安徽省高等学校优秀青年人才基金(2009SQRZ070) 作品数:6 被引量:10 H指数:2 相关作者: 王晓春 李朝品 许礼发 张超 尤其 更多>> 相关机构: 安徽理工大学 更多>> 发文基金: 安徽省高等学校优秀青年人才基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 更多>>
淮南市不同生境中主要尘螨变应原的基因检测 2010年 目的检测3种不同生境中尘螨4种变应原。方法于2009年6—8月在淮南地区仓储、居室及公共环境采集样本各40份,提取样本总RNA,RT-PCR合成cDNA,应用PCR特异性扩增Der f 1、Der f 2、Der p 1、Der p 2,并对不同生境中变应原检测结果进行统计学分析。结果从尘螨基因组中特异扩增出大小约646、4559、23、408 bp的基因片段。仓储环境和居室环境中尘螨变应原的检测阳性率均高于公共环境(P<0.05),仓储环境中粉尘螨变应原阳性率较高(Der f 1为65.0%,Der f 2为62.5%),居室环境中屋尘螨变应原阳性率较高(Der p 1为80.0%,Der p 2为62.5%)。结论不同生境中不同尘螨变应原具有较大差异,可能与温湿度差异及尘螨的食性、习性有关。对尘螨基因组进行RT-PCR及PCR检测是简便有效的尘螨变应原检测方法。 王晓春 石连 沈静 李朝品关键词:尘螨 变应原 生境 基因检测 HBsAg诱饵载体的构建、表达及人胰腺cDNA文库的扩增、纯化和转化 2012年 目的构建HBsAg诱饵真核表达载体,并在AH109酵母菌中进行表达,同时扩增、纯化、鉴定及转化人胰腺cDNA文库。方法通过PCR扩增HBsAg基因,克隆到pGEM-T载体,测序正确后酶切并连接至表达载体pGBKT7中,转化酵母菌AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp/Kana)上筛选阳性菌落,提取重组蛋白,经SDS-PAGE电泳后进行Western blot分析。扩增、纯化人胰腺cDNA文库并进行酶切鉴定及生物信息学分析,醋酸锂法将其转入Y187酵母菌。结果成功构建酵母表达载体pGBKT7-HBsAg、SDS-PAGE和Western blot显示重组蛋白在酵母细胞中正确表达;成功构建人胰腺cDNA文库,其容量为4×109 CFU/L,插入片段大小为0.5~2.0kb,长度不均,重组率为100%。结论成功构建HBsAg真核载体并在AH109酵母菌中表达,同时获得高质量的胰腺cDNA文库并转化入Y187酵母菌,为通过酵母双杂交筛选与HBsAg相互作用蛋白基因奠定了基础。 王晓春 许礼发 李朝品关键词:HBSAG 诱饵载体 胰腺 CDNA文库 分子生物学综合性开放实验的探索与实践 被引量:7 2011年 为了探索分子生物学实验教学新模式,提高本科生在实验中应用理论知识的能力,设计了从胰腺癌细胞中克隆弹性蛋白酶(Elastase 3A,ELA3A)基因的综合性开放实验,该实验由学生查阅资料,自行设计,在教师的指导下最终完成。从效果来看,不仅使学生对分子克隆技术有了总体的了解和把握,而且激发了他们对这门学科的兴趣和学习主动性。 王晓春 尤其 许礼发 张超关键词:分子生物学 实验教学 不同种类汽车内尘螨孳生状况及主要变应原检测 被引量:1 2012年 目的调查淮南市3种不同汽车内尘螨孳生状况及检测尘螨主要变应原。方法于2010年5-10月在淮南市的出租车、私家车及公交车上采集尘螨,分离计数并鉴定,应用RTPCR、PCR检测尘螨变应原(Derf1、Derp1、Derf2、Derp2),并对结果进行统计学分析。结果检获尘螨5种,隶属于2科3属。其中出租车中孳生率最高(85.0%),私家车中尘螨种类最多(5种);从尘螨样本中扩增出约646、923、455、408bp的基因片段,出租车中Derp1和Derp2阳性率较高(80.0%和65.0%),私家车中4种变应原阳性率相差不大(45.0%~57.5%),而公交车中4种变应原检测阳性率均不高。结论 3种不同生境中尘螨的孳生率、种类分布及主要变应原检测阳性率差异较大,可能与不同环境中温湿度差异、尘螨习性和人为干扰程度有关。 王晓春 李朝品关键词:尘螨 汽车 孳生 变应原 安徽省不同种类汽车生境仓储螨和尘螨孳生情况及多样性调查 被引量:2 2012年 目的调查安徽省3种不同种类汽车生境中仓储螨和尘螨孳生情况及多样性。方法 2011年5-10月在安徽省合肥等10个城市中选取私家车、出租车、公交车3种生境进行孳生螨类样本的采集、分离、计数、制片鉴定及进行数据分析。结果 600份样本中检出孳生螨类313份,阳性率为52.2%。共检获螨21种,隶属于6科16属。多样性分析结果表明,3种生境中螨平均孳生密度为(11.85±5.01)~(33.60±8.49)只/g,丰富度指数为0.532~1.525,多样性指数为2.264~3.035,均匀度指数为1.050~1.264,优势度指数为0.296~0.414,物种相似性指数为0.381、0.211、0.385。结论私家车环境中仓储螨和尘螨平均孳生密度最高,螨种类最多,物种多样性指数最高,优势度指数最低;出租车和公交车环境中相应数据与私家车中相反,且公交车孳生螨种与私家车的相似度最低。可能与不同种类汽车生境内储藏物、温湿度及人为干扰的差异有关。 王晓春 郭冬梅 李朝品关键词:尘螨 生境 多样性 乙型肝炎病毒核心抗原诱饵载体的构建及酵母表达 2011年 目的构建乙型肝炎病毒核心抗原真核表达载体,并在酵母细胞中进行表达。方法以实验室保存质粒为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增HBcAg基因,克隆到pGEM-T载体。测序正确后酶切并连接至酵母表达载体pGBKT7中,转化酵母菌AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp/Kana)上筛选阳性菌落后大量表达并提取重组蛋白,再进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果成功构建酵母表达载体pGBKT7-HBcAg,Western blot结果显示重组蛋白在酵母细胞中正确表达。结论利用真核表达载体在酵母细胞中成功表达HBcAg蛋白,为研究HBV合并代谢性疾病的机制奠定了基础。 王晓春 许礼发 张超 李朝品关键词:乙型肝炎病毒 HBCAG 真核表达 酵母细胞