国家自然科学基金(YA012003194)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：林少芬唐仕波王琪肖迎黄冰更多>>
- 相关机构：中山大学山东大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Notch1蛋白在胚胎干细胞向神经细胞诱导分化过程中的表达(英文)被引量：4
- 2008年
- 背景:胚胎干细胞是体内各种成熟细胞的"种子"细胞,是神经移植和发育基因功能研究的有利工具。Notch1信号是多种神经细胞有序分化的关键性调控通路,目前对其在胚胎干细胞诱导分化过程中的动态表达尚无报道。目的:探讨胚胎干细胞向神经细胞定向诱导分化过程中,跨膜信号分子Notch1蛋白的表达。设计、时间及地点:细胞观察,于2003-10/2004-10在中山大学中山眼科中心完成。材料:中山大学实验动物中心自建BALB/C小鼠胚胎干细胞Ⅵ株,具备XY染色体,正常核型比例80%以上,由中山大学中山眼科中心黄冰教授惠赠。方法:胚胎干细胞复苏后,加入含20%胎牛血清、106 IU/L小鼠白血病抑制因子的高糖DMEM细胞培养基,置于37℃﹑5%CO2培养箱中,两三天常规消化传代。向传至11代的胚胎干细胞中加入含20%胎牛血清、5×10-7 mol/L维甲酸的高糖DMEM诱导分化培养基,设立诱导1,5,9 d 3个观察时间点。主要观察指标:倒置相差显微镜观察细胞形态变化。免疫荧光化学检测成熟神经元标志性抗原MAP-2的表达。免疫细胞化学、Western Blot法及流式细胞术检测Notch1蛋白的表达。结果:胚胎干细胞呈克隆样生长,至诱导第9天大部分克隆周围为单一密集的神经网络。随着诱导时间延长,胚胎干细胞分化出的MAP-2阳性神经细胞数逐渐增多。胚胎干细胞克隆内的细胞几乎均呈Notch1强阳性或阳性表达,诱导分化后Notch1蛋白的表达随时间延长而逐渐降低(P<0.01)。结论:在胚胎干细胞向神经细胞的诱导分化过程中,Notch1信号逐渐关闭,提示Notch1可能对胚胎干细胞向神经细胞的特异性分化起重要作用。
- 肖迎王琪唐仕波黄冰林少芬
- 关键词：胚胎干细胞细胞分化信号转导NOTCH
- 全神经球贴壁培养法体外长期扩增视网膜前体细胞被引量：1
- 2006年
- 目的:探寻一种既高效又能连续体外扩增视网膜前体细胞(RetinalProgenitorCell,RPC)的培养方法。方法:小鼠胚胎视网膜细胞采取神经球贴壁培养或直接贴壁培养法。神经球贴壁培养时,先经悬浮培养生成富含前体细胞的神经球,然后将低速离心分离出的神经球接种到Poly-D-Lysine包被的培养瓶,在前体细胞培养液中(含FGF-2、EGF和LIF)贴壁培养,头24h在培养液中添加10%的胎牛血清。直接贴壁培养法是将细胞悬液直接接种到预先包被Poly-D-Lysine的培养瓶。免疫组化和FACS分析神经球贴壁培养细胞的干细胞特性和分化能力,并与直接贴壁培养法得到的细胞进行比较。结果:神经球接种到预先包被Poly-D-Lysine的培养瓶后贴附到培养瓶底,逐渐形成贴壁生长的单层细胞。该法能够在体外长期扩增视网膜前体细胞,3个月内细胞能够传代10次以上。在RA诱导分化时,能够生成成熟视网膜细胞,表达视网膜细胞特异性标记。FACS分析和免疫组化染色显示神经球贴壁培养所得细胞在未分化时Nestin阳性率(92%)细胞率以及分化为成熟视网膜细胞的比率(53.7%),均高于直接贴壁培养法获得的细胞。结论:神经球贴壁培养法能够在体外长期大量扩增视网膜前体细胞,能较好地保持干细胞特性,并容易分化为成熟的视网膜细胞,较直接贴壁培养具有较大的优越性。
- 赖平红唐仕波林少芬朱晓波高艺孟晶
- 关键词：视网膜前体细胞细胞培养细胞扩增
