国家自然科学基金(81101896)
- 作品数：9 被引量：24H指数：4
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- 结直肠癌组织中miR-338-3p、SMO的表达变化及意义被引量：7
- 2012年
- 目的观察结直肠癌组织中微小RNA(miRNA)-338-3p(miR-338-3p)与Smoothened(SMO)的表达变化,并探讨其意义。方法 30例结直肠癌患者,手术时留取癌组织及癌旁组织,抽提其中的总RNA及蛋白质,采用实时荧光定量PCR检测标本中的miR-338-3p,用半定量RT-PCR检测SMO mRNA,Western blot检测SMO蛋白。结果结直肠癌组织中miR-338-3p的表达量(2-ΔΔCt)为0.153 7±0.126 4,SMO mRNA的相对表达量为0.371±0.116,SMO蛋白的灰度值为3.195±1.623,癌旁组织分别为0.901 5±0.426 3、0.366±0.117、0.733±0.305,两种组织中的miR-338-3p、SMO蛋白表达量相比,P均<0.01;miR-338-3p与SMO蛋白的表达呈负相关(r=-0.877,P<0.01)。结论结直肠癌组织中miR-338-3p表达明显下调,SMO蛋白表达明显上升;miR-338-3p可能通过转录后基因沉默机制使SMO蛋白表达下降,从而抑制结直肠癌的发生发展。
- 苏桂源孙凯李国新余江
- 关键词：结肠肿瘤直肠肿瘤微小RNA
- 慢病毒介导的具有特定二级结构的microRNA-338-3p抑制剂的构建被引量：2
- 2013年
- 目的构建慢病毒介导的具有特定二级结构的人microRNA-338-3p（miR．338．3p）抑制剂并观察其对结直肠癌细胞侵袭转移能力的影响。方法由miRBase数据库查找获得miR-338-3p成熟序列，设计目的基因片段并人工合成；将miR-338-3p抑制剂序列和pLV-THM载体经双酶切后连接，产生pLV-THM-miR-338-3p抑制剂慢病毒表达载体，双酶切后测序鉴定，筛选阳性克隆；以pLV-THM-miR-338-3p抑制剂、psPAX2和pMD2．G质粒共转染包装细胞293T，包装产生慢病毒并测定滴度。流式细胞仪筛选建立稳定过表达miR-338-3p抑制剂的SW-620亚细胞株，利用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-338-3p表达，Westernblot检测其靶基因Smoothened（SMO）蛋白表达水平，Transwell小室穿透试验检测肿瘤细胞转移能力。结果经双酶切鉴定和测序证实，成功构建了包含miR-338-3p抑制剂的慢病毒表达载体，倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293T表达绿色荧光。稳定过表达miR-338-3p抑制剂的SW-620亚细胞株中，miR-338．3p表达水平显著低于阴性对照组（O．92±0．43比3．71±0．22，P〈0．01），SMO蛋白表达水平明显升高，且肿瘤细胞表现出侵袭转移能力的增强（细胞数78．6±6．9比23．7±4．2，P〈0．01）。结论成功构建了miR-338-3p抑制剂的慢病毒表达载体和稳定低表达miR-338-3p的SW-620亚细胞株，证实miR-338-3p可通过抑制结直肠癌细胞中SMO蛋白表达而抑制肿瘤细胞转移。
- 邓海军孙凯郭琛董泾青李国新
- 关键词：结直肠癌慢病毒
- Relationship between miRNA-338-3p expression and progression and prognosis of human colorectal carcinoma被引量：4
- 2014年
- Sun Kai Su Guiyuan Deng Haijun Dong Jingqing Lei Shangtong Li Guoxin
- 关键词：半定量RT-PCR荧光素酶报告基因逆转录聚合酶链反应WESTERN印迹NORTHERN
- MicroRNA-338-3p在结直肠癌中的表达及其临床意义被引量：4
- 2012年
- 背景与目的:MicroRNA(miRNA,miR)是一类可负性调控基因表达的非编码小RNA,能通过与mRNA分子相互作用阻遏蛋白质翻译或导致RNA降解;且在肿瘤的发生、发展中扮演着重要的角色。本研究旨在探讨microRNA-338-3p(miR-338-3p)在结直肠癌与癌旁组织中差异表达状况及其与临床病理特征和预后之间的关系。方法:选取南方医院2008年9—11月间经手术切除的原发性结直肠癌标本40例,完善相关病理资料;常规抽提肿瘤及对照癌旁组织中总RNA,应用实时荧光定量PCR检测标本中miR-338-3p表达状况,并分析其与临床病理特征及预后的关系。结果:40例结直肠癌与癌旁组织相比,miR-338-3p表达明显下调(0.122 6±0.087 3 vs0.905 8±0.410 5),差异有统计学意义(P<0.01);miR-338-3p表达水平与肿瘤TNM分期(P=0.031)、浸润深度(P=0.001)以及分化程度(P=0.042)有关;miR-338-3p表达水平越低,其3年无进展生存率及总生存率越低。结论:MiR-338-3p可能作为"抑癌基因"参与了结直肠癌的发生、发展,并可作为结直肠癌预后判断的新的生物标志物。
- 苏桂源邓海军孙凯余江李国新
- 关键词：结直肠癌临床病理特征预后
- X线辐射剂量对结直肠癌细胞中microRNA-221和p57^(kip2)表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的探讨不同剂量X线辐射对人结直肠癌Caco2细胞系中microRNA-221(miR-221)和p57kip2表达的影响。方法常规培养Caco2细胞系并分为5组,分别给予不同剂量X线(0、2、4、6和8 Gy)照射,24 h后提取细胞总RNA和蛋白质,应用real-time Q-PCR检测细胞中miR-221和p57kip2mRNA的表达水平,Western blot检测p57kip2蛋白的表达变化。结果 Caco2细胞系在不同照射剂量下,miR-221表达水平随着照射剂量的增加而增加,而p57kip2蛋白表达水平则随着照射剂量的增加而逐步降低,且呈剂量依赖效应,两者差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论放射线辐射剂量可影响结直肠癌细胞中miR-221/p57kip2调控通路,抑制miR-221表达可能会提高结直肠癌细胞的放射敏感度。
- 孙凯张晓槟邓海军钟育波雷尚通区文弢吴承堂
- 关键词：结直肠癌P57^KIP2
- mir-338-3p对结直肠癌细胞侵袭迁移能力及SMO蛋白表达的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对人结直肠癌细胞侵袭迁移能力及Smoothened(SMO)蛋白表达的影响。方法:应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测四种人结肠癌细胞系Lovo、HT-29、HCT116、SW620中miR-338-3p表达状况,并以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为对照。采取脂质体转染miR-338-3p前体(pre-miR-338-3p)至人结直肠癌细胞系SW620,观察细胞转染前后miR-338-3p的表达变化,Transwell侵袭实验及划痕实验检测转染前后细胞侵袭及迁移能力的改变;以Western-blotting和RT-PCR分析SMO蛋白及mRNA表达状况。结果:检测四种结直肠癌细胞系中miR-338-3p表达水平均较正常对照细胞显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01);SW620细胞转染pre-miR-338-3p后,miR-338-3p表达水平升高,SMO蛋白表达下降,同时肿瘤细胞侵袭、迁移能力明显增强,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01);但SMO mRNA表达水平在转染前后差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MiR-338-3p可通过抑制结直肠癌细胞系中SMO蛋白表达从而抑制肿瘤细胞侵袭转移。
- 区文弢孙凯吴承堂雷尚通张晓槟
- 关键词：结直肠癌微小RNA
- 人microRNA-338-3p慢病毒表达载体的构建及其靶基因鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的构建人microRNA-338-3p(has-miR-338-3p)慢病毒表达载体并初步筛选鉴定miR-338-3p的靶基因。方法由miRBase数据库查找获得miR-338-3p前体序列,设计目的基因片段并人工合成;将miR-338-3p前体序列和pLV-THM载体经双酶切后连接,产生pLV-THM-miR-338-3p慢病毒表达载体,双酶切后测序鉴定,筛选阳性克隆;以pLV-THM-miR-338-3p、psPAX2和pMD2.G质粒共转染包装细胞293T,包装产生慢病毒并测定滴度。流式细胞仪筛选建立稳定过表达miR-338-3p的SW-620亚细胞系,利用Real-time RT-PCR检测miR-338-3p表达,Western-blot检测SMO蛋白表达水平,Transwell小室穿透实验检测肿瘤细胞转移能力。结果经双酶切鉴定和测序证实,成功构建了miR-338-3p的慢病毒表达载体pLV-THM-miR-338-3p,倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞293T表达绿色荧光。稳定过表达miR-338-3p的SW-620亚细胞系中,miR-338-3p表达水平显著高于阴性对照组和未处理组,SMO蛋白表达水平明显下降,且肿瘤细胞表现出侵袭转移能力的减弱。结论成功构建了has-miR-338-3p慢病毒表达载体和稳定过表达miR-338-3p的SW-620亚细胞系,初步证实miR-338-3p可通过抑制结直肠癌细胞中SMO蛋白表达而抑制肿瘤细胞转移,此为进一步深入研究miR-338-3p在结直肠癌中生物学功能奠定了基础。
- 邓海军孙凯郭琛李凌李国新
- 关键词：结直肠癌SMOOTHENED慢病毒
- 微小RNA-338-3p对结直肠癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：3
- 2013年
- 目的 观察微小RNA-338-3p（miR-338-3p）对人结直肠癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 构建慢病毒介导的miR-338-3p及其抑制剂的表达载体并转染结直肠癌细胞株SW-620,流式细胞仪筛选建立稳定过表达miR-338-3p及其抑制剂的SW-620亚细胞株,利用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-338-3p表达,Western blot检测其靶基因Smoothened（SMO）蛋白表达水平,通过噻唑蓝比色法及流式细胞仪观察细胞的增殖和凋亡状态.结果 经双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含miR-338-3p及其抑制剂的慢病毒表达载体,荧光显微镜下观察可见SW-620细胞表达绿色荧光.稳定过表达miR-338-3p的SW-620亚细胞株中,miR-338-3p表达水平显著高于阴性对照组（相对表达量3.91 ±0.51比2.36±0.44,P＜0.01）,SMO蛋白表达水平明显下降,且肿瘤细胞增殖能力减弱[细胞增殖抑制率（CPIR）：（61.9±5.2）％比（41.6±4.8）％,P＜0.01],细胞凋亡增加.稳定过表达miR-338-3p抑制剂的SW-620亚细胞株中,miR-338-3p表达水平显著低于阴性对照组（相对表达量0.92±0.29比2.36±0.44,P＜0.01）,SMO蛋白表达水平明显升高,且肿瘤细胞增殖能力增强[CPIR：（19.2±3.8）％比（41.6±4.8）％,P＜O.01],细胞凋亡减少；而此种促增殖作用可被anti-SMO-siRNA部分逆转,说明此种生物学效应确由SMO所介导.结论 miR-338-3p可通过抑制结直肠癌细胞中SMO蛋白表达而抑制肿瘤细胞生长.
- 孙凯雷尚通邓海军董泾青李国新
- 关键词：结直肠癌慢病毒
- Anti-microRNA-221通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射增敏性被引量：5
- 2013年
- 目的探讨下调microRNA-221(miR-22 1)表达对人结直肠癌细胞的放射敏感性的影响及其分子机制。方法常规培养人结直肠癌Caco2细胞系,以脂质体转染反义miR-221(anti-miR-221)后,应用实时荧光定量PCR(Real-time Q-PCR)检测Caco2细胞中miR-221和PTEN mRNA表达水平,应用Western-blot分析肿瘤细胞中PTEN蛋白表达变化;不同处理组的肿瘤细胞经照射后,流式细胞仪检测各处理组细胞的死亡情况。结果 Real-time Q-PCR显示转染anti-miR-221后miR-221的表达水平明显下调(P<0.05),同时PTEN蛋白表达增高(P<0.05);流式细胞仪检测可见anti-miR-221转染组及anti-miR-221转染联合照射组死亡细胞比例均明显增多(P均<0.01),转染anti-miR-221可明显提高Cac02细胞的放射敏感性,且此效应能被PTEN-siRNA部分但不完全阻断。结论 Anti-miR-221可通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射敏感性。
- 张晓槟孙凯雷尚通钟育波邓海军区文弢吴承堂
- 关键词：结直肠癌PTEN
