国家自然科学基金(30370578)
- 作品数：11 被引量：40H指数：4
- 相关作者：朱大岭吕昌莲叶宏唐晓波韩维娜更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学东北农业大学黑龙江省生物医药工程重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省卫生厅科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 缺氧时15-脂氧化酶在体外牛肺动脉内皮细胞的表达被引量：1
- 2005年
- 目的探讨急性缺氧时,15-脂氧化酶(15-LO)在体外肺动脉内皮细胞的表达部位及程度。方法通过细胞培养,然后牛肺动脉内皮细胞分别缺氧0h、0.5h、1h、2h、3h,在倒置显微镜下观察细胞形态,通过做免疫组化,观察牛肺动脉内皮细胞15-LO的表达情况及表达部位。结果正常情况下,牛肺动脉内皮细胞,倒置显微镜下呈扁平或多角形。通过免疫组化实验可观察到,15-LO在牛肺动脉内皮细胞胞质内有表达,而且在不同缺氧时间均有表达, 15-LO被染成褐色,缺氧0h时胞质内无褐色颗粒。结论缺氧条件下,在体外牛肺动脉内皮细胞15-LO确有表达, 而且随缺氧时间增加,表达增强。
- 金明顺刘慧雯叶宏张翠香单智焱刘东华朱大岭
- 关键词：缺氧肺动脉内皮细胞
- 15-HETE对肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶苏氨酸495位点(eNOS Thr495)磷酸化的影响被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨15-羟化二十烷四烯酸(15-HETE)对肺动脉内皮细胞(pu lm anory artery endothelialcells,PAECs)一氧化氮合酶(endothelia n itric oxide synthase,eNOS)活性的影响。方法:通过测定大鼠离体肺动脉环张力,比较去血管内皮、eNOS抑制剂L-NAME对15-HETE收缩肺动脉的影响;通过免疫沉淀和免疫印迹方法测定牛PAECs经2×10-6mol/L 15-HETE作用后,eNOS Thr 495磷酸化情况;用免疫印迹方法测定15-HETE对牛PAECs eNOS总蛋白表达的影响;用G re iss法检测15-HETE及15-脂氧酶(15-LO)抑制剂CDC和NDGA对牛肺动脉内皮细胞一氧化氮(NO)产量的影响。结果:(1)除去肺动脉内皮后,15-HETE收缩血管作用明显增强(P<0.01)。(2)抑制剂L-NAME 10-4mol/L可使15-HETE收缩肺动脉的作用明显增强(P<0.05)。(3)牛PAECs经2×10-6mol/L 15-HETE作用后,eNOS Thr 495位点磷酸化水平增强(P<0.01)。(4)10-6mol/L 15-HETE可抑制亚硝酸盐(NO2-/NO3-)的产生(P<0.05),抑制内源性15-HETE可明显增加NO2-/NO3-的产量,和对照组相比10-5mol/L CDC组P<0.05,10-4mol/L NDGA组P<0.01。结论:肺动脉内皮细胞eNOS/NO通路参与抑制15-HETE收缩大鼠肺动脉,15-HETE抑制肺动脉内皮细胞eNOS活性,使NO产量(NO2-/NO3-)下降。
- 叶宏吕昌莲朱大岭
- 关键词：一氧化氮血管收缩肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶
- ERK1／2通路参与15-羟二十碳四烯酸收缩缺氧大鼠肺动脉的过程(英文)被引量：5
- 2005年
- 缺氧诱导的15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosateteraenoic acid,15-HETE)是引起肺动脉收缩的重要介导因子。15- HETE引起肺动脉收缩的信号转导途径尚不清楚。本研究旨在确定细咆外信号调节激酶1／2(extracellular signal-regulated kinase-1／2, ERK1／2)信号转导通路是否参与15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉的过程。采用组织浴槽肺动脉环张力检测、蛋白质免疫印迹 (Western blot)和免疫细胞化学方法。制备缺氧大鼠动物模型,成年雄性Wistar大鼠在低氧环境下(吸入氧分数为0．12)正常喂养 9 d。显微分离直径1～1．5mm肺动脉,剪成长为3 mm的动脉环,进行血管张力检测。用ERK1／2 上游激酶(MEK)抑制剂PD98059 抑制ERK1／2活性。结果显示,PD98059可明显抑制15-HETE对缺氧大鼠肺动脉环的收缩作用。在去除内皮的肺动脉环, PD98059仍可明显降低15-HETE的缩血管作用。Western blot和免疫细胞化学结果都显示,15-HETE能促进ERK1／2磷酸化。 由此表明ERK1/2信号转导通路参与15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉的过程。
- 吕昌莲叶宏唐晓波朱大岭
- 关键词：缺氧细胞外信号调节激酶
- 15-羟二十碳四烯酸下调肺动脉内皮型一氧化氮合酶的活性(英文)被引量：2
- 2005年
- 15-羟二十碳四烯酸(15-hydroxyeicosatetraenoic acid,15-HETE)在低氧性肺血管收缩中起着重要作用,低氧肺动脉高压 下调内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS),使一氧化氮(nitric oxide,NO)的产量下降,但目前尚无关 于15-HETE与eNOS／NO相互作用研究的报道。我们通过Wistar大鼠肺动脉环张力、牛肺动脉内皮细胞NO产量、总eNOS 表达及eNOS磷酸化测定等方法对15-HETE与eNOS／NO的相互作用进行研究。首先分离大鼠肺动脉,分为eNOS抑制剂L- NAME组(0．1 mmol／L)、去血管内皮组与内皮完整组,用15-HETE作用大鼠离体肺动脉环,测定肺动脉张力。结果表明, L-NAME组、去除内皮组与内皮完整组分别比较,15-HETE对血管的收缩作用增强,且都有统计学意义(P<0．05)。培养牛肺 动脉内皮细胞,分别用15-HETE、15-脂氧酶(15-lipoxygenase,15-LO)抑制剂[(cinnamyl 3,4-dihydroxy-[alpha]-cyanocinnamate, CDC)利(nordihydroguiairetic acid,NDGA)]处理细胞,通过Greiss方法检测亚硝酸盐含量,间接测定NO产量,与对照组比较, 1 μmol／L 15-HETE 明显降低肺动脉内皮细胞NO水平(P<0．05), 10 μmol／L CDC和0．1 mmol／L NDGA显著增加NO水平(分别 是P<0．05,P<0．01);通过Western blot检测不同时间(5,10,15,20,30,60 min)eNOS的表达情况,结果显示,15- HETE的小同作用时间,没有引起eNOS表达的明显不同;用苏氨酸495位点磷酸化eNOS(Thr495)抗体进行免疫沉淀,再用 总eNOS抗体和15-LO抗体通过Western blot检测磷酸化型含量,间接测定eNOS活性,结果表明15-HETE增强Thr495磷酸 化型eNOS含量。由于Thr495为eNOS抑制性磷酸化位点,因此15-HETE降低eNOS活性。这些数据表明;15-HETE的缩 血管作用有eNOS／NO参与,15-HETE可以通过磷酸化Thr495位点降低eNOS活性,并且首次发现磷酸化eNOS(Thr495)和15- LO之间存在蛋白质相互作用。
- 叶宏毕海荣吕昌莲唐晓波朱大岭
- 关键词：肺动脉收缩内皮细胞内皮型一氧化氮合酶
- 20-羟基-二十碳四烯酸对肺动脉平滑肌细胞凋亡的抑制效应
- 目的研究20-羟基-二十碳四烯酸(20-HETE)对牛肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)凋亡的抑制效应。方法采用细胞毒性实验(MTT)测定细胞活力、hoechst 核染色观察细胞核形态、Annexin V/PI 结合测定定...
- 王志刚李郁梅郑晓东郭蕾唐晓波朱大岭
- 关键词：细胞凋亡
- 文献传递
- 15-HETE对缺氧兔肺动脉平滑肌钾离子通道的影响(英文)被引量：12
- 2004年
- 用肺动脉环和全细胞膜片钳技术研究15-羟化二十烷四烯酸(15-HETE)对缺氧兔肺动脉平滑肌钾离子通道的影响。新出生的幼兔分两组,一组放入吸氧分数为0.12 的低氧舱内;另一组保持正常氧环境。9 d 后, 称重、取肺动脉进行细胞培养并制作肺动脉环。分别加入4-氨基吡啶(4-aminopyridione, 4-AP)、四乙胺(tetraethylammonium, TEA)、glyburide(GLYB)三种特异性钾离子通道阻断剂, 观察15-HETE 对兔肺动脉平滑肌钾离子通道的作用变化,同时采用全细胞膜片钳测定钾电流。结果显示: 5 mmol/L 4-AP 阻断KV通道后可以抑制15-HETE 诱导的缺氧兔肺动脉收缩;TEA和GLYB 分别阻断大电导型钙激活钾通道(BKCa)和KATP通道后并不影响15-HETE诱导的缺氧兔肺动脉收缩; 15-HETE可降低兔肺动脉平滑肌细胞钾电流幅度。上述结果提示: 缺氧兔肺动脉中,15-HETE阻断电压依赖钾通道(KV通道), 引起膜去极化, 可能是缺氧性肺血管收缩的机制之一。
- 韩维娜李湘晖姜著英纪宏宇黄丽军王志敏朱大岭
- 关键词：15-HETE缺氧肺动脉环膜片钳技术
- 15-HETE对肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响被引量：20
- 2005年
- 目的 通过阻断细胞外钙离子 (Ca2+ )内流,观察 15 羟化二十烷四烯酸 ( 15 HETE)对兔肺动脉环收缩张力和肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度 ( [Ca2+ ]i)的影响,探讨缺氧时 15 HETE引起细胞钙动员的机制。方法 采用组织浴槽血管环方法观察L 型钙通道阻断剂硝苯地平和无钙液对15 HETE诱导的兔肺动脉环收缩力的影响;酶法分离培养兔肺动脉平滑肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜测定 15 HETE对细胞内 [Ca2+ ]i的作用。结果 在正常组和缺氧组, 10μmol·L-1硝苯地平和无钙液对 1μmol·L-1 15 HETE引起的肺动脉环收缩均没有影响;培养的 15 HETE组细胞 (正常培养的细胞暴露于 1 μmol·L-1 15 HETE下继续孵育 8min)与正常对照组相比,细胞内 [Ca2+ ]i明显增加 (P<0 05)。结论 15 HETE可引起肺动脉平滑肌细胞 [Ca2+ ]i增加,且此钙来源于细胞内贮钙库的释放。
- 张荣孟丽巍张一飞吕昌莲郑秋艳朱大岭
- 关键词：肺动脉平滑肌细胞CA^2+硝苯地平L-型钙通道钙离子浓度
- 15-HETE抑制低氧性肺动脉平滑肌细胞Kv1．5通道的表达与全细胞钾电流
- 目的证明亚急性低氧通过15-HETE 对 Kv1．5通道的抑制作用导致肺动脉血管收缩。方法使用15-LO 的阻断药(5μmol·LCDC、30 μmol·LNDGA),组织浴槽血管环,逆转灵-聚合酶链反应(RT-PCR)...
- 褚晓杰郭蕾唐晓波朱大岭
- 关键词：15-HETE钾电流
- 文献传递
- 高浓度的staurosporine aglycone激活大鼠肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2被引量：2
- 2009年
- 目的有报道表明staurosporine作为一种蛋白激酶C（PKC）的抑制剂，可以在多种细胞系内调节细胞外信号调节激酶（ERK1／2）的活性，但是它的衍生物staurosporineagly—COfle（SA）是否具有相同的作用还不清楚，本次实验旨在阐明其对ERK1／2活性的调节作用。方法培养至4～8代的大鼠肺动脉平滑肌细胞，经过SA处理后提取细胞蛋白，应用Westernblot方法检测磷酸化ERK1／2的含量，观察不同浓度和时间点的SA对ERK1／2活性的影响。结果在纳摩尔浓度水平的SA可以降低大鼠肺动脉平滑肌细胞中ERK1／2的磷酸化水平，但是30μmol·L-1的SA可以激活ERK1／2，这种激活作用可以被丝裂素活化蛋白激酶的激酶（MEK）的抑制剂PD98059或蛋白激酶A（PKA）的激活剂异丙肾上腺素（isoproteren01）所抑制。结论sA对肺动脉平滑肌细胞中的ERK1／2活性有双向调节作用，这种作用是通过PKC和（或）PKA通路产生的。
- 张家宁褚晓杰吕昌莲吴春铃包红霞唐晓波朱大岭
- 关键词：STAUROSPORINE细胞外信号调节激酶蛋白激酶A
- 高效液相色谱法测定15-羟化二十烷四烯酸
- 2006年
- 近年来的研究表明，在脑、肾、肺、血管等组织中，花生四烯酸（AA）可以被细胞色素P450（CYP450）或15脂氧化酶代谢为15-羟化二十烷四烯酸（15-HETE）、20-羟化二十烷四烯酸（20—HETE）、环氧二十碳四烯酸（EETs）等多种生物活性物质。最近研究证明，15-HETE与许多疾病如骨组织、血管疾病的发生发展有关。鉴于15-HETE在体内的水平低。采用一般的测定方法很难测定，为此。作者采用高效液相色谱（HPLC）荧光检测，在对其生物活性物质进行测定的同时，并对衍生过程进行优化，结果报道如下。
- 毕海荣鲍岩岩
- 关键词：质谱
