广州市科技攻关项目(2006Z3-E0401)
- 作品数：13 被引量：37H指数：3
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- 不同重组人造血细胞生长因子在髓系白血病骨髓细胞染色体检测中的应用
- 2009年
- 目的:探讨不同造血细胞生长因子对髓系白血病细胞染色体形成的能力、可能机制及其应用价值.方法:用含不同重组造血细胞生长因子(包括白细胞介素3,粒-巨噬细胞集落刺激因子和粒细胞集落刺激因子)的培养液体外分别培养22例髓系白血病的骨髓细胞24h,G显带染色观察其染色体形成情况.结果:7例急性髓系白血病(AML)中,IL-3对4例有刺激作用,GM-CSF对3例刺激作用,G-CSF对2例有刺激作用;异常核型检出率为57.1%(4/7).15例慢性髓系白血病(CML)中,IL-3对4例有刺激作用,GM-CSF对9例有刺激作用,G-CSF对8例有刺激作用;异常核型检出率为100%.结论:造血生长因子对不同患者白血病细胞染色体形成能力的影响差异很大,IL-3对AML作用较大,GM-CSF和G-CSF对CML作用较大.多数患者的骨髓细胞染色体形成不同程度地需要一种或几种造血生长因子的刺激.
- 杜庆锋张嵩丘信葵刘晓力
- 关键词：造血细胞生长因子髓系白血病染色体
- FA方案用于急性髓系白血病不同治疗阶段疗效分析被引量：1
- 2008年
- 目的:评价氟达拉滨联合阿糖胞苷(FA)方案对急性髓系白血病(AML)不同治疗阶段的临床疗效。方法:根据应用FA方案治疗阶段将75例AML患者分为4组:①第1个疗程诱导化疗未缓解组21例;②2次及2次以上诱导治疗未缓解组21例;③早期复发组14例;④晚期复发组19例;其中后3组为难治复发性AML,比较不同组间疗效。结果:4组患者的完全缓解(CR)率分别为81.0%(17/21)、42.9%(9/21)、28.6%(4/14)及31.6%(6/19)。第1疗程诱导化疗未缓解组CR率明显高于复发难治性AML的CR率35.2%(19/54)(P=0.002)。Logistic回归分析结果显示既往化疗次数与CR率有显著相关性(P=0.027)。主要不良反应为骨髓抑制和继发感染。结论:对于第1个疗程化疗未缓解的AML患者,FA方案可作为一种有效的选择。
- 欧阳凌云刘晓力杜庆锋张钰黄芬张嵩许娜欧阳昭孟凡义周淑芸
- 关键词：急性髓系白血病氟达拉滨阿糖胞苷
- STI571诱导K562细胞耐药机制的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的体外建立对STI571耐药的K562细胞系(简写为K562-R),并对其耐药机制进行初步分析。方法用药物浓度逐步递增的方法培养野生型K562细胞(简写为K562-W)。绘制K562-R生长曲线,MTT法检测STI571、阿霉素(adriamycin,ADR)和三尖杉酯碱(harringtonine,HT)对K562-R的细胞毒作用,Ho-echst33342染色检测STI571对K562-R诱导凋亡作用。流式细胞术检测K562-R的MDR-1表达情况;基因测序检测K562-R的Abl激酶ATP结合区点突变情况;间期荧光原位杂交(interphasal fluorescence in situ hybridization,I-FISH)检测Bcr/Abl融合基因扩增情况。结果生长曲线绘制结果表明K562-R在0.5μmol/L的STI571环境中可呈指数增长;MTT法检测STI571对K562-W和K562-R的半数抑制浓度(50% inhibiting concentration,IC50)分别为(1.64±0.13)μmol/L和(3.32±0.05)μmol/L,K562-R的耐药倍数为(2.04±0.16)倍,而ADR和HT对两种细胞毒性作用均呈剂量依赖性反应,耐药前后差异无显著性(P值分别为0.472和0.108);Hoechst33342细胞凋亡试验表明STI571对K562-W诱导凋亡作用呈剂量依赖性,对K562-R作用减弱。流式细胞术检测K562-R和K562-W的MDR-1表达率分别为2.68%和1.39%(P<0.001),基因测序表明两种细胞Abl激酶ATP结合区序列完全一致;I-FISH检测初步观察K562-R的Bcr/Abl融合信号拷贝数增多(P<0.001)。结论体外成功建立STI571耐药的K562细胞系,其耐药机制可能与Bcr/Abl融合基因扩增有关。
- 张嵩杜庆锋刘晓力李荣樊伟朱红倩王瑜
- 关键词：STI571耐药机制K562细胞系分子靶向药物抗肿瘤药物
- 双色双融合间期荧光原位杂交探针检测慢性髓系白血病伊马替尼治疗患者的肿瘤负荷被引量：3
- 2010年
- 目的研究双色双融合探针间期荧光原位杂交技术(D-FISH)检测慢性髓系白血病(CML)伊马替尼治疗过程中肿瘤负荷的灵敏度、特异性。方法应用D-FISH探针对24例伊马替尼治疗获完全细胞遗传学缓解的CML患者骨髓内残留肿瘤细胞负荷进行检测,并与应用单融合探针FISH(S-FISH)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测结果的进行比较。结果与S-FISH相比,D-FISH较具有更高的灵敏度及特异性。正常对照组中D-FISH的正常分界值为0.73%,而S-FISH为6.24%,差异具有显著性;在24例伊马替尼治疗后患者中,S-FISH检测到7例(29.2%)阳性,而D-FISH检测到13例(54.2%)阳性,且结果与RT-PCR结果高度相关。结论D-FISH由于具有较低的假阳性率与假阴性率,可较灵敏、特异地监测CML伊马替尼治疗过程中肿瘤细胞负荷的变化。
- 杜庆锋张嵩刘晓力孟凡义
- 关键词：慢性髓系白血病荧光原位杂交伊马替尼肿瘤负荷
- 间期荧光原位杂交结合测序分析在慢性髓系白血病慢性期伊马替尼治疗监测中的应用
- 2009年
- 目的:探讨在慢性髓系白血病(CML)慢性期伊马替尼治疗中,间期荧光原位杂交(I-FISH)结合Abl酪氨酸激酶区测序技术对疗效监测、耐药分析及预后判断的意义.方法:应用双色双融合探针I-FISH对18例伊马替尼治疗获完全细胞遗传学缓解的CML慢性期患者骨髓内残留肿瘤细胞负荷进行检测,并对I-FISH检测阳性患者进行ABL酪氨酸激酶区测序分析.结果:双色双融合探针I-FISH的正常分界值为0.73%,18例伊马替尼治疗后患者检测中,8/18(44%)结果阳性;8例I-FISH检测阳性患者测序分析发现2例(25%)出现ABL激酶区点突变,点突变类型为E255K和T315I.结论:联合应用I-FISH和测序分析不仅能较灵敏、特异地监测伊马替尼治疗后肿瘤细胞负荷的变化,并可对药物疗效、耐药情况进行早期分析,有效地指导治疗和判断预后.
- 张嵩杜庆锋刘晓力欧阳昭刘志
- 关键词：伊马替尼
- 酪氨酸激酶抑制剂对T淋巴细胞生物学特性影响的研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨酪氨酸激酶抑制剂（TKI）在体外对T淋巴细胞生物学特性的影响。方法应用尼龙毛柱法分选人外周血T淋巴细胞，加入植物血凝素和抗人CD3单克隆抗体体外培养；运用MTT法检测不同浓度的伊马替尼（imatinjb）、尼罗替尼（nilotib）对T细胞增殖的影响；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测其分泌的细胞因子浓度；通过流式细胞仪检测T细胞表面免疫活性标志；实时荧光定量PCR法检测各组T细胞信号分子P56^lck。mRNA的表达。结果伊马替尼、尼罗替尼对T淋巴细胞增殖活性有抑制作用（P=0），且呈浓度和时间依赖性；各处理组细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-2浓度较对照组低（P=0．03），IL—10浓度在处理组与对照组无差异（P=0．53），且表面活性分子CD25和CD69明显减少（P=0．03，P=0．01），尼戮替尼处理组CD25、CD69表达更低（P=0．05，P=0）；各处理组T细胞信号分子P56^lck。表达水平降低（P=0．03），而尼罗替尼处理组P56^lck。表达更低（P=0．04）。结论有效治疗浓度的伊马替尼、尼罗替尼在体外可能通过抑制T淋巴细胞受体P56^lck的表达进而抑制T细胞的增殖和活性。
- 许娜杜庆锋杨军刘志王霜刘晓力
- 关键词：酪氨酸激酶伊马替尼T淋巴细胞
- 荧光原位杂交联合染色体核型分析在骨髓增生异常综合征诊断中的应用被引量：5
- 2014年
- 目的了解细胞遗传学检查在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断中荧光原位杂交技术(FISH)的应用指征,并探索其可完善的方向。方法随机抽取104例确诊为MDS的患者的骨髓标本进行染色体核型分析和荧光原位杂交,并收集患者临床资料。根据WHO及IPSS对病例进行分组。结果 104例患者常见的染色体异常依照出现的频率由大至小依次是+8,-7/7q-,-5/5q-,t(1)/1q-,-20/20q-,-13/13q-,-17,Y。细胞24 h培养后分裂相不足共14例。分裂相不足病例在IPSS分组中差异无统计学意义(P>0.05)。FISH检查阳性结果:-5/5q-11例,-7/7q-11例,+8 12例,-20/20q-6例,-Y 2例。FISH结果与染色体核型分析结果不符的共4例。结论 MDS的染色体异常异质性高,使得针对特定染色体改变的FISH检查较核型分析阳性率低。FISH适用于核型分析分裂相不足的病例,分裂相足够尤其是复杂核型,患者做FISH检查的意义较小。
- 肖雅娟黄园鹭许娜曹睿廖立斌林榕周璇高冠论宋兰林刘晓力
- 关键词：骨髓增生异常综合征荧光原位杂交染色体核型分析细胞遗传学
- 接合物蛋白磷酸化水平在伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病中的临床意义被引量：6
- 2011年
- 目的 探讨接合物蛋白（CRKL）的磷酸化水平在伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病（CML）中的临床意义.方法 分别采用筑巢式PCR扩增ABL激酶区序列、实时荧光定量PCR法、流式细胞术检测35例CML患者不同时期52份骨髓标本ABL激酶区点突变、BCR-ABL基因转录水平、CRKL磷酸化水平,分析CRKL磷酸化水平与前两者的关系.结果 15例伊马替尼耐药患者中6例（40.0%）检测到ABL激酶区点突变,涉及四种类型氨基酸的改变,分别为Y253H 1例、E255K 1例、T315I 3例、F317L 1例,其中2例（T315I、Y253H）处于急变期,3例（E255K、T315I、F317L）处于加速期,1例（T315I）处于慢性期.初诊组BCR-ABL mRNA水平高于伊马替尼治疗有效组（P=0.01）;伊马替尼耐药组BCR-ABL mRNA水平高于伊马替尼治疗有效组（P=0.03）;伊马替尼耐药组BCR-ABLmRNA水平与初诊组差异无统计学意义（P=0.18）.伊马替尼耐药组与初诊组磷酸化CRKL阳性细胞百分率及平均荧光强度（MFI）均明显升高,两组差异无统计学意义（P=5.130;P=3.178）;但初诊组较伊马替尼治疗有效组患者显著增高（P=0.000;P=0.01）,伊马替尼耐药组较伊马替尼治疗有效组患者显著增高（P=0.000;P=0.02）;磷酸化CRKL阳性细胞百分率、MFI与BCR-ABL mRNA表达水平存在正相关关系（P＜0.05）.结论 应用流式细胞术检测P210BCR-ABL主要底物CRKL蛋白的磷酸化水平,是快速便捷的检测CML患者酪氨酸激酶活性的方法,CRKL磷酸化水平可作为评价伊马替尼治疗CML的疗效指标.
- 许娜欧阳昭杜庆锋王霜杨军王瑜刘晓力
- 关键词：伊马替尼
- 纤维连接蛋白黏附共培养对伊马替尼诱导K562细胞凋亡影响的研究被引量：2
- 2009年
- 多药耐药仍是目前治疗白血病的巨大障碍和亟待解决的难题。传统的多药耐药研究多采用单细胞培养模型，不能很好地模拟肿瘤的生长状态及肿瘤微环境。因此，有必要从微环境介导耐药的角度进一步深入研究白血病细胞多药耐药的生物学背景。有研究显示，α5β1整合素黏附于纤维连接蛋白（Fn）后，可使K562细胞对DNA损伤剂诱导的凋亡产生耐药，我们拟通过Fn黏附培养了解其对K562细胞小分子靶向药物伊马替尼耐药的影响。
- 刘志刘晓力杜庆锋许娜张嵩朱红倩周红升钟敏王霜
- 关键词：K562细胞凋亡纤维连接蛋白白血病细胞多药耐药共培养细胞培养模型
- 急性单核细胞白血病CD56、CD11b表达及临床意义被引量：13
- 2009年
- 目的探讨细胞表面分化抗原CD56、CD11b在急性单核细胞白血病(AML-M5)的表达及临床意义。方法采用流式细胞术,G显带技术进行核型分析,双色混合谱系白血病(MLL)基因探针和间期荧光原位杂交(I-FISH)技术,对113例初治成人AML-M5患者进行免疫学和细胞遗传学检测,并回顾分析其临床资料。结果113例患者中CD56表达率28.32%(32例),CD11b表达率73.45%(83例),CD56+患者高表达CD11b(P<0.01),且CD11b的表达水平与CD56呈正相关(P<0.05);113例患者中异常核型患者占48.67%(55例),其中伴11q23异常者占22.12%(25例);I-FISH检测MLL阳性25例;CD56、CD11b共表达的患者比CD56、CD11b双阴性患者外周血白细胞计数、骨髓原始加幼稚细胞数高(P<0.01);前者多合并异常核型,以累及11q23异常常见(P<0.05);较后者容易出现浸润表现、多为难治性白血病患者(P<0.01);且前者完全缓解率及中位生存期均较后者低(P<0.01);CD56+患者与CD11b+患者相比,前者合并异常核型及难治性白血病较后者多(P<0.05),而在外周血白细胞计数、骨髓原始加幼稚细胞数、髓外浸润、完全缓解率及中位生存期均无差别(P>0.05)。结论CD56+、高表达CD11b的AML-M5患者易出现异常核型,以累及11q23/MLL基因异常多见,易合并髓外浸润,且多为难治性患者,预后较差。
- 许娜刘晓力杜庆锋刘志钟敏林榕宋兰林易正山孟凡义周淑芸
- 关键词：CD56CD11B白血病单核细胞性核型MLL
