吉林省科技厅国际合作项目(20070719)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：甄园丽李江杨南扬李晓萌张俊芳更多>>
- 相关机构：东北师范大学吉林大学口腔医院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅国际合作项目教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒的构建与蛋白表达被引量：3
- 2009年
- 目的:通过基因重组方法构建pCMV-Myc-PIASxβ质粒,在真核细胞中高效表达重组蛋白并进行检测。方法:用SalⅠ和NotⅠ将PIASxβ片段从pGADT7载体中酶切后,利用DNA重组技术将其定向插入pCMV-Myc载体中。获得正确重组质粒后,瞬转CHO细胞系,用Western blotting检测Myc-PIASxβ重组融合蛋白表达。结果:经过酶切,片段回收,连接转化,获得重组质粒。重组pCMV-Myc-PIASxβ克隆通过酶切和测序鉴定其正确性。EcoRⅠ酶切鉴定,pCMV-Myc-PIASxβ为一条大小5 641 bp的条带;XbaⅠ酶切鉴定,pCMV-Myc-PIASXβ为2条大小分别为3 291和2 349 bp的条带,符合预计大小。Western blotting检测证实,在相对分子质量68 000处(PIASxβ融合蛋白)有特异的蛋白表达条带,与重组质粒相符。结论:成功构建了pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒,为深入研究PIAS家族的功能奠定良好的基础。
- 李江张俊芳甄园丽杨南扬李晓萌
- 关键词：重组质粒基因表达
