广东省医学科学技术研究基金(A2009433)
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 相关作者：李宇纪影畅胡志奇林常敏高建华更多>>
- 相关机构：汕头大学医学院第一附属医院南方医科大学南方医院汕头大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 靶向Wnt10b的小干扰RNA抑制胚胎皮肤毛囊发育的初步研究被引量：2
- 2012年
- 目的 利用小干扰RNA（siRNA）抑制皮肤Wnt10b基因的表达,观察Wnt10b基因沉默能否抑制毛囊的发育并探讨其潜在机制.方法 化学合成siRNA-Wnt10b,将siRNA转染体外培养的胎鼠背部皮肤,荧光定量PCR检测转染后不同时间段皮肤组织Wnt10b和p-连环蛋白（β-catenin） mRNA的表达,Western blot检测转染后72 h皮肤组织的Wnt10b和β-catenin蛋白含量.将转染后72 h的皮肤组织石蜡包埋、切片,HE染色,镜下观察各组毛囊发育情况并做统计学处理.结果 siRNA-Wnt10b转染后的24、48 h,胎鼠背部皮肤Wnt10b mRNA的表达呈不同程度下降；但β-catenin mRNA表达未随Wnt10b mRNA水平的起伏而明显波动；转染后72 h,Wnt10b蛋白和β-catenin的蛋白表达同时减少,新形成毛囊数量也随之减少（t=3.254,P=0.002）.结论 在体外器官培养的环境中,siRNA-Wnt10b能够抑制胎鼠背部皮肤组织Wnt10b蛋白的表达,减少新形成毛囊的数量；Wnt10b可能只在蛋白水平上调控细胞β-catenin的表达.
- 纪影畅李宇鲁峰胡志奇王森林常敏高建华
- 关键词：毛囊器官培养技术
- 人Wnt10b基因真核表达载体的构建及表达鉴定
- 2011年
- 目的:利用基因工程技术构建人Wnt10b基因的pEGFP-N1-Wnt10b真核表达载体,观察其在COS-7细胞中的表达。方法:以pUC19-Wnt10b为模板,PCR扩增人Wnt10b基因的cDNA编码区序列,扩增产物和pEGFP-N1载体双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建pEGFP-N1-Wnt10b,酶切和测序鉴定该载体;LipofectamineTM2000将该载体转染入COS-7中,Western blot和免疫细胞化学检测COS-7 Wnt10b蛋白表达。结果:PCR扩增出的人Wnt10b基因cDNA正确克隆到pEGFP-N1载体,成功构建了pEGFP-N1-Wnt10b;将其转染入COS-7,COS-7 Wnt10b蛋白表达明显增高。结论:成功构建了人pEGFP-N1-Wnt10b,这为进一步研究Wnt10b基因功能奠定了前期基础。
- 纪影畅蔡湘娜林常敏李宇
- 关键词：COS-7细胞基因表达
- 大鼠毛囊发育启动阶段模型构建及其Wnt10b／β连环蛋白信号表达的观察被引量：3
- 2010年
- 目的构建适合研究毛囊发育启动的体外培养模型，观察Wnt10b／β连环蛋白信号在毛囊发育初期的表达情况。方法将不同胎龄的SD大鼠胚胎（胎鼠）背部皮肤以明胶海绵为载体，在Dulbecco改良Eagle培养液（DMEM）的气液交界平面中漂浮培养3～6d，HE染色，观察毛囊发育情况；免疫荧光法动态观察Wnt10b及β连环蛋白在毛囊发育初期的表达；将胎龄15d胎鼠背部皮肤在含不同胎牛血清浓度的DMEM中培养，观察胎牛血清对毛囊形态发生的影响。结果（1）胎龄14d后期至15d早期的胎鼠背部皮肤培养效果最好，体外培养3d以内，毛囊的发育保持与体内过程一致，培养3d后毛囊发育逐渐减慢，直至停止于第4阶段；（2）胎牛血清对毛囊的发育没有明显促进作用；（3）在培养的前几天，Wnt10b／β连环蛋白的表达与体内一致，随着培养天数的增加，Wnt10b／β连环蛋白的表达逐渐减弱，在培养的第6天，毛囊的形态发生停止时，Wnt10b／β连环蛋白的表达也随之消失。结论在体外短期培养的胎鼠背部皮肤毛囊发育与体内基本一致，可以作为研究毛囊发育启动的模型；Wnt10b／β连环蛋白信号的表达与毛囊的早期发育密切相关。
- 纪影畅李宇鲁峰胡志奇王森林常敏高建华
- 关键词：毛囊器官WNT信号
- 重组人Wnt10b蛋白的制备及其促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达
- 2012年
- 目的基因工程制备重组人Wnt10b蛋白，观察其促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达。方法以pUC19-Wntlob为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增cDNA，扩增产物和pEGFP—N1载体双酶切，连接酶连接构建pEGFP-N1-Wntlob真核表达载体，酶切和测序鉴定该载体；Lipofectamine^TM 2000将该载体转染入COS-7细胞，计算转染率。Westernblot和免疫细胞化学法检测COS-7细胞Wntlob蛋白表达；将子鼠背部皮肤置于含Wnt10b蛋白的培养液中培养2d，Westernblot法检测皮肤Wntlob和B．连环蛋白的表达。结果PCR扩增出的人Wntlob基因cDNA正确克隆到pEGFP-N1载体，成功构建pEGFP—N1一Wntlob；pEGFP—N1-Wntlob，成功转染COS-7细胞，转染率为20％-40％，转染后COS-7细胞Wntlob蛋白表达较对照组增加（P〈0．05），COS-7细胞分泌的WntlOb蛋白能促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达（P〈0．05）。结论成功制备具有生物活性的重组人Wnt10b蛋白，Wntlob蛋白促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达增加。
- 纪影畅李宇胡志奇蔡湘娜黄铿高建华
- 关键词：COS细胞基因表达
- 大鼠胚胎皮肤毛囊形态发生与Wnt—10b／β-catenin的表达被引量：8
- 2010年
- 目的研究大鼠胚胎皮肤毛囊的形态发生与Wnt-10b／β-catenin信号的表达情况.方法取不同胎龄的SD大鼠胚胎及1～3d新生鼠的背部皮肤，采用石蜡包埋、切片、HE染色，对SD大鼠胚胎毛囊的发生过程及其形态学特征进行描述，同时应用荧比免疫组化染色，观察Wnt-10b及β—catenin在毛囊发育过程中的时空表达。结果在第14、15天时，胚胎背部皮肤逐渐由单层向多层转化，毛囊最早形态发生的时间约为胚胎第15天后期、第16天早期；毛睫基板形成之前，Wnt—10b及β—catenin均匀表达于表皮；当毛囊基板形成后，Wnt-10b及β-catenin仅仅强表达于基板；随着毛囊继续发育，Wnt-10b及β—catenin的表达局限于紧贴“真皮浓缩”的毛囊上皮及毛基质细胞；毛囊之间的表皮未见明显表达，结论SD大鼠背部皮肤毛囊的形态发生很可能始于胚胎第15天后期、第16天早期；Wnt-10b及β—catenin参与调控毛囊发生的启动和进一步发育。
- 纪影畅李宇鲁峰胡志奇王森林常敏高建华
- 关键词：毛囊WNT信号
