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PiggyBac转座子介导EGFP在猪体细胞和克隆胚胎中的表达: PiggyBac转座子是来源于鳞翅目昆虫Trichoplusia ni.的DNA转座子,因其可以携带长达14kb的DNA片段在多个物种的基因组上进行转座,所以可以作为良好的遗传操作工具。本实验以EGFP为标记基因,转座子...; 罗一博张力武美玲朱江刘忠华; 关键词：PIGGYBAC 猪体细胞克隆胚胎转基因; 文献传递

TSA促进转基因猪体细胞核移植胚胎发育和外源基因表达被引量：6: 2011年; 不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。TSA(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙酰化水平,促进表观遗传重编程,提高克隆动物的效率。同时TSA能改变染色质结构,使转录因子易于与DNA序列结合,促进外源基因的表达。文章确定了TSA处理转基因猪成纤维细胞和核移植胚胎的最佳条件,分别为250 nmol/L、24 h和40 nmol/L、24 h,通过进一步正交实验发现,TSA同时处理供体细胞和克隆胚胎可以显著的促进核移植胚胎的体外发育。此外,无论TSA处理转基因猪成纤维细胞或核移植胚胎,都可以提高外源基因的表达水平。; 孔庆然朱江黄波郇延军王峰石永乾刘仲凤武美玲刘忠华; 关键词：TSA 体细胞核移植胚胎发育外源基因表达

外源基因在转基因动物中遗传和表达的稳定性被引量：15: 2011年; 转基因技术经过近半个世纪的发展,已成为当今生物技术研究的热点。近10多年来,与核移植技术的结合,转基因效率大大提高,携带有不同外源基因的不同种类的转基因动物迅速增加。但是,成功获得转基因动物并不是转基因动物研究的最终目的,如何利用转基因技术为人类的需求服务才是科研人员始终面对的课题。在畜牧生产领域,通过转基因技术培育家畜新品种是转基因技术应用的重要体现,在我国这方面已经引起了广泛关注。但迄今为止,外源基因在转基因动物中遗传和表达的稳定性仍然是亟待解决的问题,究其原因,这主要与位置效应、外源基因的表观遗传学修饰和遗传效率相关,文章结合目前的研究进展和本实验室的研究结果,从这3方面阐述其作用机制,期望为转基因动物遗传育种向产业化的迈进提供一定的理论探讨。; 孔庆然刘忠华; 关键词：转基因动物外源基因表达

猪卵泡抑素(follistatin)基因真核表达载体的构建及体外表达: 卵泡抑素(follistatin)又名F S H抑制蛋白,是一种单链糖蛋白。最初人们认为follistatin只是作为激活素(Activin,ACT)的结合蛋白,通过Activin/Follistatin系统来调节动物的...; 姜丹丹牟彦双李慧刘忠华; 关键词：卵泡抑素; 文献传递

猪卵泡抑素(follistatin)基因真核表达载体的构建及体外表达: 卵泡抑素(follistatin)又名FSH抑制蛋白,是一种单链糖蛋白。最初人们认为follistatin只是作为激活素(Activin,ACT)的结合蛋白,通过Activin/Follistatin系统来调节动物的生殖...; 姜丹丹牟彦双李慧刘忠华; 关键词：卵泡抑素; 文献传递

曲古抑菌素A对克隆猪端粒长度的影响: 2012年; 端粒是染色体末端结构,在细胞分裂时随着DNA复制而缩短,体细胞核移植能不同程度地延长端粒长度,但有些克隆动物端粒的长度在体细胞核移植过程中不能有效恢复,因而这些克隆动物就会表现出早衰现象。文章发现克隆东北民猪以及eGFP、Mx和PGC1α转基因克隆猪的端粒长度与核供体成体成纤维细胞相比显著缩短(P<0.05),表明体细胞核移植的重编程过程没能延长细胞的"寿命"。曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)是一种去乙酰化酶抑制剂,有研究表明其能提高某些物种的体细胞核重编程效率。为了使端粒长度有效恢复,文章利用40 nmol/L TSA处理1细胞期猪克隆胚胎24 h,结果发现,与对照组相比,TSA处理能显著地提高克隆胚胎体外发育的囊胚率(16.35%vs.2 7.09%,21.60%vs.34.90%,P<0.05),而且囊胚期端粒长度也得到显著延长(P<0.05)。克隆胚胎移植受体后得到了TSA处理组与非处理组的克隆猪,虽然TSA处理并没有提高克隆效率(1.3%vs.1.7%,TSA vs.control),但端粒长度与对照组和供体细胞相比均显著延长(P<0.05)。猪体细胞核移植不能有效恢复端粒长度,但是TSA处理能有效延长克隆猪端粒长度。; 解炳腾纪光臻孔庆然毛剑石永乾刘世超武美玲王娟刘林刘忠华; 关键词：重编程端粒 TSA

猪Myostatin基因双干扰载体的构建: Myostatin基因是动物肌肉生长发育的负调控基因,对Myostatin基因敲除或抑制其表达,可以使动物的肌肉快速大量的增长。通过基因敲除方法可以完全消除Myostatin基因的表达,但基因敲除方法在猪等大型动物上的应...; 牟彦双姜丹丹李慧尹智刘忠华; 关键词：MYOSTATIN基因 RNA干扰; 文献传递

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转基因生物新品种培育专项(2008ZX08006-002)