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肿瘤细胞来源胞外体的形态学参数分析被引量：1: 2015年; 目的获得并分析肿瘤细胞来源胞外体的形态学参数。方法收集喉表皮样癌细胞（Hep-2细胞）培养上清,蔗糖/重水密度梯度超速离心法分离纯化胞外体,透射电镜鉴定胞外体;应用计算机数字图像分析系统测量胞外体的长径、短径、周长、面积,计算其体积、等效直径及圆球度;应用SPSS数据处理软件（19.0版本）对采集到的数据进行统计学分析。结果测量胞外体518个。胞外体长径均值为131.10nm,75.68%的长径在100～150nm之间,95%置信区间128.64～133.54nm;短径均值为88.71nm,65.83%的短径在75～105nm之间,95%置信区间86.83～90.51nm;周长均值为411.49nm,76.25%的周长在320～490nm之间,95%置信区间404.79～418.10nm;面积均值为12237.87nm2,63.71%的面积在8 000～13 000nm2之间,95%置信区间11820.41～12655.24nm2;等效直径均值为61.41nm,94.98%的等效直径在43～80nm之间,95%置信区间60.40～62.32nm;圆球度均值为1.34,63.89%的圆球度在1.12～1.52之间,95%置信区间1.28～1.31。结论利用计算机数字图像分析系统可获得胞外体长径、短径、周长、面积、等效直径、圆球度形态学参数。形态学参数的建立为量化胞外体的大小及胞外体鉴定提供了数字化资料。; 葛安兴傅方洁贾德功王雪莲; 关键词：胞外体

ELISPOT检测人乳头瘤病毒特异性的记忆T细胞被引量：1: 2011年; 应用ELISPOT方法检测人乳头瘤病毒感染后自发清除者外周血中抗原特异性的记忆T细胞。收集人乳头瘤病毒(HPV)感染后自发清除者外周血(病毒清除后74个月),分离外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cells,PBMC)。体外应用已鉴定的表位肽刺激PBMC,10 d后计数细胞,去除表位肽,继续培养。第11天,ELISPOT方法检测PBMC中HPV抗原特异性的记忆T细胞。PBMC经表位肽刺激10 d后,细胞数量有明显增加,由最初的4.1×105增加为4.2×106。第11天,细胞数量增加为4.65×106,为抗原刺激前细胞数的11.3倍。ELISPOT结果显示,PBMC中的记忆T细胞活化后,能够识别抗原递呈细胞递呈的抗原肽,并分泌IFN-γ。此HPV自发清除者外周血中抗原特异性的记忆T细胞的频数为0.007%。人乳头瘤病毒(HPV)感染后自发清除者外周血存在抗原特异性记忆T细胞,抗原肽可激活记忆T细胞,使之数量增加,分泌IFN-γ。ELISPOT可用于检测外周血中HPV特异性的记忆T细胞。; 王雪莲卢岩安春丽; 关键词：ELISPOT 人乳头瘤病毒记忆T细胞

痘苗病毒转移载体pSC65-HPV18 E6、E7的构建及鉴定: 2012年; 目的构建及鉴定含有人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型E6、E7基因的痘苗病毒转移载体pSC65-HPV18 E6、E7。方法以HPV18型全基因质粒为模板,PCR扩增HPV18 E6、E7基因,克隆到痘苗病毒转移载体pSC65中,获得重组转移载体pSC65-HPV18 E6、E7。重组转移载体转化大肠杆菌,挑取孤立菌落PCR初步筛选。选择阳性菌落提取质粒,酶切及测序鉴定。结果阳性菌落质粒酶切结果显示有340bp、500bp大小的目的基因片段,表明为重组转移载体。测序结果证实重组转移载体包含HPV18 E6、E7基因。结论成功构建包含HPV18 E6、E7基因的痘苗病毒转移载体pSC65-HPV18 E6、E7,研究结果为进一步构建包含HPV18 E6、E7基因的重组痘苗病毒奠定基础。; 王雪莲张晓娇赵峰安春丽; 关键词：人乳头瘤病毒痘苗病毒

环状RNA及其与肿瘤关系的研究进展被引量：2: 2016年; 环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种广泛存在于真核细胞中、具有稳定环状结构的内源性RNA,在基因的表达调控方面发挥重要作用。作为非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)中的新成员,其形成、功能和作用机制等受到广泛关注。本文介绍了circRNA的形成方式、功能,并总结了circRNA在肿瘤发生发展过程中发挥的生物学作用。; 陈畅王雪莲; 关键词：非编码RNA 肿瘤

人乳头瘤病毒特异性T细胞系细胞冻存后细胞的存活率及功能被引量：1: 2014年; 研究人乳头瘤病毒特异性 T 细胞系细胞冻存后细胞的存活率及功能。应用包含10%二甲基亚砜、90%小牛血清的冻存液冻存6个 T 细胞系（5个 CD4 T 细胞系，1个 CD8 T 细胞系）细胞，液氮中冻存32~54个月后复苏，台盼蓝染色法检测复苏后 T 细胞系细胞的存活率，用酶联免疫斑点法（enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT）检测复苏后 T 细胞系细胞的功能。结果显示，6个 T 细胞系细胞液氮冻存解冻后细胞的存活率为24.7%~93.5%，过夜培养后细胞的存活率为2.5%~72.2%。CD8 T 细胞系细胞的存活率高于 CD4 T细胞系细胞。6个复苏后的 T 细胞系细胞在 PHA 诱导后均能分泌 IFN-γ。人乳头瘤病毒特异性 T 细胞系细胞冻存复苏后能够保持较好的存活率和功能。; 王雪莲葛安兴腾秀志; 关键词：细胞冻存人乳头瘤病毒

shRNA抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因表达的研究: 2012年; 应用短发夹RNA(Short hairpin RNA,shRNA)表达载体抑制宫颈癌Hela细胞株HPV18 E6、E7基因的表达。应用已鉴定的shRNA表达载体pHPV1、pHPV2转染Hela细胞,G418筛选阳性细胞,建立稳定转染细胞株;倒置荧光显微镜检测转染情况;提取细胞内总RNA,RT-PCR方法检测HPV18 E6、E7 mRNA;WesternBlot检测HPV18 E6、E7蛋白表达的变化;采用灰度分析软件对PCR扩增条带与蛋白质条带进行灰度分析。pHPV1实验组细胞内HPV18 E6、E7 mRNA含量分别为阴性对照组的31%、38%,E6、E7蛋白分别为阴性对照组的37%、31%;pHPV2实验组细胞内HPV18 E6、E7 mRNA含量分别为阴性对照组的54%、77%,E6、E7蛋白分别为阴性对照组的52%、83%。pHPV1、pHPV2表达载体能抑制Hela细胞HPV18 E6、E7的表达,针对外显子区434-452的pHPV1抑制作用更强。; 王雪莲卢岩韦苇杨雪安春丽; 关键词：人乳头瘤病毒18型 E6基因 E7基因

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国家自然科学基金(81101989)