江苏省高校自然科学研究项目(04KJB320128)
- 作品数：3 被引量：22H指数：2
- 相关作者：阳东荣单玉喜杨光天高鹏更多>>
- 相关机构：苏州大学附属第二医院苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 双片段survivin短发夹RNA腺病毒载体的构建与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:构建负载双片段survivin短发夹RNA(shRNA)的腺病毒载体,为PCa的基因治疗提供实验基础。方法:分别设计2条靶向survivin基因的shRNA,克隆至穿梭质粒载体中,特异性酶切后亚克隆至腺病毒骨架,构建负载2条survivin shRNA的RNA干扰重组腺病毒载体。提取环状重组病毒质粒进行PCR、酶切双重鉴定后,大规模提取纯化正确的克隆。最后将线性化的重组腺病毒基因组转染至HEK293A包装细胞包装成病毒,并扩增到所需滴度。结果:负载双片段survivin shRNA的穿梭质粒载体pShuttle2经MluⅠ酶切鉴定,证实双片段survivinshRNA插入正确;完成目的片段至腺病毒骨架的亚克隆后,PCR及PI-SceⅠ/I-CeuⅠ双酶切鉴定均证实双片段sur-vivin shRNA插入正确。结论:负载双片段survivin shRNA腺病毒载体构建成功。
- 高鹏单玉喜阳东荣
- 关键词：前列腺癌腺病毒载体SURVIVIN短发夹状RNA
- RNA干扰双位点抑制Survivin基因诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡被引量：19
- 2006年
- 目的研究采用RNA干扰技术抑制雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞中Survivin 基因的表达对PC-3细胞增殖及凋亡的影响。方法设计2条靶向Survivin mRNA的Survivin shRNA,克隆至同一质粒载体,并鉴定分析;质粒转染PC-3细胞,绘制细胞生长曲线;并于转染48 h 后进行Survivin基因蛋白表达及细胞凋亡检测。结果酶切鉴定、测序分析证实负载双片段Sur- vivin shRNA的质粒载体构建成功。转染PC-3细胞后,细胞生长曲线示实验组PC-3细胞增殖明显受抑制;转染后48 h．实验组、阴性对照组、空白对照组Survivin蛋白表达强度分别为(4．62± O．84)％、(38．83±7．96)％和(40．98±3．83)％,实验组与两对照组相比差异均有显著性意义(P< 0．05);转染48 h后PC-3细胞凋亡率开始增加。结论负载双片段Survivin shRNA的质粒载体转染PC-3细胞后能明显抑制PC-3细胞增殖,抑制PC-3细胞Survivin蛋白表达,并能诱导PC-3细胞凋亡。但诱导PC-3细胞凋亡最明显的时机需要进一步观察。
- 阳东荣单玉喜杨光天
- 关键词：前列腺癌SURVIVINRNA干扰
- 负载双片段survivin短发夹状RNA质粒载体的构建与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的:设计构建负载双片段survivin短发夹状RNA(shRNA)的质粒载体,为进行前列腺癌(PCa)基因治疗的研究奠定基础。方法:分别设计2条靶向survivin基因的shRNA,克隆至质粒载体中,再分别提取质粒酶切后回收、连接,构建重组质粒,提取重组质粒酶切鉴定、测序分析。结果:负载不同单片段survivinshRNA的质粒载体分别用EcoRⅠ及SacⅠ酶切鉴定,证实设计的2条单片段survivinshRNA已经分别插入目的质粒中;基因重组后,重组质粒载体用BamHⅠ酶切鉴定,证实双片段survivinshRNA均已插入重组质粒载体中;测序结果证实重组质粒载体插入的双片段survivinshRNA序列均正确无误。结论:负载双片段survivinshRNA的RNA干扰重组质粒载体构建成功。
- 杨光天单玉喜阳东荣
- 关键词：前列腺肿瘤SURVIVINRNA干扰短发夹状RNA
