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多效蛋白基因沉默对小细胞肺癌H446细胞中部分肿瘤生长相关基因表达的影响被引量：4: 2010年; 目的观察多效蛋白（PTN）基因沉默后,人小细胞肺癌H446细胞中与血管新生、肿瘤生长、侵袭过程相关的血管内皮细胞生长因子（VEGF）、angiomotin（Amot）、schlafen5（Slfn5）和金属蛋白酶9（MMP-9）4种基因的表达变化.方法利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法检测PTN在H446细胞中的表达.构建干扰PTN表达的慢病毒载体,在293T细胞中包装成病毒后感染H446细胞.RT-PCR检测未干扰细胞组、阴性对照组、PTN抑制组和PTN抑制加化疗组细胞中Amot、Slfn5、MMP-9和VEGF的表达.结果 RT-PCR和Western blot检测结果均表明,PTN基因在H446细胞中高表达.所构建的shRNA序列（GCAGCTGTGGATACTGCTGAA）对H446细胞PTN mRNA表达的抑制效率达72.1%,对PTN蛋白表达的抑制效率为59.2%.FIN基因沉默后,H446细胞中Slfn5和MMP-9的表达分别较阴性对照组上调了165.1%和47.3%,而Amot和VEGF的表达分别较阴性对照组下调了33.1%和26.6%.协同化疗后,上述趋势更为明显.结论通过构建PTN小干扰RNA（siRNA）慢病毒表达载体沉默PTN基因,可以影响H446细胞增殖和转移相关基因的表达变化.; 余勇施敏骅徐迅张增利胡华成; 关键词：多效蛋白

多效蛋白基因的小干涉RNA慢病毒表达载体的构建及其对人小细胞肺癌H446细胞株生长与凋亡的影响: 2010年; 目的构建针对多效蛋白（pleiotrophin，PTN）基因的小干涉RNA（siRNA）慢病毒表达载体并观察其对人小细胞肺癌H446细胞株PTN表达抑制及对细胞生长和凋亡的影响。方法设计4对针对PTN基因的小发夹RNA（shRNA）序列，与Hvthm载体连接，构建慢病毒表达载体LV（1entiviral）-shPTN，连接产物转化到DH5α感受态细胞，阳性克隆测序鉴定。再用LV—shPTN与pRsv—REV、pMDlg—pRRE、pMD2G三种质粒共转染293T细胞，小量包装与纯化产生慢病毒颗粒。感染H446细胞后，用荧光定量PCR及Westernblot法检测PTN的表达。将包含对PTN基因干扰效率最高的序列慢病毒载体进行大量包装、纯化及病毒滴度测定，将包装好的病毒感染H446细胞。实验分为正常未干扰细胞组、阴性对照组、PTN抑制组、化疗组及PTN抑制加化疗组，四甲基偶氮唑盐比色法观察细胞生长，流式细胞仪分析细胞凋亡。结果测序结果与构建慢病毒载体的预期结果一致，对PTNmRNA的最高抑制效率为72％，对胛N蛋白的最高抑制效率为59％。大量包装与纯化后病毒滴度为1×10^8TU／ml。PTN基因抑制组H446细胞活力明显低于正常未干扰细胞组和阴性对照组，基因抑制联合化疗组较单纯基因抑制组及化疗组细胞活力下降，凋亡率增高，并具有浓度依赖性。结论构建PTN RNA干涉载体，转染后可有效降低H446细胞PTN的转录和表达，抑制H446细胞的生长并促进其凋亡，有望成为小细胞肺癌基因治疗的可选择的方法之一。; 余勇施敏骅徐迅胡华成; 关键词：小细胞慢病毒感染多效蛋白

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苏州市“科教兴卫工程”青年科技项目(SWKQ0808)

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