重庆市教育委员会科学技术研究项目(KJ090305)
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
- 相关作者：卜友泉宋方洲杨正梅刘革力兰欢更多>>
- 相关机构：重庆医科大学重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市教育委员会科学技术研究项目国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- siRNA介导的Plk1表达沉默对食管癌细胞生长的影响被引量：2
- 2009年
- 在包括食管癌在内的多种肿瘤中,Plk1呈现过表达且具重要预后价值,表明该分子是一个潜在的肿瘤治疗靶点.为了探讨Plk1作为分子靶点用于食管癌治疗的潜在价值,采用siRNA技术抑制Plk1的表达,并观察了其对3株代表性食管癌细胞生长的影响.结果表明:合成的特异性短链Plk1 siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制3株代表性食管癌细胞系中Plk1的表达.同时,siRNA介导的Plk1表达沉默显著抑制了食管癌细胞的生长,细胞活力同时显著下降.另外,Plk1表达被抑制后,大量细胞有丝分裂受到阻滞,并进而发生大规模细胞死亡.这些结果表明,siRNA介导的Plk1表达沉默能显著抑制食管癌细胞的生长,Plk1是一个潜在的用于食管癌治疗的新靶点.
- 杨正梅卜友泉刘革力易发平宋方洲
- 关键词：PLK1SIRNA食管癌细胞生长
- 人HAS3基因核心启动子区域的初步鉴定与分析
- 2012年
- 目的对人HAS3基因的核心启动子区域进行初步鉴定和分析,为深入研究HAS3基因的转录调控奠定基础。方法以前期构建的人HAS3基因启动子荧光素酶报告基因重组体P(-761/-305)为模板,采用PCR介导的基因定点突变技术构建4个不同的系列删除体,并对HAS3启动子区域中的Sp1结合位点和核心启动子元件进行定点突变,构建相应的定点突变重组体;采用荧光素酶双报告基因分析技术检测各重组体的启动子活性。结果构建了P(-761/-569)、P(-563/-305)、P(-490/-305)和P(-433/-305)4个系列删除体和5个定点突变体;启动子活性分析结果表明,P(-761/-569)无启动子活性,P(-563/-305)、P(-490/-305)和P(-433/-305)均具有较强的启动子活性,Sp1结合位点和核心启动子元件的定点突变可导致HAS3启动子活性的降低。结论 HAS3基因的核心启动子区域主要位于其转录起始位点上游附近-433～-305 bp内,Sp1可能在HAS3的转录调控中起重要作用。
- 吉颖刘竹艾青朱江谢濛宇翁华莉刘革力宋方洲卜友泉
- 关键词：启动子转录调控
- 新基因PRR11与FAM33A共享双向启动子区域的鉴定与初步分析
- PRR11基因是我们最近鉴定的一个参与细胞周期和细胞增殖调节的肿瘤相关新基因。生物信息学分析表明,该基因的上游邻接基因FAM33A也是一个最近鉴定的参与细胞增殖和细胞周期的肿瘤相关新基因,且这两个基因的转录方向恰好相反,...
- 卜友泉杜刚兰欢艾青崔涛易发平刘革力宋方洲
- 关键词：启动子转录调控细胞周期
- 文献传递
- 抑制Plk1表达对食管癌细胞化疗敏感性的影响被引量：1
- 2010年
- 研究食管癌细胞中Plk1表达被抑制后对化疗药物敏感性的影响,为进一步研究开发基于Plk1食管癌分子靶向治疗奠定基础。化学合成法合成特异性的短链Plk1siRNA,脂质体转染法将短链siRNA分别导入3代表性的食管癌细胞系;采用RT-PCR和蛋白质印迹法确认siRNA对Plk1表达的抑制效果;MTT分析观察抑制Plk1表达对食管癌细胞化疗药物敏感性的影响。半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,合成的特异性短链Plk1siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制所使用的3代表性食管癌细胞系中Plk1的表达,抑制程度约90%。MTT分析结果表明,siRNA抑制Plk1表达后,能显著提高3食管癌细胞系对化疗药物阿霉素和顺铂的敏感性。由此证实,siRNA介导的Plk1表达抑制能显著提高食管癌细胞对化疗药物阿霉素和顺铂的敏感性。
- 杨正梅卜友泉刘革力易发平宋方洲
- 关键词：PLK1SIRNA
- 人ACER2基因启动子的鉴定与初步分析被引量：2
- 2011年
- 碱性神经酰胺酶2(alkaline ceramidase 2,ACER2)是一个参与脂质类信号分子神经酰胺代谢的酶分子,在细胞增殖、衰老和凋亡等过程中起重要作用。为了进一步研究ACER2基因的转录调控机制,该研究克隆鉴定了ACER2基因的启动子。首先,应用5'RACE(rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了ACER2基因的转录起始位点。然后,通过PCR定向克隆和定点突变策略,构建了三个长度不同的覆盖ACER2基因5'端侧翼区起始密码子ATG上游约1.3Kb区域的一系列ACER2基因启动子荧光素酶报告基因重组体。启动子活性分析表明ACER2基因启动子定位于转录起始位点附近约670 bp的区域内。转录因子结合位点分析结果表明,ZCER2基因启动子含有Sp1、GATA-1和AP-1等潜在的转录因子结合位点,提示Sp1和GATA-1等转录因子可能参与ACER2基因的转录调控。
- 刘竹艾青兰欢吉颖杨正梅何江宜郝晓璐宋方洲卜友泉
- 关键词：神经酰胺启动子转录调控
- 人PRR11启动子的结构与功能初步分析被引量：9
- 2011年
- PRR11(proline-rich protein 11,PRR11)是我们最近发现的一个新的肿瘤相关基因.初步研究表明,PRR11参与细胞增殖、细胞周期和细胞癌变等多种生物学过程.为了进一步研究PRR11基因的转录调控机制并全面解析其功能,本研究对PRR11基因的启动子进行了克隆鉴定和初步分析.首先,应用5'RACE(rapid amplification of cDNA ends,cDNA末端快速扩增)技术鉴定了PRR11基因的转录起始位点,发现了其具有多个转录起始位点.通过PCR定向克隆和DNA blunting技术,构建了6个相互重叠并覆盖PRR11基因转录起始位点附近约2.0 kb区域的PRR 11基因启动子荧光素酶报告基因重组体.启动子活性分析表明,PRR 11基因启动子主要定位于转录起始位点附近-563 bp～+341 bp的区域内.采用转录因子结合位点预测分析软件分析表明,PRR 11基因启动子缺乏典型的TATA盒,但含有典型的GC盒、CCAAT盒以及潜在的经典转录因子E2F1和MYB的结合位点,提示Sp1、NF-Y、E2F1和MYB等经典转录因子可能参与PRR 11基因的转录调控.
- 艾青卜友泉刘竹兰欢吉颖杜刚杨正梅刘革力宋方洲
- 关键词：PROTEIN启动子转录调控肿瘤相关基因
- NFBD1/MDC1表达沉默对宫颈癌细胞生长与凋亡的影响
- NFBD1/MDC1是一个参与DNA损伤应答的重要分子,近年来的研究也提示其参与肿瘤发生发展。本研究即探讨了对NFBD1/MDC1表达沉默后对宫颈癌细胞生长及凋亡的影响及其分子机制。首先构建NFBD1/MDC1 shRN...
- 袁成福卜友泉黄秀凝程莉汪长东刘革力易发平宋方洲
- 关键词：宫颈癌细胞生长细胞周期细胞凋亡
- 文献传递
- 肿瘤相关新基因PRR11的全长cDNA克隆及其功能初步解析
- PRR11是我们前期研究中发现的一个新的恶性肿瘤候选基因,为进一步对其在细胞周期和肿瘤发生发展中的作用进行深入研究,本研究对其进行了克隆和初步的功能分析。首先以正常人组织cDNA和HeLa细胞cDNA为模板,采用5-RA...
- 兰欢卜友泉崔涛汪长东易发平刘革力宋方洲
- 关键词：肿瘤RACE细胞增殖细胞周期
- 文献传递
- siRNA介导的Plk1表达沉默对COS-7细胞影响的研究
- 2010年
- 目的:研究(Polo-like kinase1,Plk1)表达被抑制后对COS-7细胞的影响,探讨Plk1作为分子靶点用于肿瘤治疗的潜在价值。方法:化学合成法合成特异性的短链Plk1siRNA,脂质体转染法将短链siRNA分别导入COS-7细胞;采用RT-PCR和Western blot法检测siRNA对Plk1表达的抑制效果;采用胎盘兰染色结合细胞计数法、FACS分析siRNA介导的Plk1表达抑制对COS-7癌细胞生长增殖、细胞周期的影响。结果:半定量RT-PCR和蛋白质印迹分析结果表明,合成的特异性短链Plk1siRNA在mRNA和蛋白质水平上均能高效、特异性地抑制COS-7细胞中Plk1的表达。细胞生长分析结果表明,siRNA介导的Plk1表达沉默导致COS-7细胞的生长增殖受到显著抑制。FACS分析结果表明,Plk1表达被抑制后,出现细胞周期停滞,大量细胞呈现sub-G1期时相。结论:siRNA介导的Plk1表达沉默显著抑制COS-7细胞生长增殖,是一个潜在的肿瘤治疗靶点。
- 朱江洪苏玲柯霞兰欢卜友泉
- 关键词：PLK1SIRNA细胞周期细胞生长
- 人NFBD1启动子区域顺式作用元件CHR的定点突变分析被引量：1
- 2010年
- 目的对NFBD1启动子区域顺式作用元件CHR进行定点突变分析,以分析CHR在NFBD1转录调控中的作用。方法以原有NFBD1核心启动子荧光素酶报告基因重组体NFBD1-PS1-325为模板,采用PCR介导的基因定点突变技术对NFBD1启动子区域中的CHR位点进行定点突变,构建相应的CHR定点突变重组体;采用荧光素酶双报告基因分析技术检测各重组体的启动子活性,分析CHR定点突变对NFBD1启动子活性的影响;结合阿霉素处理,分析CHR在DNA损伤后NFBD1转录下调中的潜在作用。结果CHR定点突变后能显著降低NFBD1的启动子活性;CHR定点突变后显著减弱了DNA损伤后NFBD1的转录下调比例。结论CHR参与NFBD1的基础转录调控及DNA损伤后的转录下调。
- 朱江兰欢洪苏玲卜友泉
- 关键词：启动子转录调控顺式作用元件
