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改良大鼠血管平滑肌细胞的原代培养被引量：4: 2011年; 目的探讨提高大鼠血管平滑肌细胞原代培养效率的方法。方法采取组织块贴壁法进行原代培养,高糖DMEM培养基中加入血小板源性生长因子-B(platelet-derived growth factor-b,PDGF-B),用细胞形态学及免疫组织化学法对血管平滑肌细胞鉴定。结果原代培养,4～6天可见细胞长出,2周可以传代;传代培养,1周可以传代1次。镜下可见细胞以梭形为主,呈"峰-谷"状生长,免疫组化染色可见细胞浆内有大量染成棕黄色的肌丝。结论在采用组织块贴壁法进行培养时,加入PDGF-B培养,可获得纯度高、活性好的血管平滑肌细胞,并缩短了培养周期。; 丁洪飞黄胜超李建文陈小东陈宝英吴平; 关键词：血管平滑肌细胞细胞培养

ERK信号转导通路与PDGF-B对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响被引量：10: 2012年; 目的探讨血小板源性生长因子(PDGF)和ERK受体阻断剂在PDGF诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖中的作用。方法健康SD大鼠90只,随机分为5组(正常对照组、单纯损伤组、AG组、PD组、AG+PD组),建立大鼠主动脉球囊损伤模型,利用相应的受体阻断剂Tyrphosin-AG1295和PD98059分别或联合阻断PDGF和ERK受体,于术后7、14及21 d 3个时相点取主动脉进行HE染色,观察PDGF和ERK受体阻滞剂对新生内膜增生的影响;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测PDGF-B mRNA和ERK1 mRNA在血管中的表达变化;免疫组化技术检测血管平滑肌细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;观察各组中PDGF和ERK受体对PCNA表达的影响。结果单纯损伤组及各干预组PDGF-B mRNA在各时相点的表达差异无统计学意义(P>0.05);单纯损伤组血管平滑肌细胞PCNA的表达明显增强,各干预组与单纯损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但各干预组间PCNA表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PDGF和ERK受体阻断剂能降低大鼠动脉平滑肌细胞增殖,ERK信号转导通路可能参与了PDGF诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖。; 张远起陈小东李建文王三明黄水传张智黄胜超许托; 关键词：PDGF ERK/MAPK 增殖

大鼠ERK1/2基因siRNA片段的设计、合成与筛选被引量：2: 2012年; 目的:设计合成干扰细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)基因表达的不同型小干扰RNA(siRNA),筛选出能高效抑制ERK1/2基因表达的siRNA。方法:根据大鼠ERK1/2mRNA的序列,设计合成针对ERK1基因和ERK2基因的siRNA序列各3对,利用脂质体将siRNA转染入大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),实时荧光定量RT-PCR检测ERK1/2mRNA表达水平以确定干扰效果。结果:设计合成的3对ERK1siRNA和3对ERK2siRNA对ERK1/2基因均有一定的抑制作用,ERK1-siRNA1和ERK2-siRNA2在低转染浓度组中的抑制率最高,分别为95.77%和93.23%。结论:成功设计合成了针对ERK1/2基因的siRNA,并从中筛选出能特异且高效抑制ERK1/2表达的siRNA。; 李建文黄胜超陈小东丁洪飞张远起黄水传张智肖雄升; 关键词：细胞外信号调节激酶 RNA干扰小干扰RNA 血管平滑肌细胞基因治疗

RNAi在血管成形术后再狭窄防治中的研究进展: 2010年; 黄胜超李建文; 关键词：血管成形术后再狭窄 RNAI 血管平滑肌细胞增生内皮细胞损伤血管活性物质

RNAi沉默ERK1/2基因表达对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响被引量：2: 2014年; 目的:探讨RNA干扰细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)基因表达对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的影响。方法 :利用脂质体将ERK1/2 siRNA片段转染入VSMCs,实时荧光定量RT-PCR检测ERK1/2 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组ERK1/2蛋白表达量的变化,MTS法检测细胞的增殖情况。结果:RT-qPCR结果显示,干预组的ERK1 mRNA表达量明显下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);干预组的ERK2 mRNA表达量明显下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示,干预组的ERK1/2蛋白表达相对量明显下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。转染24 h、48 h、72 h后,MTS结果显示,干预组细胞的增殖受抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:针对ERK1/2的特异性siRNA能够有效抑制血管平滑肌细胞中的ERK1/2基因表达,并抑制血管平滑肌细胞的增殖。ERK1/2基因被沉默后,对血管平滑肌细胞的增殖有抑制作用,提示RNAi技术沉默ERK1/2可以作为动脉粥样硬化及血管成形术术后再狭窄防治新的研究方向。; 黄胜超陈小东王三明丁洪飞张远起黄水传张智胡小辉李建文; 关键词：血管平滑肌细胞细胞外信号调节激酶1 增殖

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广东省自然科学基金(8152402301000015)