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国家自然科学基金(81372576)
作品数:
1
被引量:2
H指数:1
相关作者:
应松成
沈玉先
方圣云
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安徽医科大学
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
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1篇
2017
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人SAMHD1基因核心启动子区域的初步鉴定和分析
被引量:2
2017年
目的鉴定人不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1(SAMHD1)基因的核心启动子区域,研究SAMHD1的转录调控机制。方法从Hep G2细胞中提取基因组DNA,PCR扩增SAMHD1基因翻译起始位点上游937、667、553、399 bp片段。将扩增出的4个片段连入p MD19-T载体,双酶切鉴定后将DNA条带切胶回收,再连入p GL3-Basic载体中,双酶切及DNA测序鉴定。将包含有4个片段的荧光素酶表达载体与pRL-TK共转染Hep G2细胞,荧光素酶报告基因活性检测并分析4个片段的启动子活性。5'RACE鉴定SAMHD1在Hep G2细胞中的转录起始位点。结果电泳结果显示已经从Hep G细胞中提取出基因组DNA。PCR扩增后电泳结果显示已经扩增出937、667、553、399 bp片段。双酶切后电泳结果显示成功将扩增出的4个片段连入p MD19-T载体。双酶切及DNA测序鉴定已成功构建荧光素酶表达载体p GL3-937、p GL3-667、p GL3-553和p GL3-399。荧光素酶报告基因活性检测显示SAMHD1核心启动子区域位于0^-399区域(ATG前一个碱基为-1)。5'RACE结果显示SAMHD1在Hep G2细胞中转录起始位点位于-101。结论 SAMHD1的核心启动子位于翻译起始位点上游-101^-399区域,为深入研究肝细胞中SAMHD1转录调控机制奠定了基础。
张栋
李苗苗
董阳
刘星赟
应松成
方圣云
沈玉先
关键词:
核心启动子
转录起始位点
转录调控
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