四川省科技攻关计划(05NG002-011)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 猪圆环病毒2型ORF2基因插入猪细小病毒VP2基因3′端对病毒样颗粒形成的影响被引量：3
- 2009年
- 以猪细小病毒(PPV)四川分离株SC-1的VP2基因3′端为靶点,在第1215和1216位之间插入长约700 bp的猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因片段,将重组后的PPV VP2-PCV2 ORF2克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建了重组质粒pEGFP.VO;经酶切和PCR鉴定后,采用脂质体介导法将重组质粒pEGFP.VO转染COS-7细胞,应用倒置荧光显微镜、电镜、免疫荧光以及生物信息学技术对表达产物进行观察分析。结果显示,重组质粒pEGFP.VO在COS-7细胞中得到表达,但在电镜下没有观察到病毒样颗粒。通过对PPV衣壳蛋白的三维结构分析及免疫荧光检测发现,PCV2 ORF2基因的插入位点位于PPVVP2基因的3′端,相应表达产物则位于VP2蛋白多肽的C端,且被其包裹在内,这可能影响了病毒样颗粒的形成,表明,PPV VP2基因3′端不适合外源基因插入构建重组病毒样颗粒。
- 徐志文郭万柱蒋清蓉朱玲熊丁杰王印徐凯王小玉
- 关键词：猪细小病毒VP2基因插入位点病毒样颗粒
- VP2蛋白Cys-402、Cys-214对猪细小病毒VLPs影响的初步研究被引量：1
- 2009年
- 试验以猪细小病毒VP2 Cys-402（A）、Cys-214（B）定点突变体为基础，将突变体真核表达载体转染COS-7细胞及核酸免疫猪细小病毒抗体阴性的小白鼠，通过电镜技术和流式细胞仪技术探讨突变Cys-402、Cys-214对猪细小病毒病毒样颗粒的影响，旨在寻找利于外源基因插入的病毒样颗粒内部位点。电镜和小白鼠核酸免疫试验结果表明：Cys-214对病毒样颗粒的组装和免疫原性的发挥是必需的，其突变后不能促使VP2形成病毒样颗粒，更不能在免疫后的小白鼠血清中监测出相应抗体的存在；而Cys-402的突变并不干扰病毒样颗粒的形成和免疫原性的发挥。由此可以推测Cys-402及其附近可能存在利于外源基因插入的位点。
- 徐志文胡秋炅郭万柱朱玲王印石恬王小玉
- 关键词：猪细小病毒VP2病毒样颗粒
