国家自然科学基金(30300147)
- 作品数：7 被引量：97H指数：3
- 相关作者：许蜀闽王培勇陈莉李雪辉郑绿珍更多>>
- 相关机构：第三军医大学温州医学院第三军医大学新桥医院更多>>
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- L-精氨酸和牛磺酸联合抗缺氧损伤及防治缺氧性肺动脉高压的研究被引量：4
- 2006年
- 目的研究L-精氨酸、牛磺酸联合应用的抗缺氧损伤以及对缺氧性肺动脉高压(HPH)的防治效果。方法雄性W istar大鼠40只,制作缺氧性HPH模型,随机分为平原对照组(C)、单纯缺氧组(H)、缺氧+L-精氨酸组(Arg)、缺氧+牛磺酸组(Tau)、缺氧+牛磺酸+L-精氨酸组(TA),测定各组的肺动脉压(mPAP)、右心室肥大指数(RVH I)、血浆乳酸脱氢酶(LDH)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、肺匀浆NO含量的变化。结果H组与C组相比,mPAP高出约25 mmHg(P<0.01),RVH I增加1.56倍(P<0.01),血浆LDH活性增高10.1倍(P<0.01),血浆MDA含量增加1.64(P<0.01),而肺匀浆NO含量降低68%(P<0.01)。各治疗组与H组相比,mPAP均显著降低5 mmHg(P<0.05),RVH I均显著降低20%(P<0.01),血浆LDH活性显著降低(P<0.01),其中TA组与Arg组比较有显著差异(P<0.01),血浆MDA含量显著降低(P<0.01),但各治疗组之间无显著性差异。肺匀浆NO含量在Tau组无显著性变化,在Arg和TA组显著回升(P<0.01)。结论L-精氨酸和牛磺酸具有抗缺氧损伤及防治肺动脉高压的效果,两者联用可进一步增加NO产生,减少乳酸脱氢酶的漏出,加强细胞保护作用。
- 许蜀闽郑绿珍刘福玉陈莉王培勇
- 关键词：L-精氨酸牛磺酸缺氧缺氧性肺动脉高压
- 连二亚硫酸钠在建立培养细胞的无氧环境中的应用被引量：84
- 2005年
- 目的 无氧环境是我们在用细胞进行研究的过程中经常会需要的。利用连二亚硫酸钠清除氧的能力 ,我们希望得到简便适用的方法制造培养细胞的无氧气、液相环境。方法 2mmol的连二亚硫酸钠可完全清除溶液里的氧气 ,我们用血气分析的方法检测连二亚硫酸钠溶液的性质 ,以及装有连二亚硫酸钠溶液的密闭容器内的气体成分的变化。结果 2mmol的连二亚硫酸钠溶液可保持无氧状态 1h左右 ,溶液的pH值并无变化。含 2mmol的连二亚硫酸钠的溶液可消耗密闭容器内的氧气 ,使容器内的氧含量接近与零。结论 连二亚硫酸钠可帮助我们得到简便使用的方法制造培养细胞的无氧气、液相环境。
- 许蜀闽王培勇马红英
- 关键词：培养细胞连二亚硫酸钠血气分析氧气无氧
- 牛磺酸对肺动脉内皮和肺动脉平滑肌细胞增殖的双向调节作用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨肺动脉高压发生发展的细胞机制和牛磺酸对缺氧性肺动脉高压的防治作用。方法体外培养新生雄性小牛肺动脉内皮细胞（PAECs）及肺动脉平滑肌细胞（PASMCs），用^3H—TdR掺人法比较缺氧时PASMCs与PAECs的增殖情况，同时测定在培养液中加入牛磺酸后其增殖的改变。结果2．5％O2和＜1％O2条件下培养6～24h，PAECs的^3H—TdR掺入量均显著低于常氧对照组（降低15％～48％，P＜0．05）；而PASMCs于缺氧12h后^3H—TdR掺人量均显著高于常氧对照组（增加19％～34％，P＜0．05）。牛磺酸对细胞增殖的影响与浓度有关，高浓度（10～20mmol／L）的牛磺酸抑制缺氧的内皮及平滑肌细胞的^3H-TdR掺人，而低浓度的牛磺酸促进缺氧时PAECs的^3H—TdR掺人（P〈0．05），抑制缺氧时PASMCs的^3H—TdR掺人（P＜0．05）。结论缺氧抑制内皮细胞的增殖而促进平滑肌细胞的增殖，适当的牛磺酸可以对抗缺氧对PAECs和PASMs的作用，减弱缺氧对PAECs的增殖抑制作用，抑制缺氧的促PASMCs增殖作用，使之接近常氧水平。
- 许蜀闽陈莉刘健王培勇
- 关键词：牛磺酸肺动脉内皮细胞肺动脉平滑肌细胞
- 缺氧时肺动脉平滑肌细胞膜电位、细胞质及线粒体Ca^(2+)的动态变化被引量：1
- 2007年
- 目的研究缺氧时肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)膜电位、细胞质游离Ca2+及线粒体游离Ca2+的动态变化,探讨缺氧性肺血管收缩(hypoxic pulmonary vasocontriction,HPV)的可能机制。方法分离成年Wistar大鼠PASMCs进行体外培养,将PASMCs分为3组:分别负载荧光指示剂Di-8-ANEPPS(2μmol/L)、Fluo-4/AM(4μmol/L)和Rhod-5F(5μmol/L)。利用Na2S2O4(2mmol/L)的强还原特性,对细胞进行化学缺氧干预,在共聚焦显微镜下观察缺氧环境下细胞膜电位、细胞质Ca2+和线粒体Ca2+的动态变化。结果用Na2S2O4对PASMCs施加缺氧刺激后,PASMCs细胞膜电位荧光强度迅速大幅度降低,继而迅速回升,于100s时升至峰值且高于初始水平,随后逐渐下降低于初始水平;缺氧刺激后PASMCs细胞质Ca2+荧光强度缓慢增高,并呈持续增高趋势;PASMCs线粒体Ca2+荧光强度在缺氧刺激后迅速增高,持续约30s后回降至低于起始值,随后开始回升,达到并逐渐高于起始值。结论缺氧刺激PASMCs,导致膜电位、细胞质Ca2+和线粒体Ca2+呈特定模式的升高和降低的动态变化,除了细胞质Ca2+稳态失衡之外,线粒体Ca2+变化可能在HPV发生中也起着重要的作用。
- 何秀娟许蜀闽张涛李雪辉孙玮王培勇
- 关键词：膜电位缺氧肺动脉平滑肌线粒体
- Ca/CaM与缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖的关系研究
- 2007年
- 目的:探讨缺氧时钙内流、钙调素、NF□κB与肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖的关系。方法:组织块贴壁法培养成年大鼠PASMCs,细胞分组处理后,分别应用四甲基偶氮唑(MTT)检测细胞数量、流式细胞术检测细胞周期分布和增殖指数、免疫荧光检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达。结果:2%O_2条件下培养12h显著刺激PASMCs增殖,与常氧组相比,细胞活力增加40%,增殖指数(proliferation index,PI)是常氧组的1．46倍, PCNA表达增强。L-型钙通道阻滞剂硝苯吡啶(nifedipine,NFD,10μM)、钙调素拮抗剂三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP,10μM)、核转录因子NF□κB抑制剂PDTC(20μM)均抑制了缺氧诱导的PASMCs的增殖,其抑制作用的强度依次为NFD＜PDTC＜TFP。结论:钙信号转导参与缺氧诱导的PASMCs增殖,涉及通过L-型钙通道的钙内流、钙调素以及转录因子NF-κB激活等环节。
- 李雪辉许蜀闽王培勇
- 关键词：缺氧钙信号肺动脉平滑肌
- 不同因素对肺动脉平滑肌细胞线粒体游离钙的作用效应被引量：1
- 2006年
- 目的:通过观察肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)在化学缺氧、细胞膜去极化和血管舒缩活性物质等不同因素作用下线粒体游离钙([Ca2+]mit)的动态变化特点,探讨:[Ca2+]mit与缺氧性肺动脉收缩(hypoxia pulmonary artery constriction,HPV)发生之间的关联。方法:分离成年Wistar大鼠PASMCs进行体外培养,负载线粒体钙荧光指示剂Rhod-5F(5μmol/L),分组施加2mmol/L连二亚硫酸钠(Na2S2O4)化学缺氧、18mmol/LKCl、10-6mol/L血管紧张素II(Ang II)和100μmol/L一氧化氮供体(SIN-1)等不同刺激因素,在激光共聚焦扫描显微镜下观察[Ca2+]mit的动态的变化。结果:用Na2S2O4对PASMCs施加缺氧刺激,[Ca2+]mit荧光强度在缺氧刺激后迅速增高,持续约30s后回降至低于起始值,随后开始回升,达到并逐渐高于起始值,继而于100s缓慢回升,逐渐高于起始时荧光强度;向PASMCs加入KCl后,[Ca2+]mit迅速升高,40s后缓慢下降,于400s后恢复并维持在初始值;向PASMCs加入AngII后,[Ca2+]mit迅速小幅度升高,于20s时开始降低,于100s时至最低,形成低谷平台,持续至400s时逐渐回升,于600s恢复接近初始水平;向PASMCs加入SIN-1后,[Ca2+]mit迅速降低,于80s时降至最低,形成低谷平台持续至160s时开始回升,于200s时回升至平稳水平但仍低于初始值。结论:给予PASMCs缺氧、细胞膜去极化、舒缩血管活性物质等刺激,可以引起线粒体Ca2+发生相应变化,线粒体[Ca2+]mit可能在HPV发生中也起着重要作用。
- 何秀娟许蜀闽张涛李雪辉王培勇
- 关键词：线粒体钙肺动脉平滑肌
- 牛磺酸抗缺氧及防治肺动脉高压的研究及其细胞机制初探被引量：6
- 2006年
- 目的通过动物模型观察牛磺酸对缺氧性肺动脉高压的治疗作用,同时观察其对体外培养牛肺动脉平滑肌细胞(PASMC)和内皮细胞(PAEC)增殖的影响。方法采用模拟高原5 000 m制作缺氧大鼠模型,缺氧2周。设平原(C组)及缺氧对照组(H组),观察牛磺酸治疗后(T组)的肺动脉压(mPAP)、血浆乳酸脱氢酶(LDH)活性、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、肺匀浆一氧化氮(NO)含量、右心室肥大指数的变化。体外培养PASMC和PAEC用3H-TdR掺入法比较牛磺酸对缺氧PASMC和PAEC增殖的影响。结果H组大鼠LDH活性升高为C的10.1倍(P<0.01);肺匀浆NO含量降低为C组的32%(P<0.01);血浆MDA含量显著升高为C组的1.64倍(P<0.01);mPAP显著增高,约为C组的2.74倍(P<0.01);右心室肥大指数是C组的1.56倍(P<0.01)。T组与H组相比较:LDH活性、血浆MDA、右心室肥大指数均显著降低(P<0.01);mPAP显著降低(P<0.05)。高浓度(10～20 mmol/L)的牛磺酸抑制缺氧内皮及平滑肌细胞的3H-TdR掺入,而低浓度的牛磺酸促进缺氧时PAEC的3H-TdR掺入(P<0.05),抑制缺氧时PASMC的3H-TdR掺入(P<0.05)。结论牛磺酸有抗缺氧及防治肺动脉高压的作用。缺氧抑制内皮细胞的增殖而促进平滑肌细胞的增殖,适当剂量的牛磺酸可以对抗缺氧对PAEC和PASMs的作用:减弱缺氧对PAEC的增殖抑制作用,抑制缺氧的促PASMC增殖作用,使之接近常氧水平。这可能是牛磺酸防治肺动脉高压的细胞机制。提示牛横酸对于高山病缺氧性肺血管收缩和血管结构改建的预防和治疗,可能具有广阔的应用前景。
- 许蜀闽郑绿珍刘福玉陈莉王培勇
- 关键词：牛磺酸肺动脉平滑肌细胞内皮细胞
