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Rac1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定被引量：2: 2012年; 背景:Rac1是通过信号转导来调节癌细胞的侵袭、增殖,它在各种肿瘤中都有表达。目的:构建RAC1基因RNA干扰慢病毒载体,并检测其干扰效率。方法:应用Western blot检测Rac1基因在舌癌细胞中的表达。针对筛选确定的Rac1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经AgeI和EcoRI双酶切后的pMagic4.1载体连接产生短发卡RNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定后将质粒分别和包装质粒混合物共转染293T细胞,采用Real-TimePCR筛靶,将筛靶成功的质粒进行慢病毒包装,再感染Tca8113细胞。荧光定量PCR和Western blot检测鉴定Rac1基因表达的干扰效果以确定其生物活性。结果与结论:成功构建了RAC1干扰载体,Western blot检测显著抑制Rac1蛋白表达,经Real-time PCR检测pLVT447的抑制率达70%。成功的构建了Rac1基因RNAi慢病毒载体,为RNAi用于靶向Rac1的基因治疗舌癌(Tca8113)提供了有效的siRNA靶序列。; 武媛张壮潘剑; 关键词：慢病毒载体 RAC1 RNA干扰 TCA8113 舌癌

舌癌细胞淋巴道转移能力与淋巴管生成的关系被引量：3: 2010年; 目的:诱导建立小鼠淋巴管良性肿瘤模型以及异种移植瘤模型,观察不同淋巴道转移能力的舌癌细胞对淋巴管生成的影响。方法:C57BL/6小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂,对诱导出的小鼠腹腔淋巴管瘤进行病理组织学鉴定。诱导的淋巴管瘤在纤维蛋白凝胶内应用Tca8113和LNMTca8113细胞条件培养基培养,倒置显微镜下观察淋巴管分支形成。此外,利用这2种细胞进行体外成瘤,免疫组化染色观察淋巴管生成情况。实验结果应用SPSS11.5软件包对数据进行分组t检验,Mann-Whitney U检验。结果:实验小鼠中膈肌腹腔面、肝脏表面可见边界清楚的散在分布白色肿瘤样组织,组织学病理证实为良性淋巴管瘤。与Tca8113细胞比较,在LNMTca8113细胞条件培养基作用下,从淋巴管瘤块长入纤维蛋白凝胶内的微淋巴管分支数目增加;在LNMTca8113肿瘤中,淋巴管密度显著提高。结论:小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂可稳定诱导小鼠腹腔淋巴管瘤,高淋巴道转移能力的舌鳞状细胞癌细胞对淋巴管生成具有更强的促进作用,适应淋巴道转移的需要。; 张壮武媛潘剑李一夏辉李龙江; 关键词：舌鳞状细胞癌淋巴管生成淋巴道转移

LNMTca8113舌癌细胞中CCR10下游分子鉴定被引量：2: 2013年; 目的:在LNMTca8113舌癌细胞中获得与CCR10结合的下游分子并进行鉴定。方法:应用免疫共沉淀的方法,获得LNMTca8113舌癌细胞中CCR10的共沉淀产物,通过SDS-PAGE凝胶电泳分离共沉淀产物,显示差异条带。酶切差异条带,蛋白酶水解,进行液相色谱-质谱联用仪检测,对共沉淀产物的肽段进行鉴定。结果:对CCR10下游分子成功地进行了免疫共沉淀及有效的电泳分离,获得了差异表达条带。液相色谱-质谱(LC-MS)联用仪检测,20min-100min之间有样品被洗脱。质谱图观察,峰值正常,肽段二级质谱匹配图显示匹配率较高。按照筛选标准,通过软件检索,发现可信度高蛋白,包括cytoskeletal 1、5、9、10等多个分子。结论:CCR10下游分子包括多个细胞骨架蛋白,与癌细胞的迁移运动密切相关。CCR10与舌癌细胞淋巴结转移关系密切。; 王卓敏李迎春张壮; 关键词：舌癌淋巴结转移免疫共沉淀质谱鉴定

舌癌中淋巴管内皮细胞具有特定的生物学表型被引量：2: 2010年; 目的探讨舌癌细胞对淋巴管内皮细胞(LECs)表型及功能特性的影响以及LECs在舌癌淋巴道转移中的作用。方法 LECs与舌癌细胞进行共培养,模拟肿瘤中LECs的变化。对肿瘤中LECs的生物学行为,如增殖、淋巴管生成及凋亡进行检测。同时,在转录水平对与淋巴管内皮细胞生物学行为改变相关的一组基因应用荧光实时定量PCR进行检测。结果与LECs比较,肿瘤中LECs具有更高的增殖活性、淋巴管生成及抵抗凋亡的能力。肿瘤中LECs中EDIL3、NRP1、ANGPTL4、VEGFR1、VEGFC、VEGFA及FN1在转录水平基因表达明显上调。结论在舌癌细胞的影响下,淋巴管内皮细胞的生物学行为发生了改变,并且伴随着基因表达差异,可能会促进舌癌细胞的淋巴道转移。; 张壮潘剑李一夏辉李龙江; 关键词：舌癌淋巴管内皮细胞淋巴道转移

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国家教育部博士点基金(20090181120036)