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以犬2型腺病毒Ⅸ蛋白为基础的展示技术研究: 2008年; 以犬2型腺病毒全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2为基础,通过NcoⅠ和MluⅠ双酶切、Klenow补平,构建了不含外源启动子、大小为979bp的增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因;通过MluⅠ和EcoRⅠ双酶切将含有犬2型腺病毒的Ⅸ蛋白的340bp的片段克隆入pEGFP-C1-dAseⅠ质粒中,构建pEGFP-SIX载体,通过AseⅠ单酶切插入EGFP,即在编码Ⅸ蛋白基因的最后密码子与终止密码子之间按与Ⅸ蛋白编码链相同转录方向插入EGFP基因,获得重组基因组质粒pPolyII-CAV-2-ⅨE(34.3kb)。酶切鉴定结果显示,目的基因均克隆进Ⅸ蛋白中。; 王燕张守峰刘晔扈荣良张乐萃; 关键词：犬2型腺病毒狂犬病病毒重组病毒

犬2型腺病毒的分离鉴定及初步特性分析被引量：3: 2008年; 目的:从长春市某养殖场一病死幼犬子宫中分离、鉴定病毒并分析其特性。方法:样品处理物接种MDCK细胞,病变细胞培养物进行电镜负染观察,对分离的病毒进行细胞敏感谱和红细胞血凝谱测试,并以特异引物PCR扩增鉴定,进行动物回归试验,检测分离病毒的理化学特性。结果:子宫上皮组织匀浆物能使MDCK细胞发生腺病毒典型病变,电镜观察可见二十面体立体对称病毒粒子。病毒增殖能被5-碘脱氧尿苷(5-IUDR)所抑制,对乙醚、胰酶不敏感,对酸(pH 3.0)和热(50℃)有一定抵抗力,能凝集人和大鼠红细胞但不凝集豚鼠红细胞,用犬腺病毒(CAV)特异性引物可扩增出与CAV-2阳性对照相同大小的核酸片段。分离病毒经口鼻接种SN效价为0的2月龄以下幼犬,可使其全部发病,其中3只死亡。结论:从病死幼犬子宫分离获得一株腺病毒,PCR扩增证明其为犬腺病毒2型,命名为CC0710。动物回归试验表明,该病毒毒性较强。; 张洋袁子国姜秋杰刘晔崔艳张守峰扈荣良; 关键词：毒性

狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备与鉴定: 2019年; 用富道苗免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA和间接免疫荧光筛选,有限稀释法克隆,获得了2株针对狂犬病毒糖蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1G8,4G11,其细胞培养上清效价分别为1:128和1:16,小鼠腹水效价分别为3×10-4和6×10-4,ELISA和IFA结果显示,2株单抗均为抗狂犬病病毒糖蛋白的特异性单克隆抗体。两株单抗具有中和活性并且识别不同的抗原表位。这2株单抗的获得为建立狂犬病病毒检测方法及抗体人源化的深入研究提供了强有力的工具。; 程玮于恒智牛文博汤国谦; 关键词：狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体

狂犬病病毒糖蛋白哺乳动物细胞稳定表达细胞系的建立: 2009年; 试验首先根据GenBank上所发表的狂犬病病毒CVS-24株糖蛋白基因序列,设计并合成一对特异性引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),获得糖蛋白全长cDNA,连接在pMD18-T载体上,测序证明克隆的正确性后,将其插入真核表达载体pIRES1neo,构建了糖蛋白单一表达载体pICG,表达质粒通过脂质体转染BHK-21细胞,在G418抗性压力下出现细胞克隆,通过PCR检测,确定启动子与糖蛋白基因在细胞基因组中共同整合。借助W estern blot检测,证明所表达的糖蛋白与狂犬病抗血清有特异的反应性。采用间接ELISA法,筛选出3株高效表达糖蛋白的细胞株,分别命名为ICG1、ICG2、ICG3。; 于恒智张守峰扈荣良张乐萃; 关键词：狂犬病病毒糖蛋白转染

展示狂犬病病毒保护性抗原的重组犬2型腺病毒的构建: 2008年; 本试验以犬2型腺病毒全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2为基础,以8202株狂犬病病毒基因组为模板,通过PCR扩增得到狂犬病病毒糖蛋白膜外区基因(8202-G″)。通过MluⅠ和EcoRⅠ双酶切pPolyⅡ-CAV-2质粒,获得含有Ⅸ蛋白的340bp片段,将其克隆入pEGFP-C1-dAseⅠ质粒中,构建pEGFP-SIX载体,该载体经AseⅠ单酶切插入8202-G″,即在编码Ⅸ蛋白基因的最后密码子与终止密码子之间按与Ⅸ蛋白编码链相同转录方向插入8202-G″基因,获得重组基因组质粒和pPolyII-CAV-2-ⅨG(34.8kb)。酶切鉴定结果显示,目的基因均克隆进Ⅸ蛋白中。; 王燕张守峰崔艳徐振波于恒智扈荣良张乐萃; 关键词：糖蛋白犬2型腺病毒重组病毒

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国家自然科学基金(30571379)