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gAd对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖分解代谢关键酶表达的影响: 2013年; 目的通过检测3T3-L1脂肪细胞内糖酵解关键酶的表达情况,探讨课题组前期制备的脂联素球状结构域(gAd)对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖分解代谢的影响。方法用课题组前期制备的gAd(质量浓度依次为10、50、100、300、1 000 ng/mL)干预分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,干预结束后以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞糖酵解关键酶包括己糖激酶、6-磷酸果糖激酶-1及丙酮酸激酶转录表达情况,以Western blot法检测各组细胞丙酮酸激酶翻译表达情况。结果gAd干预组(5个浓度)己糖激酶的转录表达[(2.02±0.16)、(3.47±0.29)、(4.22±0.33)、(5.83±0.45)、(6.65±0.51)倍]显著高于对照组(1.00±0.00)(F=125.789,P<0.001),6-磷酸果糖激酶-1和丙酮酸激酶的转录表达也显著高于对照组(F分别为85.399和113.661,P均<0.001),同时丙酮酸激酶的翻译表达(12.430%±0.800%、1.700%±3.010%、26.570%±1.114%、52.600%±2.910%、71.130%±10.600%)也显著高于对照组(8.000%±1.610%)(F=161.007,P<0.01)。结论 gAd促进3T3-L1脂肪细胞摄取胞外葡萄糖的同时,激活了细胞内葡萄糖的分解供能代谢途径。; 王彦廉如陈思思高婷婷吴彬陈显久杨静; 关键词：脂肪细胞

脂联素球状结构域对3T3-L1脂肪细胞磷酸戊糖途径关键酶表达的影响: 2012年; 目的:通过探讨脂联素球状结构域(gAd)对3T3-L1脂肪细胞磷酸戊糖途径关键酶表达的影响,进而探讨gAd促进脂肪细胞摄取的葡萄糖是否经磷酸戊糖途径代谢。方法:用gAd干预分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,干预结束后测定细胞残液的葡萄糖浓度,并以实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组细胞磷酸戊糖途径关键酶葡萄糖-6-磷酸酶(G6PD)转录水平的表达情况,进行统计学分析。结果:各实验组细胞残液中葡萄糖浓度均显著低于对照组(均P<0.01);各实验组G6PD转录水平的表达与对照组相比无差别(F=1.545,P=0.248)。结论:gAd能够促进3T3-L1脂肪细胞摄取胞外葡萄糖,但未导致G6PD转录水平的变化,提示摄取到细胞内的葡萄糖可能不经磷酸戊糖途径进行分解代谢。; 王彦廉如陈思思高婷婷吴彬陈显久; 关键词：3T3-L1脂肪细胞关键酶

脂联素球状结构域真核表达载体pcDNA3.0-gAd的构建被引量：2: 2010年; 目的构建脂联素球状结构域(globular adiponectin,gAd)的真核表达载体,为研究gAd对糖尿病、动脉粥样硬化等疾病的治疗奠定基础。方法从健康人全血中提取基因组DNA,PCR法获得脂联素球状结构域基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ酶切后与pcDNA3.0真核表达载体重组得到pcDNA3.0-gAd,分别用PCR法和DNA测序法鉴定pcDNA3.0-gAd。结果以从健康人全血中提取出的高纯度基因组DNA为模板,PCR扩增出gAd基因,真核载体pcDNA3.0经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后与gAd基因进行体外重组,PCR法筛选出阳性克隆,DNA测序显示重组质粒pcDNA3.0-gAd的gAd基因与基因库中报道的脂联素基因序列(Gen-Bank:EU420013.1)中gAd序列完全一致,说明成功构建了pcDNA3.0-gAd,且序列正确。结论本研究为进一步从分子水平探究gAd基因和蛋白质的功能、深入探讨其生物作用机制创造了条件。; 黄敏陈显久王彦杨静; 关键词：脂联素真核表达载体

基因重组球状脂联素蛋白的急性经口毒性和遗传毒性研究: 2013年; 目的检测基因重组球状脂联素蛋白(gAd)蛋白的经口毒性和遗传毒性,为其临床应用提供医学毒理学依据。方法按照GB15193-2003《食品安全性毒理学评价程序和方法》进行急性经口毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验。结果急性经口毒性试验中实验组动物7d内未见中毒症状,LD50>10g/kg体重。Ames试验中各组回变菌落数均未超过自发回变菌落数2倍,且无剂量反应关系,结果为阴性。骨髓微核试验中各剂量组雌雄性别微核形成率与阴性对照结果比较,差异无统计学意义P均>0.05),结果为阴性。小鼠精子畸形试验中各实验组与阴性对照组结果比较,差异无统计学意义(P均>0.05),精子畸形试验结果为阴性。结论基因重组gAd蛋白属实际无毒级物质,未见遗传毒性作用。; 师磊吴彬陈显久王彦燕炯; 关键词：急性经口毒性遗传毒性

脂联素的球状结构域对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型AMPK信号通路的影响被引量：1: 2012年; 目的观察脂联素的球状结构域(gAd)对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型AMPK信号通路的影响。方法将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞。用软脂酸制备脂肪细胞IR模型,3个浓度的gAd干预已产生IR的3T3-L1脂肪细胞。用葡萄糖氧化酶法,检测培养液中葡萄糖的浓度;用RT-PCR法,检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、脂肪酸分解代谢关键酶肉碱脂酰转移酶I(CPT-I)基因水平的变化;用Western blot法,检测AMPK Thr-172磷酸化水平。结果 gAd可促进3T3-L1脂肪细胞IR模型葡萄糖摄取,可增加3T3-L1脂肪细胞AMPK、CPT-I基因的表达,且与剂量呈正相关(均P=0.000);gAd可增加3T3-L1脂肪细胞AMPK Thr-172磷酸化水平,且与剂量呈正相关(P=0.000)。结论 gAd经AMPK途径,可改善3T3-L1脂肪细胞的IR。; 王彦陈思思廉如高婷婷陈显久杨静; 关键词：胰岛素抵抗 3T3-L1脂肪细胞

脂联素球状结构域对2型糖尿病大鼠己糖激酶和丙酮酸激酶活力影响的研究被引量：4: 2013年; 目的探讨原核基因重组脂联素球状结构域(gAd)对T2DM大鼠血糖水平的影响。方法采用高糖高脂饮食加1%STZ 35mg/kg建立T2DM大鼠模型。将造模成功的T2DM大鼠随机分为4组,检测干预前后血糖水平和40min后肝、肌肉组织己糖激酶(HK)和丙酮酸激酶(PK)活力。结果gAd干预40min时,干预组2、3血糖低于对照(NC)组,干预40min后,大鼠肝、肌肉组织HK和PK活力升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 gAd急性干预T2DM大鼠可通过增强肝、肌肉组织糖酵解途径降低血糖水平。; 王彦高婷婷廉如陈思思黄敏吴彬陈显久杨静

脂联素球状结构域对胰岛素抵抗模型脂肪细胞及胰岛素信号转导的影响被引量：5: 2012年; 将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞，用软脂酸制备脂肪细胞胰岛素抵抗模型，不同浓度的脂联素球状结构域（globular domain of adiponectin，gAd）干预已经产生胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞，葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖的消耗量，实时荧光定量PCR法检测胰岛素受体底物（1RS）-1、磷脂酰肌醇3激酶（P13K）、蛋白激酶B（PKB）基因水平的变化，Western印迹检测IRS-1酪氨酸磷酸化水平。结果显示，与对照组相比，各实验组葡萄糖消耗量均显著增加（P〈0．01），且随着gAd浓度的增加．葡萄糖消耗量也逐渐增加；500ng／mlgAd组及1000ng／mlgAd组IRS—1、P13K、PKB的mRNA表达均比对照组显著增加（P〈0．05）；同时，gAd可增加3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型IRS-1酪氨酸磷酸化水平，且呈浓度依赖性．提示gAd能够促进3T3-LI脂肪细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖的摄取，其机制可能与促进脂肪细胞胰岛素信号转导、改善胰岛素抵抗有关。; 王彦陈思思廉如陈显久杨静; 关键词：3T3-L1脂肪细胞胰岛素信号转导胰岛素抵抗

软脂酸制备3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的方法: 2012年; 目的用软脂酸(PA)诱导3T3-L1脂肪细胞,探讨用PA制备3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)模型的方法。方法将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,用油红O染色法鉴定细胞。用不同浓度的PA(0mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L、1.0mmol/L)干预3T3-L1脂肪细胞24h,收集各组细胞培养液,用葡萄糖氧化酶法测定各组细胞培养液葡萄糖的含量,观察PA对3T3-L1脂肪细胞糖摄取的影响。结果 0.25mmol/L PA就可明显抑制成熟的3T3-L1脂肪细胞葡萄糖的摄取(P<0.01),且呈浓度依赖性。与对照组相比,0.25mmol/L PA组、0.5mmol/L PA组、1.0mmol/L PA组葡萄糖摄取率分别下降5.25%、10.29%、14.54%。结论在胰岛素刺激下,0.25mmol/L PA作用于3T3-L1脂肪细胞24h就可诱导细胞产生IR,且随着浓度的增加其效果逐渐增强。; 陈思思王彦杨静陈显久; 关键词：3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗软脂酸

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山西省科技攻关计划项目(20090321104)

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