江苏省自然科学基金(BK2006008)
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：南京大学医学院附属鼓楼医院南京医科大学东南大学更多>>
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- 新型多层平板型生物人工肝治疗急性肝功能衰竭犬的疗效被引量：2
- 2011年
- 目的 评价新型多层平板型生物人工肝治疗急性肝功能衰竭动物的疗效.方法 以新鲜猪肝细胞及猪骨髓基质干细胞为细胞来源,共培养于新型多层平板型生物反应器内,从而构建一种新型的生物人工肝.采用D-氨基半乳糖给药方式构建犬急性肝功能衰竭模型,实验组（n=8）给予生物人工肝治疗;对照组（n=8）仅给予一般监护.观察和检测所有动物一般情况、生化指标及生存率.结果 实验组动物经生物人工肝治疗后,肝性脑病及一般精神状况均得到较明显改善,丙氨酸氨基转移酶从（ 1512±183） U/L降至（86±25） U/L;天冬氨酸氨基转移酶从（1472±365） U/L降至（46±1l）U/L;乳酸脱氢酶从（463±76） U/L降至（312±84）U/L;总胆红素从（28.8±6.2） μmol/L降至（12.5±3.6） μmol/L;血氨从（56±15）μmol/L降至（34±10） μmol/L,同时凝血功能及白蛋白水平亦得到改善.8条犬中,5条存活、3条死亡,治疗过程中未出现严重并发症.对照组动物一般情况未见明显改善,各项化验指标呈逐渐加重趋势,最终8条犬中5条死亡,3条存活.但两组生存率的差异无统计学意义（P=0.294）.结论 新型多层平板型生物人工肝对急性肝功能衰竭动物具有显著疗效,是治疗急性肝功能衰竭的一种有效支持手段.
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- 关键词：肝功能衰竭急性共培养
- 组合式生物人工肝治疗犬急性肝功能衰竭被引量：3
- 2012年
- 目的观察新型组合式生物人工肝治疗急性肝功能衰竭犬的作用。方法D-氨基半乳糖给药构建犬急性肝功能衰竭模型，实验分组：组合式生物人工肝治疗组（n=8）；生物人工肝治疗组（n=8）；非生物人工肝治疗组（n=8）；对照组（n=8）。观察和检测所有犬一般情况、生化指标及生存率，同时进行安全性评价。结果组合式生物人工肝其有良好的解毒及合成功能。4组犬的生存率分别是87．5％、62．5％、50．O％、37．5％，仅组合式生物人工肝组与对照组之间差异有统计学意义（P〈0．05），其余各组差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论组合式生物人工肝对治疗急性肝功能衰竭具有良好的疗效。
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- 关键词：生物人工肝急性肝功能衰竭
- 壳聚糖支架上猪肝细胞的内源性逆转录病毒分泌被引量：2
- 2011年
- 由于肝移植受供体短缺的限制，基于功能肝细胞的生物人工肝（BAL）有望成为等待肝移植患者的过渡性治疗手段，但已有的BAL临床试验结果并不理想。如何通过合适的支架材料提高肝细胞体外功能一直是该领域的研究热点[1]。在此方面，我们研发的壳聚糖支架在体外研究中显示了良好的细胞附着性和生物兼容性，能有效提高肝细胞功能[2]。
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- 关键词：逆转录病毒内源性肝细胞壳聚糖支架
- 膜截流分子量在新型生物人工肝免疫安全性中的作用研究
- 2012年
- 目的探讨膜截流分子量对新型生物人工肝（bioartificialliver，BAL）支持系统免疫安全性的影响。方法应用D氨基半乳糖静脉滴注比格犬建立肝功能衰竭模型。急性肝功能衰竭犬根据BAL隔离膜截流分子量的大小分为两组：A组：200kD组；B组：1200kD组。两组均接受新型2次BAL治疗，每次6h。观察各组体内IgG、IgM、50％补体溶血单位（CH50）变化及反应器内抗体漏过情况。结果在第一次BAL治疗后两组的IgG和IgM水平均没有发生明显的变化。在第2次治疗后第7天，1200kD组的IgG和IgM水平明显升高，200kD组IgG和IgM水平仍未出现明显上升或下降。在第一次BAL治疗后，两组CH50都出现暂时性的下降，在治疗后1h达到最低值，而后缓步上升，在7d后恢复至治疗前水平。反应器内培养液中IgG、IgM及CH50检测结果显示，1200kD组在治疗结束后IgG、IgM及CH50含量显著高于200kD组。结论膜截流分子量可能是影响BAL异种免疫排斥的重要因素之一。
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- 关键词：生物人工肝猪肝细胞
- 猪内源性逆转录病毒透过生物人工肝的影响因素被引量：3
- 2012年
- 目的病毒安全性是猪源性生物人工肝（BAL）不可忽略的安全问题。本研究旨在探讨影响BAL中猪内源性逆转录病毒（PERV）透过的因素。方法构建双循环的新型猪源性BAL。两循环间采用膜孔径为10nm、20nm、30nm和35nm的血浆成分分离柱以及500nm膜孔径的血浆过滤柱分隔两循环。反应器内填充共培养的猪肝细胞-骨髓间充质肝细胞或原代猪肝细胞并连续循环72h。每12h抽取内、外循环内培养液检测PERVRNA、逆转录酶（RT）活性以及其体外感染性。结果血浆过滤柱组中，内外循环内PERV检测结果完全相同，提示500nm血浆滤过柱对PERV并无阻隔作用。在血浆成分交换柱各组中，各时间点内循环中均能检出RNA和RT活性，但是外循环中并未检出RT活性，而且随着膜孔径减小，RNA的检出时间逐渐延迟，且内循环RNA水平逐渐增加。各培养液均未发现能够体外感染HEK293细胞。结论膜孔径、循环时间以及内循环病毒浓度是影响BAL中PERV透过的主要原因。
- 韩冰施晓雷袁献温肖江强张悦檀家俊顾忠泽丁义涛
- 关键词：猪内源性逆转录病毒生物人工肝膜孔径
- 采用纳米支架材料的新型多层平板型生物人工肝的免疫安全性研究被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨新型生物人工肝(BAL)系统的免疫安全性。方法:采用自制纳米支架材料的新型多层平板型生物反应器与猪肝细胞-骨髓间充质干细胞共培养体系构建新型的BAL系统。正常比格犬接受新型BAL体外循环灌注6 h,期间定时收集BAL系统中的血液及培养液。ELISA法检测培养液及术前、术中、术后血浆中IgG,IgM及CH50(C3)水平;检测外循环前后的血常规情况;免疫荧光法检测术后反应器内细胞材料表面以及犬心、肝、脾、肺、肾等器官免疫蛋白的沉积情况。结果:经过6 h的体外循环灌注,犬体内IgG,IgM免疫抗体水平术中、术后均未出现明显的升高或下降,而术中补体CH50水平出现一过性下降,但很快恢复至正常水平,且并未发生严重的过敏反应及排斥反应,反应器内培养液中检出极少量的IgG和CH50;血常规检测显示,术后白细胞、血小板及淋巴细胞未出现明显的升高或降低;术后反应器内细胞材料表面仅有微量的IgG与C3沉积,各重要脏器均未检测到IgG,IgM及补体C3的沉积。结论:新型BAL系统具有良好的免疫安全性。
- 张悦施晓雷韩冰顾劲扬褚薛慧肖江强任昊桢檀家俊丁义涛
- 关键词：共同培养技术免疫肝细胞
- 膜截流分子量对新型生物人工肝支持系统内细胞材料影响的实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的 探索膜截流分子量对新型生物人工肝（bioartificial liver，BAL）支持系统内细胞材料功能的影响。方法 选用200×10。和1200×10。两种不同膜截流分子量的半透膜作为BAL隔离膜。正常比格犬接受新型BAL治疗6h，定时收集BAL系统中培养液。观察各组细胞活力及功能变化。结果200×10。组细胞活力保持在90％左右，明显高于1200×10。组的22％。细胞功能检测显示，200×10^3组细胞白蛋白分泌水平及尿素合成分别为53．3μg／10。细胞和3．6μg／10。细胞，显著高于1200×10。组的5．6μg／10^6细胞和0．3gg／10^6细胞。1200×10^3组反应器内免疫球蛋白分子浓度显著高于200×10^3组，免疫荧光试验进一步证实了上述结果。结论 降低BAL膜截流分子量可以有效减少免疫球蛋白分子的透过，从而维持BAL中细胞材料的功能。
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- 关键词：生物人工肝
- 壳聚糖纳米纤维支架对猪肝细胞分泌猪内源性逆转录病毒的影响
- 2011年
- 探讨壳聚糖纳米纤维支架对肝细胞的PERV分泌量以及其感染性的影响。将新鲜分离的猪肝细胞接种于壳聚糖纳米纤维支架或普通条件下连续培养7 d,分为实验组(Nano组)和对照组(Hep组)。每天收集培养液检测逆转录酶(RT)活性,并通过RT-PCR和实时定量PCR测定PERV RNA水平。通过western blot检测细胞裂解液中PERV gag 30蛋白含量。细胞培养液体外孵育HEK293细胞以测定其感染性。结果表明:实时定量PCR、RT活性以及western blot具有相似的变化趋势。在体外培养10 h和2 d出现PERV分泌高峰然后逐渐下降。除第6 dPERV RNA水平和第5 d蛋白水平实验组明显高于对照组外,其余均无明显差异。体外感染实验无HEK293细胞感染。壳聚糖纳米纤维支架会延长猪肝细胞的PERV分泌时间但对分泌量以及体外感染性并无明显影响,可安全用于生物人工肝。
- 韩冰施晓雷肖江强张悦褚薛慧顾劲扬顾忠泽丁义涛
- 关键词：猪肝细胞猪内源性逆转录病毒生物人工肝
