国家自然科学基金(81101812)
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- 主动脉-性腺-中肾区、卵黄囊和循环血来源的CD41^＋细胞分化潜能比较
- 2013年
- 目的比较小鼠胚胎不同造血组织来源的CD41^＋细胞向造血、间质、内皮细胞分化的潜能。方法取小鼠胚胎孕11d主动脉-性腺-中肾（AGM）区、卵黄囊（YS）和循环血（CB）来源的造血细胞经流式细胞术分选获得CD41^＋细胞，并检测CD41^＋细胞中CD45和c．kit的表达；采用IL-3、骨形态发生蛋白4（BMP-4）预处理半固体培养法评估CD41^＋细胞造血分化潜能的差异；采用荧光免疫法检测CD41^＋细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA，间质细胞标志）的表达；采用向内皮细胞分化诱导的培养条件观察其内皮分化潜能。结果在AGM区、YS、CB来源的CD4l^＋细胞中，CD45^＋细胞比例分别为51．9％、45．8％、22．2％，c-kit^＋细胞比例分别为40．0％、39．6％、36．2％。在IL-3刺激后，与未刺激组相比AGM、YS、CB来源的CD41’细胞总的造血细胞集落形成数量均显著增加[（14．1=k1．9）对（1．2＋0．2）；（32．4士1．1）对（18．4士2．2）；（41．84-0．9）对（10．44-1．8）]（P〈0．01）。BMP-4刺激后，与未刺激组相比：AGM、YS来源的CD41’细胞生成CFU-Mix的数量下降[（0．54-0．6）对（3．2士0．8）；（1．3＋0．7）对（7．4土1．7）]（P〈0．01）；但CB来源的CD41^＋细胞生成CFU．Mix的数量无明显变化[（2．54-0．5）对（3．94-1．5）]（P〉0．01）。AGM、YS来源的CD41^＋细胞高表达α-SMA，但CB来源的CD41^＋细胞低表达d-SMA。结论小鼠胚胎不同造血组织来源的CD41^＋细胞在免疫表型、造血细胞集落形成及细胞因子刺激应答方面存在明显差异。
- 李思霆周军年陈海旭谢一帆贺文艳南雪岳文刘兵裴雪涛
- 关键词：白细胞介素3CD41
- 人造血转录因子GATA-1的克隆、表达及其对间质细胞的生物学作用
- 2013年
- 目的:构建人GATA-1全长过表达载体,对其进行过表达,并初步探讨其在人非造血细胞(人脐静脉内皮细胞、人成纤维细胞)中的生物学作用。方法:以人脐带血cDNA为模板,采用高保真PCR获得GATA-1的CDS序列,连接至pGEM-T Easy载体,构建pBPLV-GATA1慢病毒表达质粒,并对上述载体进行NheⅠ、XbaⅠ双酶切和测序鉴定,鉴定正确后,在293T细胞中进行慢病毒包装,浓缩病毒后,对我们原代分离培养的人脐静脉内皮细胞和成纤维细胞进行慢病毒感染,采用流式分选对阳性目的细胞进行纯化,阳性细胞扩增后进行Western印迹鉴定;以人包皮成纤维细胞(HFF)为研究对象,在光学及荧光显微镜下观察细胞形态变化情况,CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞表面标志表达情况。结果:双酶切和测序结果表明克隆了1242 bp的人GATA-1全长CDS序列,经Western印迹检测,GATA-1在293T细胞中获得瞬时表达;获得了人GATA-1稳转细胞株,对稳转细胞株的检测表明,GATA-1对HFF细胞增殖具有一定的抑制作用,但对HFF细胞形态及细胞表面标志CD90、CD29的表达无明显影响。结论:构建了人GATA-1慢病毒表达载体及其稳转细胞株,GATA-1蛋白对间质细胞的增殖有一定的抑制作用。
- 南雪曾泉王静雪张文成房芳王思涵岳文周军年裴雪涛
- 关键词：GATA-1间质细胞增殖
