国家自然科学基金(30300156)
- 作品数：13 被引量：96H指数：7
- 相关作者：刘宝华童卫东张连阳李春穴贾后军更多>>
- 相关机构：第三军医大学大坪医院重庆医科大学附属第一医院兰州军区兰州总医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 干细胞因子促进Cajal间质细胞恢复的研究被引量：2
- 2012年
- 目的观察阻断c—Kit信号通路致cajal间质细胞（ICC）缺失，而c．Kit的配体干细胞因子（SCF）能否促进其恢复。方法将新出生的小鼠于腹腔内隔天注射c—Kit抗体（ACK2）100μg，共5次，建立ICC缺失模型，再于第10天腹腔内注射SCF，连续注射5d后观察空肠电节律并通过免疫组织化学法观察Cajal间质细胞的恢复；采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Westernblot法检测c—Kit基因转录和表达。结果当c—Kit受体被阻断后，空肠ICC几乎缺失且慢波消失；SCF腹腔注射给药可使ICC缺失小鼠空肠慢波频率明显增快（7．83±1．34）次／min（P〈0．01），振幅也有加大（0．044±0．009）mV（P〈0．05）；而且肌间神经丛区ICC增多，c—KitmRNA及c—Kit蛋白表达也上调。结论c-Kit与其配体SCF结合所启动的信号途径对ICC的生存及表型维持至关重要。阻断c-Kit的作用后，ICC会出现缺失。通过给予外源性SCF刺激后，缺失的ICC部分恢复，且这种恢复与C—Kit表达水平的上调有关。
- 贾后军童卫东刘宝华
- 关键词：CAJAL间质细胞干细胞因子胃肠动力
- 慢传输性便秘结肠Cajal间质细胞减少与细胞凋亡的关系被引量：7
- 2004年
- 目的 探讨慢传输性便秘 (slowtransitconstipation ,STC)结肠Cajal间质细胞 (interstitialcellsofCajal,ICC)减少是否与细胞凋亡有关。方法 收集 12例STC患者和 8例对照组乙状结肠标本 ,用免疫组化方法检测ICC分布情况 ,用原位末端标记法 (TUNEL)检测结肠壁黏膜层、黏膜下层和肌层的原位细胞凋亡情况 ,记数凋亡指数 ,半定量分析。结果 ICC分布于结肠肌层 ,包括黏膜下环肌层表面、环肌层、肌间神经丛、纵肌层四个区域 ,STC乙状结肠上述四个区域ICC分布均明显减少。原位细胞凋亡检测发现黏膜层和黏膜下层细胞凋亡明显增多 (P =0 .0 0 2 ) ,而肌层和肌间神经丛与对照组无显著差异。结论 STC患者乙状结肠ICC减少可能与凋亡无关。
- 童卫东李朝阳刘宝华熊仁平刘苹张连阳张胜本
- 关键词：慢传输性便秘细胞凋亡CAJAL间质细胞
- 慢传输性便秘乙状结肠c-kit蛋白和mRNA表达被引量：12
- 2004年
- 目的 探讨c kit蛋白和mRNA在慢传输性便秘结肠的表达。方法 乙状结肠标本取自 12例慢传输性便秘患者和 8例年龄相匹配的非梗阻性结直肠癌患者。用Westernblot方法检测c kit蛋白表达 ,用RT PCR方法检测mRNA表达情况。结果 聚丙烯凝胶电泳结果显示c kit蛋白质一 14 5× 10 3 的条带 ,与对照组相比 ,慢传输性便秘结肠c kit蛋白表达明显下降 (P =0 .0 2 1) ;RT PCR产物经琼脂糖凝胶电泳显示c kit基因和 β actin(内参照 )两条带 ,经半定量分析发现c kitmRNA表达降低 (P =0 .0 2 9)。结论 慢传输性便秘乙状结肠c kit蛋白和mRNA表达均明显降低 ,提示c
- 童卫东刘宝华熊仁平刘苹张连阳张胜本
- 关键词：CAJAL间质细胞C-KIT
- 体外培养小鼠小肠Cajal间质细胞及其形态学变化被引量：5
- 2005年
- 目的:分析Cajal间质细胞(interstitialcellsofCajal,ICC)体外培养的要点,研究ICC在体外培养过程中的形态学变化;方法:体外分离、培养小鼠小肠ICC,采用ICC特异的c-kit抗体进行免疫荧光鉴定,应用光学显微镜和激光共聚焦显微镜观察其在体外生长30d的形态学改变过程。结果:体外分离、培养的ICC,贴壁后24h呈三角形或梭形,有少量突起;体外培养72h的ICC即出现明显的长突起,并且可与周围ICC相互形成突触连接,7d以上的ICC可以形成广泛的连接。体外培养的ICC可以在体外长时间培养,并且未发现明显的形态学变化。结论:体外培养3d后ICC形成类似于体内的网络连接,即可用于下一步实验,并可以稳定培养至少30d以上。ICC在体外的成功培养有望为深入研究ICC提供新的手段和借鉴。
- 李春穴童卫东刘宝华张连阳高峰龙在云
- 关键词：细胞培养CAJAL间质细胞
- 大黄素对体外培养Cajal间质细胞钙离子振荡功能的影响被引量：14
- 2006年
- 目的:探讨大黄素对体外培养Cajal间质细胞钙离子振荡的影响,从而进一步揭示大黄素等促进胃肠动力的分子机制方法:体外培养小鼠ICC,体外添加大黄素,应用钙离子指示剂标记细胞内钙离子含量,在激光共聚焦显微镜下动态观察其钙离子振荡功能的变化。结果:免疫荧光鉴定结果证实体外培养细胞为ICC,体外培养ICC具有钙离子振荡功能,大黄素能显著增强其钙离子振荡的频率和振幅。结论:大黄素能显著增强体外培养ICC钙离子振荡功能,可能是其促进胃肠动力的重要机制。
- 李春穴童卫东刘宝华龙在云
- 关键词：大黄素CAJAL间质细胞体外培养
- 阻断c-kit对小鼠小肠Cajal间质细胞的影响及机制初探被引量：7
- 2006年
- 目的:观察阻断c-kit对小鼠小肠Cajal间质细胞(ICC)的影响以及与Cajal间质细胞c-kit基因表达的关系。方法:选取新出生Balb/c小鼠,腹腔内隔天注射c-kit抗体(ACK2)100μg,共5次,对照组注射生理盐水,于小鼠出生后第10天观察小肠Cajal间质细胞的分布情况并检测小肠肌条c-kitmRNA及蛋白的表达。结果:阻断c-kit后小鼠小肠中未能明显观察到ICC分布,并且c-kitmRNA表达以及c-kit蛋白表达明显减少。结论:阻断c-kit可导致小鼠小肠Cajal间质细胞缺失,与ICCc-kit基因水平表达下调引起ICC发育受影响有关。
- 贾后军刘宝华童卫东张连阳文亚渊刘韧
- 关键词：CAJAL间质细胞小肠小鼠
- 胃肠道Cajal间质细胞与干细胞因子/c-kit信号途径关系被引量：17
- 2010年
- 胃肠道Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)是胃肠道慢波的起搏器,在胃肠道运动中具有重要作用。近年来,ICC表达c-kit的发现使人们对其有了更深的认识。c-kit与其配体干细胞因子(stem cell factor,SCF)所启动的信号途径对ICC的发生、发育及表型维持至关重要。从SCF/c-kit信号途径入手将为胃肠动力紊乱的治疗提供新思路。
- 贾后军童卫东刘宝华
- 关键词：CAJAL间质细胞干细胞因子
- Balb/c小鼠小肠慢波活力及肠肌间丛Cajal间质细胞的观察被引量：3
- 2004年
- 目的 测定Balb/c小鼠小肠慢波活动 ,并观察慢波的起搏细胞肠肌间丛Cajal间质细胞的分布特征。方法 选取成年Balb/c小鼠 ,在体记录小肠慢波活动的频率与振幅 ;通过小肠肌条切片和铺片 ,以c kit作为其标记 ,采用免疫组化法观察肠肌间丛Cajal间质细胞的分布情况。结果 Balb/c小鼠小肠慢波频率为 (7.8± 2 )次 /min ,振幅为 0 .4± 0 .0 7mV ;肠肌间丛Cajal间质细胞分布在小肠环肌层纵肌层间 ,呈网状分布特征。结论 Balb/c小鼠小肠存在慢波活动 ,肠肌间丛Cajal间质细胞的网络状分布特征可能与其产生和传导肠道慢波有重要关系。
- 贾后军刘宝华童卫东张连阳文亚渊陈恒胜刘建仓黄显凯
- 关键词：CAJAL间质细胞慢波C-KITBALB/C小鼠
- 重组腺病毒Ad-绿色荧光蛋白／干细胞白血病基因的构建及在Cajal间质细胞缺失模型鼠体内的分布和表达被引量：5
- 2007年
- 目的研究绿色荧光蛋白（cFP）标记的人干细胞自血病基因（SCL）重组腺病毒载体的快速构建及在Cajal间质细胞（ICC）缺失模型鼠体内的分布和表达，为进一步研究慢传输型便秘（STC）的基因治疗奠定基础。方法利用Ad-Easy系统、细菌内同源重组法快速构建重组腺病毒Ad-GFP／SCL。经尾静脉注射1．6×10^9PFU的重组腺病毒给ICC缺失模型Balb／c小鼠，在不同的时相点检测重组腺病毒在小鼠心、肺、肝、脾、肾、小肠及结直肠组织内的分布和表达；苏木精-伊红染色法观察重组腺病毒的体内毒性；RT-PCR法分析重组腺病毒介导的SCLmRNA在各脏器内的表达。结果通过荧光显微镜观察，在不同时期可以观察到小鼠心、肺、肝、脾、肾、小肠及结直肠组织内有不同程度的GFP表达：苏木精．伊红染色法显示各脏器未见明显毒性反应；RT-PCR法分析显示各脏器均有不同程度的SCLmRNA表达。结论成功构建的重组腺病毒Ad-GFP／SCL可介导SCL基因在ICC缺失模型Balb／c小鼠体内安全、稳定地表达，为进一步在体研究STC的基因治疗奠定了基础。
- 张林刘宝华童卫东李春穴
- 关键词：慢传输型腺病毒载体同源重组CAJAL间质细胞
- Cajal间质细胞的分离、培养方法探讨被引量：19
- 2004年
- 目的 探讨体外培养Cajal间质细胞 (interstitialcellsofCajal,ICC)的方法。 方法 以小鼠小肠为ICC的组织来源 ,应用酶解法并结合密度离心法分离、培养ICC ,对ICC培养中的污染、Ca2 + 、Mg2 + 离子以及胶原酶等影响因素进行了探讨 ,应用ICC特异的c kit抗体进行免疫荧光染色后在激光共聚焦显微镜对其进行了鉴定。结果 成功建立起一套的分离、培养的方法。免疫荧光鉴定结果提示 ,本方法建立的ICC分离培养方法是稳定可靠的。结论 ICC分离培养比较困难 ,需要注意防止污染、减少无Ca2 + 、Mg2 + 离子液体以及胶原酶消化时间等问题 ,本方法有望为致力于ICC细胞研究的科研工作者提供方法借鉴 ,并有望促进ICC研究的深入进行。
- 李春穴童卫东刘宝华张连阳张安平
- 关键词：CAJAL间质细胞免疫荧光染色
