陕西省自然科学基金(SJ08C108)
- 作品数：10 被引量：12H指数：3
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- 家蚕糖转运蛋白BmST5基因的克隆与转录活性检测被引量：1
- 2010年
- 根据GenBank已登陆的糖转运蛋白序列与家蚕基因组框架图和EST序列,获得家蚕同源糖转运蛋白基因BmST5。基因编码区长1 527 bp,编码508个氨基酸,预测蛋白分子质量为55.67 kD。序列分析结果显示,该基因有典型的Sugar_tr结构域和12个疏水的跨膜结构域,与体虱等同源蛋白的一致性在50%以上。RT-PCR结果表明,该基因仅在家蚕的马氏管、生殖腺和头中有表达,在中肠、丝腺、血液、体壁和脂肪体中不表达。
- 孔卫青杨金宏
- 关键词：家蚕克隆
- 家蚕BmNaPi2基因的克隆与转录活性检测
- 2011年
- 通过生物信息学分析和分子生物学实验获得了家蚕钠离子依赖性的磷酸盐转运蛋白的同源基因BmNaPi2。该基因长1336bp(GenBank登录号:HM593516),含5个外显子,位于家蚕第3号染色体,编码区长1314bp,基因编码437个氨基酸,预测蛋白序列有10个疏水的跨膜结构域,与果蝇、疟蚊、埃及伊蚊、致倦库蚊、赤拟谷道等的同源蛋白的相似性约57%。RT-PCR检测基因在5龄第3天家蚕幼虫9种组织中的血液、马氏管和体壁中表达,而中肠、丝腺、生殖腺、头和脂肪体中没有表达。
- 杨金宏孔卫青
- 关键词：家蚕克隆转录活性
- 家蚕糖转运蛋白BmST1基因的克隆与序列分析被引量：3
- 2009年
- 糖转运蛋白运输葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖等透过细胞膜为机体提供能量。根据GenBank已登陆的其他物种的糖转运蛋白序列与家蚕基因组框架图和EST序列获得家蚕同源糖转运蛋白基因BmST1。基因编码区长1392bp(GenBank登录号:FJ373021),编码463个氨基酸,预测蛋白分子质量为51.635kDa。序列分析显示基因有2个外显子,含有11个跨膜结构域。RT-PCR表明该基因仅在此文所检测的家蚕丝腺中表达。
- 孔卫青杨金宏卢从德
- 关键词：家蚕克隆
- 家蚕细胞色素P450基因CYP18A1的克隆与RNA干涉载体的获得
- 2009年
- 根据GenBank已登录细胞色素P450CYP18A1基因的序列设计引物,用RT-PCR方法克隆了AK1蚕的CYP18A1基因,并对基因序列进行了分析,研究了基因的表达。并将该基因亚克隆至L4440载体,为基因功能的研究奠定了基础。
- 孔卫青
- 关键词：桑蚕细胞色素P450克隆
- 家蚕黄酮合酶Ⅰ基因BmFNS Ⅰ的克隆与干涉载体的构建被引量：5
- 2009年
- 黄酮类化合物广泛存在于动植物中,具有多种生理活性,黄酮合酶Ⅰ基因可以催化多种黄酮类化合物的生物合成。根据NCBI已登录的其他物种黄酮合酶Ⅰ基因的氨基酸序列,与家蚕基因组和EST数据库进行电子克隆获得家蚕的同源基因BmFNS Ⅰ。克隆测序结果表明该基因长1451 bp,7个外显子。根据基因序列推测其编码蛋白由345个氨基酸构成,179～295间氨基酸为一2-氧戊二酸和Fe（Ⅱ）依赖性的加氧酶家族成员的结构域。RT-PCR检测该基因在本试验所调查的家蚕中肠有高表达。最后将该基因片段亚克隆至具有2个反向T7启动子可以用于体外诱导合成dsRNA的L4440载体。
- 孔卫青杨金宏彭云武胡必利
- 关键词：家蚕克隆
- 家蚕BmNaPi基因的克隆表达与酵母穿梭表达质粒的构建被引量：3
- 2011年
- 磷酸盐是蚕必需的无机物,钠离子依赖性的磷酸盐转运蛋白(Na(+)-dependent phosphate cotransporter,Na-Pi)调节磷酸盐在生物体内的代谢和转运。本研究通过生物信息学分析和分子生物学试验获得了家蚕NaPi的同源基因BmNaPi,该基因位于家蚕8号染色体,编码区长1 437 bp,有10个外显子,编码478个氨基酸,预测蛋白序列在氨基末端含有一信号肽,序列中间有8个转膜结构域,与登录号为AAF57968、XP_001602874、EAA00281、XP_393759、XP_001950194等同源蛋白的一致性均在70%及以上。RT-PCR检测该基因在5龄3 d家蚕幼虫9种组织中的血液、体壁、生殖腺和头中表达,而中肠、丝腺、马氏管和脂肪体中没有表达。最后成功构建了该基因的酵母穿梭表达质粒pG-BKT7-BmNaPi。
- 孔卫青杨金宏
- 关键词：家蚕克隆
- 家蚕Bmugt 3基因cDNA序列的克隆、表达与序列分析
- 2009年
- 【目的】克隆分析家蚕Bmugt 3基因cDNA序列,并对其在家蚕不同组织中的表达进行检测。【方法】以家蚕ak1和873为供试材料,采用生物信息学方法和RT-PCR技术,对家蚕Bmugt3基因cDNA序列进行克隆和组织表达谱研究,并通过XbaⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒,将Bmugt 3亚克隆至具有2个反向T7启动子,用于体外诱导合成双链RNA(dsRNA)的L4440载体。【结果】克隆得到了家蚕Bmugt 3基因1675bp的cDNA序列,编码462个氨基酸,编码蛋白的分子质量为52.3ku,等电点6.5;多序列比对显示,Bmugt 3基因缺失了C末端的跨膜结构域;聚类分析结果显示,其与家蚕phenol-UGT基因聚合在同一分支上。Bmugt 3基因主要在家蚕丝腺中表达。【结论】Bmugt 3基因是组织特异性表达基因,可能在家蚕类黄酮素的代谢中起作用。
- 孔卫青杨金宏
- 关键词：家蚕克隆
- 家蚕糖转运蛋白基因BmST3的克隆及序列分析与表达研究被引量：2
- 2010年
- 糖转运蛋白在家蚕体内糖类化合物的转运与代谢过程中发挥重要作用。在电子克隆的基础上,通过RT-PCR方法克隆了家蚕糖转运蛋白基因BmST3(GenBank登录号:GQ871756)。生物信息学分析结果显示,该基因位于家蚕27号染色体,开放阅读框(ORF)长1434bp,编码477个氨基酸,预测蛋白有典型的Sugar_tr结构域和12个疏水的跨膜结构域,与埃及伊蚊、致倦库蚊、冈比亚按蚊、赤拟谷盗登录号分别为EAT47626、EDS35465、EAA11457、EFA05337的同源蛋白相似性均在60%以上。RT-PCR检测和基因芯片信号值分析结果显示,BmST3基因的表达具有组织特异性,在家蚕5龄第3天幼虫的9种组织中,主要在马氏管中大量表达,推测其可能在马氏管细胞膜内外物质的跨膜转运中发挥作用。
- 孔卫青杨金宏
- 关键词：家蚕克隆
- 家蚕BmST2基因的克隆与转录活性检测
- 2011年
- 通过生物信息学分析和生物学试验获得了家蚕糖转运蛋白基因BmST2(GenBank登录号:GQ871755),基因位于家蚕27号染色体,开放阅读框(ORF)长1398 bp,编码465个氨基酸,预测蛋白序列有典型的Sugar_tr结构域和11个疏水的跨膜结构域,与家蚕BmST1蛋白相似性和一致性分别达79%和64%,与登录号为EAT47626、EDS35465、EAA11457和EFA05337的同源蛋白相似性在50%以上。RT-PCR检测基因在5龄第3天家蚕幼虫的9种组织中转录活性,结果显示,BmST2基因除在脂肪体没有表达外,其他组织均有表达。最后成功构建了基因的酵母穿梭表达质粒pG-BKT7-BmST2。
- 孔卫青杨金宏
- 关键词：家蚕转录活性
- 家蚕UDP葡萄糖基转移酶Bmugt2基因的克隆与RNA干涉(英文)
- 2009年
- 糖基化在大多体内复合物的失活和排出过程中起重要的作用。报道家蚕一UDP葡萄糖基转移酶基因Bmugt2的特征和可能的功能。该基因编码序列长1 578 bp(登录号:FJ237534),翻译525个氨基酸,推定的氨基酸与UGT家族的其它氨基酸有约30%的一致性。RT-PCR检测该基因主要在家蚕丝腺中表达,应用体外转录合成的基因dsRNA干涉家蚕后,丝腺中基因的表达明显降低,但对家蚕茧色无明显的可见影响。
- 孔卫青杨金宏
- 关键词：家蚕RNA干涉微量注射
