峰黄熙泰于春风徐建国王晓琛更多>>
- 相关机构：南开大学中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 大肠杆菌topA-菌株中质粒pBR322的超凝集结构被引量：1
- 2007年
- 超凝集DNA是质粒DNA的一种特殊拓扑结构形式,最初在大肠杆菌SD108(topA+gyrB225)细胞中被发现.现在大肠杆菌DM800(topA-gyrB225)细胞中也发现了这种结构,这说明超凝集DNA的形成与细胞内旋转酶活性降低有直接关系,而与拓扑异构酶Ⅰ的存在与否无关.体外实验的结果显示,具有很强的正超螺旋松弛活性的拓扑异构酶Ⅳ可以将超凝集DNA完全松弛,这也证明质粒DNA的超凝集结构与超螺旋结构在细胞内是可以互变的.使用原子力显微镜对分离到的pBR322DNA超凝集结构进行分析,并与普通超螺旋进行比较,结果表明,超凝集DNA分子的结构发生了巨大的变化,其分子长度比正常超螺旋分子缩短了约30%,宽度和高度则增加了60%,结构更接近于A型DNA.另外,原子力显微镜研究结果表明,氯喹的嵌入并非改变了超凝集DNA的超螺旋状态,而是使其打结并最终压缩成一团.
- 张臻峰于佳曹扣黄熙泰
- 关键词：原子力显微镜
- 产毒性大肠杆菌CFA/Ⅰ基因表达与DNA超螺旋状态的关系被引量：2
- 2004年
- 将CFA／I结构基因(cfaABCE)克隆到载体pJRD184上构建了质粒pJGX15A,并将其转入大肠杆菌topA野生株E.coli HB101和topA缺陷株E.coli DM800中.Western blot测定的结果表明,在CFA／I的正调控基因cfaD基因缺失时,两株重组菌株都能够表达CFA／I抗原.分别抽提两个重组菌株对数前期和对数中期的质粒pJGX15A DNA,并对其进行氯喹琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示E.coli DM800细胞中质粒pJGX15A的负超螺旋水平比野生型细胞E.coliHB101中的较低.同时,菌落免疫酶斑分析的结果显示DM800受体菌中CFA／I的表达水平比HB101受体菌中的表达水平高.实验结果表明,CFA／I结构基因的表达与DNA负超螺旋水平有明显的负相关性,与负超螺旋促进基因表达的看法不同.
- 张臻峰于春风万庆王晓琛黄熙泰叶长芸余秀均吴继民徐建国
- 关键词：产毒性大肠杆菌
- 质粒pUC18DNA的螺线管型超螺旋结构
- 2003年
- 理论上,游离的超螺旋DNA可以采取两种结构形式:互缠式超螺旋和螺线管型超螺旋。前者早已被透射电子显微镜和原子力显微术的研究所证实,而后者却仍然缺乏足够的证据。使用温和的清亮裂解液法,从DNA拓扑酶野生型大肠杆菌HB101细胞抽提质粒pUC18 DNA。经CsCl-EB平衡密度梯度超离心分离获得超螺旋pUC18 DNA和松弛型pUC18 DNA(DNA Ⅱ)。纯化DNA分别用疏水性溶剂系统和亲水性溶剂系统的细胞色素单分子层展开技术制备电子显微镜标本。观察结果显示:在疏水性的甲酰胺-水展开系统中,DNA采取通常的互缠式结构;在含有1.5mmol/L醋酸铵的水介质中制备的超螺旋DNA标本,DNA采取线圈型结构,测得pUC18 DNA(单体)分子这种结构的外直径约为43.8nm,内直径约为2nm。在相同亲水介质中松弛型pUC18DNA采取典型的螺线管型结构,其单体平均外直径约为53.1nm,内直径约为17.2nm。表明:在疏水介质中超螺旋DNA趋向于采取互缠式结构,而在亲本介质中DNA则采取螺线管型结构。DNA链之间可能存在非共价相互作用以维持这种结构。螺线管型结构可能是水溶液中的超螺旋DNA分子普遍的存在形式。
- 齐静张臻峰于春风杨琴黄志刚侯亭黄熙泰
- 关键词：电子显微镜
