国家自然科学基金(81101818)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：第四军医大学西京医院第四军医大学第一附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人分化抑制蛋白1慢病毒干扰载体的构建、筛选及其沉默效应的鉴定
- 2014年
- 目的探索以小干扰RNA(si RNA)慢病毒干扰载体组建的慢病毒对人Hep G2细胞分化抑制蛋白1(Id1)基因的沉默效应。方法构建4种针对Id1基因不同干扰靶点的Id1-si RNA慢病毒干扰载体(p CGSIL-GFPId1-1、p CGSIL-GFP-Id1-2、p CGSIL-GFP-Id1-3及p CGSIL-GFP-Id1-4),将其转染至293T细胞,以筛选出针对Id1基因的最有效的RNA干扰(RNAi)靶序列。再以沉默效果最优的干扰载体进一步构建慢病毒(Id1-RNAi-LV),感染人Hep G2细胞后,采用实时定量PCR法和Western blot法分别检测其Id1 m RNA及其蛋白的表达水平。结果与p CGSIL-GFP-Id1-1组、p CGSIL-GFP-Id1-2组及p CGSIL-GFP-Id1-3组比较,p CGSIL-GFP-Id1-4组的Id1蛋白表达水平最低(P<0.05),沉默效果最优。以p CGSIL-GFP-Id1-4干扰载体组建慢病毒后,测得慢病毒的病毒滴度为2.0×109 TU/m L。与空白对照组和阴性对照组比较,以组建的慢病毒感染人Hep G2细胞后,人Hep G2细胞中Id1m RNA及其蛋白的表达水平均降低(P<0.05)。结论本实验构建的特异性慢病毒可稳定地介导Id1基因的沉默。
- 丁睿李霄窦科峰
- 关键词：基因沉默HEPG2细胞系肝细胞肝癌
- Id1在人肝癌组织中的表达意义及其与肝癌患者预后的关系研究被引量：2
- 2014年
- 目的 检测Id1蛋白在乙肝相关性肝癌组织中的表达情况,并分析乙肝相关性肝癌患者临床病理学特征与Id1蛋白表达水平的相关性。方法 对113例肝癌标本进行免疫组化染色,并对Id1蛋白的染色结果进行分级。采用统计学软件SPSS 19。0分析乙肝相关性肝癌标本中Id1蛋白表达水平与肝癌临床病理学特征间的相关性以及Id1的表达强度和乙肝相关性肝癌患者预后之间的关系。结果 免疫组化染色发现,在113例肝癌标本中,96例为HBsAg阳性,Id1强阳性38例,Id1弱阳性61例,Id1阴性为14例,Id1高表达水平与肿瘤分化程度和淋巴结转移情况相关;在86例HBsAg阳性且Id1阳性的标本中,Id1的表达强度与HBsAg＞ 200 s/n、较差的肿瘤分化程度、伴门静脉转移相关。Id1高表达组的无瘤生存率和总生存率均较Id1低表达组更差,Id1表达水平、门静脉侵犯、淋巴结转移、肿瘤最大直径是影响总生存时间和无瘤生存时间的相关因素。结论 肝癌标本中,Id1的表达水平与乙肝相关性肝癌患者血清HBsAg水平、肿瘤分化程度、门静脉侵犯等肿瘤恶性表型相关;Id1高表达组患者有较差的预后。
- 丁睿李霄周倜窦科峰
