国家教育部博士点基金(200807120022)
- 作品数：5 被引量：19H指数：2
- 相关作者：靳亚平王爱华周丽梅林鹏飞司永嘉更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学西藏农牧学院南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 猪有腔卵泡发育和闭锁中颗粒细胞凋亡与卵泡液类固醇激素的变化被引量：1
- 2011年
- 【目的】研究猪有腔卵泡发育和闭锁中颗粒细胞凋亡与卵泡液类固醇激素的变化,为了解猪有腔卵泡发育与闭锁的调控机理提供参考。【方法】从猪卵巢分离完整有腔卵泡,按质量分为健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡3类;再按卵泡直径大小分为大卵泡组（〉5 mm）、中卵泡组（3~5 mm）和小卵泡组（〈3 mm）3组,制作完整有腔卵泡的石蜡切片,HE染色后观察其形态学变化。应用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞仪检测壁层颗粒细胞凋亡情况,放射免疫测定法（RIA）分析卵泡液中雌二醇（E2）和孕酮（P4）浓度的变化。【结果】不同大小健康卵泡内均存在少量的凋亡颗粒细胞,卵泡闭锁时颗粒细胞凋亡率显著增加,小卵泡表现尤为明显;晚期闭锁小卵泡中约有60%的颗粒细胞发生凋亡。健康大卵泡组E2浓度显著高于中、小卵泡组,P4浓度与中卵泡组无差异,但显著低于小卵泡组。卵泡闭锁时不同大小卵泡均表现出E2浓度显著下降和P4浓度显著增加。中、小健康卵泡的卵泡液中P4/E2〈5,而健康大卵泡中P4/E2〈1;早期闭锁大卵泡卵泡液中P4/E2〉1,而早期闭锁中、小卵泡中P4/E2在5~15;当P4/E2〉15时,卵泡则处于晚期闭锁状态。【结论】颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁的主要诱因,但卵泡闭锁程度因卵泡大小而异,小卵泡似乎更易发生闭锁;卵泡液中P4/E2可作为判定有腔卵泡质量的一个标准。
- 林鹏飞剧世强罗碧平郝元斌王利勤芮荣靳亚平
- 关键词：有腔卵泡颗粒细胞凋亡孕酮雌二醇
- 山羊输卵管上皮细胞的分离与培养被引量：3
- 2010年
- 【目的】分离并培养山羊输卵管上皮细胞,研究其生长特性。【方法】采用胰酶、胶原酶及机械刮取方法分离输卵管上皮细胞并分析培养效果;选择免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定;向培养液中添加下丘脑粗提物、胰岛素、EGF和血清,探讨其对输卵管上皮细胞体外培养的影响。【结果】胰酶对山羊输卵管上皮细胞的分离效果较差,胶原酶次之,机械刮取方法较好。机械刮取法分离的细胞以细胞团居多,接种后8~12 h开始贴壁生长,生长2~3d细胞呈现明显的铺路石形态。免疫细胞化学染色显示,细胞角蛋白阳性率在95%以上。上皮细胞培养体系中含少量血清及人EGF、胰岛素,能有效促进原代和传代输卵管上皮细胞的生长,以体积分数5%血清＋EGF的培养效果较好。【结论】采用机械刮取法分离培养的输卵管上皮细胞,在体外可连续传到第8代,传代细胞活性强、纯度高,可为输卵管上皮细胞相关功能的研究提供材料。
- 李港杨艳王爱华靳亚平李倩
- 关键词：山羊输卵管上皮细胞胶原酶
- 小鼠子宫内膜细胞对小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PBMC转化与分泌活性的影响被引量：1
- 2010年
- 【目的】探索小鼠子宫内膜细胞培养上清液对小鼠脾脏淋巴细胞和山羊外周血单个核细胞(Peripheral Blood Monouclear Cells,PBMC)的转化及分泌活性的影响。【方法】采用噻唑蓝(MTT)比色法和酶联免疫吸附测定法(ELISA),分别研究小鼠子宫内膜上皮细胞(Endometrial Epithelial Cells,EECs)和基质细胞(Endometrial Stro-mal Cells,ESCs)培养上清液,对离体培养的小鼠脾脏淋巴细胞、山羊外周血单个核细胞(Peripheral Blood MonouclearCells,PBMC)的增殖转化及白细胞介素2(Interleukin-2,IL-2)和白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)分泌活性的影响。【结果】小鼠子宫内膜基质细胞和上皮细胞培养上清液,均可无种属差异地刺激小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PBMC的增殖转化,同时抑制植物血球凝素(Plant hemaggluti min PHA-P)诱导的小鼠淋巴细胞和山羊PBMC分泌IL-2的活性,但对PHA-P诱导的IL-4分泌有促进或协同作用。【结论】EECs和ESCs通过影响小鼠脾脏淋巴细胞和山羊PB-MC的增殖转化与分泌活性,优势活化Th2型淋巴细胞,在子宫局部免疫调节中发挥重要作用。
- 周丽梅贺亚媚牛雅静付胜勇靳亚平
- 关键词：子宫内膜细胞淋巴细胞山羊
- Zhangfei在小鼠动情周期卵巢和子宫中的分布
- 2011年
- 探讨Zhangfei(ZF)在动情周期小鼠子宫和卵巢中的分布规律。通过阴道涂片方法确定昆明雌性小鼠的动情周期,利用免疫组化SP法检测了ZF在小鼠动情周期子宫和卵巢组织中的定位。ZF在各级卵泡的卵母细胞中均呈阳性分布,且主要定位于胞质中;次级卵泡和三级卵泡的颗粒细胞层中可见ZF的存在;成熟卵泡的颗粒细胞中ZF蛋白的阳性更加明显。ZF在各个动情时期的黄体中均有分布,而在凋亡的颗粒细胞和泡膜细胞中未见阳性产物分布。ZF在子宫中主要分布于内膜上皮细胞和腺上皮细胞,间质细胞与肌层中未见分布,ZF在间情期活动较强,发情期较弱。推测ZF可能与小鼠动情周期中卵泡发育和腺体分泌等有关。
- 乔海娇林鹏飞王爱华
- 关键词：动情周期子宫卵巢小鼠
- 山羊子宫内膜上皮细胞转染pCI-neo-hTERT质粒后的永生化被引量：14
- 2010年
- 为获得大量的、具有高度同一性和表型功能正常的山羊子宫内膜上皮细胞(EEC),本试验将含人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的真核表达质粒pCI-neo-hT ERT导入原代山羊EEC中,筛选稳定转染的细胞克隆,进行表型鉴定,利用免疫细胞化学方法检测hTERT导入后细胞端粒酶活性的表达情况,探讨转染后细胞的生长特性。结果显示,转染后获得的阳性克隆细胞及其传代细胞呈明显铺路石状,与原代细胞形态一致,具有接触抑制性;角蛋白检测阳性;细胞具有较高的端粒酶活性,目前已传至50代仍稳定增殖;100nmol/L的雌二醇(E2)可促进该细胞的增殖;50,100nmol/L的孕酮(P4)可明显抑制该细胞的增殖。这表明hTERT导入山羊EEC后,可使其重建端粒酶活性,从而获得大量的、具有高度同一性和表型正常的细胞。
- 吴庆侠王爱华司永嘉周丽梅盛宏霞靳亚平
- 关键词：山羊子宫内膜上皮细胞HTERT端粒酶活性
