广东省科技计划工业攻关项目(2011A030400007)
- 作品数：12 被引量：38H指数：4
- 相关作者：郭阳陈镇洲谭盛李粲陈健更多>>
- 相关机构：南方医科大学北京军区总医院暨南大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体转染人骨髓基质细胞
- 2012年
- 背景:骨髓基质细胞不表达端粒酶,因而在体外传代扩增过程中端粒长度逐渐缩短,导致细胞衰老,这是限制其用于细胞治疗应用的一个重要因素。目的:构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体,探讨以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。方法:以pReceiver-M02-hTERT质粒为模板PCR扩增获得目的基因。用BP重组系统将目的片段重组到载体pDONR221上。然后使用LR重组系统将目的序列重组到载体pLenti6.3/V5-DEST上。将重组载体与包装质粒充分混合,利用脂质体共转染293FT细胞获得慢病毒颗粒。结果与结论:成功构建人端粒酶催化亚单位慢病毒表达载体,病毒的平均物理滴度为1.07×1012LP/L。以之转染人骨髓基质细胞,目的基因表达水平有显著提升,细胞正确表达人端粒酶反转录酶蛋白。说明以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞能强化细胞表达人端粒酶催化亚单位。
- 陈镇洲
- 关键词：人端粒酶催化亚单位人骨髓基质细胞慢病毒转染
- miR-124过表达诱导胶质瘤干细胞分化作用研究
- 2015年
- 目的探讨miR-124过表达诱导胶质瘤干细胞分化作用的机制。方法构建miR-124过表达慢病毒载体并转染人胶质瘤干细胞，以正常培养的胶质瘤干细胞为对照，采用MTT法检测细胞增殖活性，采用流式细胞仪分析干细胞表型，采用RT-PCR检测miR．124及其靶基因Akt、RelA表达水平，采用ELISA法分析其信号通路中炎性因子白介素-1（IL-1）、IL-8分泌水平。结果成功构建了miR-124过表达慢病毒载体并成功转染了人胶质瘤干细胞获得pGC—miR-124-GSCs。与正常培养的胶质瘤干细胞比较，pGC-miR-124、GSCs增殖能力明显降低．CDl33阳性率明显下降，miR-124表达水平明显升高，Akt、RelA表达水平均明显下降，IL-1、IL-8分泌水平均明显下降，差异均有统计学意义fP〈0．05）。结论miR-124过表达诱导了胶质瘤干细胞分化，产生强烈的抑瘤活性，其机制可能与抑制炎性因子生成有关。
- 吴宗平郭阳黄启明张发兵陈镇洲
- 关键词：胶质瘤干细胞炎性因子
- 自体血管内皮祖细胞治疗缺血缺氧性脑损伤被引量：4
- 2013年
- 背景:缺血缺氧性脑损伤后的神经再生、神经功能的恢复与缺血部位新生血管的形成和重塑有着密切的关系。血管内皮祖细胞参与出生后缺血组织的血管新生及修复,促使血液循环再通和氧气等营养物质的供应,为神经功能的恢复提供微环境。目的:探讨自体血管内皮祖细胞治疗缺血缺氧性脑损伤的可行性、有效性及安全性,探索改善脑损伤患者神经功能修复的新方法。方法:应用计算机检索PubMed、ScienceDirect、Springerlink、CNKI、万方等数据库近10年的相关文献。英文关键词为"EPCs、endothelial progenitor cell、stroke"等,中文关键词为"内皮祖细胞、干细胞移植、脑卒中"等,选择内容与血管内皮祖细胞治疗缺血缺氧性疾病相关的文献,同一领域文献则选近期发表的或发表在权威杂志上的文章,共纳入43篇参考文献。结果与结论:脑缺血后神经再生、神经功能的恢复与缺血部位新生血管的形成和重塑有着密切的关系,内皮祖细胞参与出生后缺血组织的血管发生及修复,促进血液循环及氧气等营养物质的供应,为神经功能的恢复提供微环境。自体血管内皮祖细胞治疗缺血缺氧性脑损伤是可行的、安全的、有效的,但仍需大量的生物学及动物实验为其临床应用提供客观的理论依据。
- 崔立玲黄国志陈镇洲郭阳
- 关键词：干细胞内皮祖细胞干细胞移植缺血缺氧性脑损伤神经康复
- 缺氧条件下葡萄糖对成年神经干细胞体外增殖影响的研究
- 2011年
- 目的探讨不同浓度的葡萄糖对氧/糖剥夺条件下体外成年大鼠神经干细胞活力和增殖的影响。方法无血清培养成年Fisher 344大鼠海马神经干细胞系,用Nestin和DAPI免疫荧光双染以确认其生物学特性。将三气培养箱氧气浓度调至1%以制备缺氧环境,将培养基换为无糖Earle’s平衡盐溶液缺氧培养6 h后更换为含有不同浓度葡萄糖(7.5、17.5、27.75、41.75、83.75 mmol/L)的培养基恢复正常条件继续培养后,检测神经干细胞的活力和形态学改变。同时设置常氧常糖为正常对照组和甘露醇为渗透压对照组。结果 CCK-8检测显示,常糖常氧正常对照组细胞吸光度值较缺氧模型组高,7.5 mmol/l糖培养组以及41.75 mmol/L和83.75 mmol/L糖培养组吸光度值均较正常糖缺氧组(17.5 mmol/L)低,差异有统计学意义(P<0.05);而27.75 mmol/L糖培养组吸光度值较正常糖缺氧组低,差异无统计学意义,且排除了高糖培养基引起的渗透压力的影响。各组细胞形态学改变与CCK-8检测结果一致。结论缺氧后轻度升高的糖对体外缺氧成年神经干细胞的损伤可能有保护作用,而较低浓度和更高浓度的葡萄糖则加重其损伤。
- 谭盛陈健郭阳陈瑞清李粲陈镇洲
- 关键词：神经干细胞葡萄糖
- 大鼠急性脑缺血后CD4^+CD25^+调节性T细胞、Foxp3表达及其意义被引量：15
- 2012年
- 目的动态观察大鼠急性脑缺血后不同时期外周血中CD4+CD25+调节性T细胞和脑组织中Foxp3的表达,探讨其在急性缺血性卒中病理生理演变过程中的作用。方法 48只Wistar大鼠按随机数字表法分为缺血组和假手术组。参考改良的Zea-Longer插线方法将缺血组大鼠制作成右侧大脑中动脉线栓脑缺血动物模型。采用流式细胞术和免疫组化染色检测造模后1、3、7、14 d时大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞表达和脑组织中Foxp3表达,同时采用改良NSS神经功能评分观察大鼠行为学变化。结果缺血组和假手术组大鼠神经功能缺损评分在模型制备后逐渐下降(P<0.01)。流式细胞术显示脑缺血后1、3 d时缺血组大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的表达与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05),7、14 d时表达明显高于假手术组(P<0.05),且与大鼠的神经功能评分呈负相关(r=-0.68,P=0.01)。免疫组化显示脑缺血后1 d时缺血组大鼠脑组织中即可观察到Foxp3表达,且主要集中在缺血灶区域,在未缺血侧也可观察到Foxp3表达,但表达量较少,而假手术组脑组织中未见Foxp3表达。结论 CD4+CD25+调节性T细胞参与了大鼠急性脑缺血后炎症免疫反应的发生发展过程,且在脑缺血后1 d时便开始参与脑缺血性损伤的免疫调节,这种免疫调节对脑细胞有着保护作用。
- 陈瑞清谭盛陈健郭阳李粲陈镇洲
- 关键词：脑缺血CD4+CD25+调节性T细胞FOXP3
- 晚期乳腺癌患者自体自然杀伤细胞的体外培养及其杀伤活性分析被引量：3
- 2016年
- 目的分析晚期乳腺癌自体自然杀伤(NK)细胞体外培养能否激活与免疫监视密切相关的NK细胞,并产生抗肿瘤免疫作用。方法取10例晚期乳腺癌患者和10例正常女性外周血,单个核细胞诱导扩增得到活化NK细胞,分别检测NK细胞增殖和表型,NK细胞对乳腺癌细胞的细胞毒性及乳腺癌鼠模型体内抗肿瘤活性。结果两者来源NK细胞增殖差异无统计学意义,培养到第15天NK细胞数均达到1.0×10~9以上,均高表达80%以上的CD3^-CD16^+CD56^+表型,两者间差异无统计学意义;体外实验两者对乳腺癌细胞均有较好的细胞毒性,晚期乳腺癌患者和正常女性来源NK细胞杀伤乳腺癌细胞之间无统计学差异(P>0.05)。结论晚期乳腺癌患者自体NK细胞经体外活化后具有与正常女性同样的诱导增殖效果,对乳腺癌有较好的细胞杀伤活性。
- 高万军黄启明祁楠
- 关键词：自然杀伤细胞细胞表型免疫细胞治疗
- 帕金森病人危重疾病性多发性神经病1例临床分析
- 2011年
- 目的分析1例帕金森病人发生危重疾病性多发性神经病的过程、临床特点及早期诊断方法。方法对1例帕金森病危重疾病性多发神经病进行临床资料分析及相关文献回顾。结果该病人败血症过程不典型、发展快,早期以内环境紊乱为表现,很快引起呼吸肌无力,需用呼吸机辅助呼吸,但肢体活动尚好。在有效抗生素应用、内环境紊乱纠正后,仍然难以撒离呼吸机,行肌酶检查和脑脊液检查正常,肌电图发现四肢感觉与运动神经传导速度下降及波幅降低,提示危重疾病性多发神经病可能。结论帕金森病人发生败血症后,出现脱机困难和肢体无力时,应重视神经系统检查,及时观察病情变化和完善肌电图检查,考虑危重疾病性多发性神经病可能。避免危险因素,预防脓毒血症的发生可能是预防本病发生的有效措施。
- 谭盛陈健陈瑞清刘卉郭阳李粲张马辉陈镇洲
- 关键词：帕金森病病例报道
- 慢病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞被引量：1
- 2011年
- 背景:原代细胞的转染效率低下一直是制约其发展的主要因素之一,慢病毒转染以其独特的优势成为各种干细胞基因修饰良好的转染方法。目的:验证慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。方法:将携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒在含血清或无血清条件下按不同的MOI值分别转染人骨髓基质细胞,长期观察荧光蛋白表达情况。将经修饰的细胞通过立体定向移植入大鼠纹状体内,观察移植细胞的存活及目的基因的表达情况。结果与结论:基因转染48h后,可见人骨髓基质细胞成功表达绿色荧光蛋白,无血清条件下的转染效率高于含血清条件下的转染效率,转染成功的细胞在体外持续培养2个月以上未见明显的荧光消减。转染后的细胞可在大鼠纹状体存活并持续表达绿色荧光蛋白2个月以上。提示慢病毒是一种高效的转染人骨髓基质细胞的载体,慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因转染可以作为人骨髓基质细胞的示踪标志用于体内移植研究。
- 汤浩项永生秦玲莎姜晓丹徐如祥陈镇洲
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白人骨髓基质细胞慢病毒转染
- 脑肿瘤干细胞的发育相关信号通路被引量：2
- 2015年
- 脑胶质瘤干细胞存在于微环境中,微环境中包含有多种的细胞信号调控分子,胶质瘤的生物学行为正是由细胞外微环境作用于细胞内信号所决定的。脑胶质瘤干细胞信号通路的研究已成为脑胶质瘤研究的热点。本文将重点综述脑胶质瘤干细胞中几条重要的与神经干细胞相关的信号通路,为更全面的认识脑胶质瘤细胞信号、以及开拓新的脑胶质瘤治疗方法提供基础证据。
- 郭阳徐如祥
- 关键词：脑肿瘤干细胞信号通路
- 大鼠成年海马神经干细胞体外氧糖剥夺／复氧模型的建立被引量：6
- 2011年
- 目的探讨一种简便、稳定、可重复的大鼠成年神经干细胞体外氧糖剥夺／复氧模型的制备方法。方法以来自于成年Fisher344大鼠的海马神经干细胞系为研究对象，以无血清培养基培养并传代．并用nestin和DAPI免疫荧光双染确认其生物学特性。将三气培养箱氧气浓度调至1％以制备缺氧环境，将培养基换为不含葡萄糖的Earle’s平衡盐溶液，分别缺氧缺糖2h、4h、6h、8h、10h后取出细胞，恢复正常条件继续培养24h后倒置显微镜下观察细胞形态学变化，CCK-8比色法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡率。同时设置常氧常糖的正常对照组。结果与正常对照组相比．缺氧缺糖2h组细胞吸光度值明显升高，细胞存活率有一定的增长，但差异无统计学意义（P〉0．05）。随着缺氧缺糖时间延长，神经干细胞形态学损伤逐渐加重，细胞吸光度值逐渐下降．缺氧缺糖6h后与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；缺氧缺糖6h起细胞存活率均较正常对照组明显下降，比较差异有统计学意义伊〈0．05）；神经干细胞凋亡率逐渐增高，且均明显高于正常对照组，差异有统计学意义（P〈0．05），其中缺氧缺糖6h时细胞的凋亡率已超过50％。结论利用三气培养箱物理缺氧方法可成功建立一种简便、有效的神经干细胞体外氧糖剥夺／复氧模型。
- 谭盛陈健郭阳陈瑞清李粲陈镇洲
- 关键词：神经干细胞
