吉林省自然科学基金(201015201)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
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- 转染leptin的胎盘间充质干细胞对放射损伤复合创伤愈合的促进作用被引量：2
- 2016年
- 目的:探讨瘦素(leptin)和人胎盘间充质干细胞(HPMSCs)对大鼠背部放射损伤复合创伤(放创复合伤)皮瓣愈合的促进作用,阐明其在放创复合伤愈合过程中的协同作用。方法:将30只雄性Wistar大鼠随机分为转染leptin的HPMSCs组(n=10)、转染空载体的HPMSCs组(n=10)和空白对照组(n=10)。建立放创复合伤大鼠模型,放疗后24h各组大鼠局部皮下注射转染leptin的HPMSCs、转染空载体的HPMSCs以及生理盐水,观察各组大鼠皮瓣颜色、皮纹、质地、温度、毛发生长、渗出、坏死范围及针刺出血情况;检测各组大鼠皮瓣成活率;HE染色观察各组大鼠皮瓣组织形态表现;免疫组织化学法检测大鼠皮瓣中leptin和血管性血友病因子(vWF)的表达情况。结果:给药后第7天,各组大鼠皮瓣成活与坏死界限基本清楚,坏死区域皮瓣质地坚硬,成活区域皮瓣颜色红润,皮纹模糊,质地中等,转染leptin的HPMSCs组和转染空载体的HPMSCs组大鼠皮瓣坏死面积均小于空白对照组。给药后第7天,转染leptin的HPMSCs组大鼠皮瓣成活率高于转染空载体的HPMSCs组和空白对照组(P<0.05),转染空载体的HPMSCs组大鼠皮瓣成活率高于空白对照组(P<0.05)。给药后第14天,HE染色检测,转染leptin的HPMSCs组大鼠皮瓣肉芽组织最为丰富,新生毛细血管和成纤维细胞最多。给药后第14天,免疫组织化学染色,转染leptin的HPMSCs组和转染空载体HPMSCs组大鼠皮瓣真皮下方可见大量的黄染颗粒(阳性表达),转染leptin的HPMSCs组胞浆中阳性表达的leptin细胞最多。结论:在局部微环境作用下,HPMSCs可以分化为血管内皮细胞,促进新生血管的形成,HPMSCs与leptin可协同促进放创复合伤皮瓣的愈合,HPMSCs携带目的基因或单独应用均可明显提高放创复合伤皮瓣的成活率,但转染leptin的HPMSCs作用力更强。
- 费倩怡刘书会朱振威邹永巍郑明刘春丽刘志辉
- 关键词：放创复合伤人胎盘间充质干细胞瘦素伤口愈合
- 人胎盘来源间充质干细胞和大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特征比较被引量：4
- 2013年
- 目的:从人足月的胎盘羊膜中和Wistar大鼠股骨及胫骨骨髓中分离、培养间充质干细胞(MSCs),研究人胎盘来源MSCs(HPMSCs)和大鼠骨髓来源MSCs(BMSCs)的分离培养方法和生物学特征、表面标志及其多分化潜能。方法:将人足月胎盘组织通过胶原酶Ⅱ消化培养获取HPMSCs,采用全骨髓贴壁法从4周龄Wistar大鼠双侧股骨及胫骨中分离、纯化大鼠BMSCs,运用活细胞计数法检测其增殖能力,采用流式细胞术检测2种细胞表面标志物的表达阳性率;用地塞米松、维生素C和β磷酸甘油诱导其向成骨细胞分化,用茜素红染色鉴定;用胰岛素、地塞米松、IBMX和吲哚美辛诱导其向脂肪细胞分化,以油红O染色鉴定。结果:HPMSCs为梭形贴壁细胞,增殖能力较强,CD44和CD34表达阳性率分别为94.45%和1.67%;BMSCs为圆形、梭形和多角形,增殖能力强,CD44和CD34表达阳性率分别为93.11%和2.68%。2种细胞经过成脂诱导液和成骨诱导液诱导后,茜素红和油红O染色结果均为阳性,表明2种细胞均可向脂肪细胞和成骨细胞分化。结论:HPMSCs与大鼠BMSCs的生物学特征相似,同样具有多分化潜能,HPMSCs具有更强的增殖能力。
- 费倩怡刘春丽朱振威刘志辉刘书会王占义金巨楼王敬龙
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 瘦素基因在人胎盘间充质干细胞中转染与表达被引量：1
- 2014年
- 目的:构建瘦素(leptin)基因真核表达载体,将其转染至人胎盘间充质干细胞(HPMSCs)中并鉴定其表达。方法:设计leptin基因引物,从人脂肪组织中RT-PCR扩增leptin基因,将获得的基因插入真核表达载体pIRES2-EGFP中,得到重组质粒pIRES2-EGFP-LEP,限制性内切酶双酶切鉴定重组质粒;用脂质体法将重组质粒转染至HPMSCs中并通过RT-PCR及Western blotting法检测目的基因表达,鉴定转染后HPMSCs的多向分化潜能。结果:RT-PCR扩增得到的特异性片段长度约为500 bp,重组质粒经双酶切后显示5.3 kb和500 bp左右的2条片段;转染后的HPMSCs表达leptin基因,保持多向分化潜能。结论:成功构建了瘦素基因真核表达载体,将其转入HPMSCs中并得以表达。
- 朱振威刘春丽王博蔚陈一夫王占义高贝刘志辉
- 关键词：真核表达载体人胎盘间充质干细胞瘦素
