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鸡传染性法氏囊病病毒与DT40 sIgM λ轻链的相互作用分析被引量：2: 2009年; 为探讨sIgM λ轻链在IBDV感染法氏囊B淋巴靶细胞过程中的作用,对DT40细胞sIgM λ轻链与IBDV的相互作用进行了研究。利用蛋白表达、VOPBA试验、病毒结合与结合抑制试验检测了sIgM λ轻链及DT40细胞结合IBDV的能力。结果表明:sIgM λ轻链在体外能够特异性地结合多种不同毒株的IBDV,这种结合与病毒毒力无关;病毒结合与结合抑制试验结果表明,超过半数的DT40细胞可以结合IBDV,这种结合能够被sIgM λ轻链特异性单抗有效阻断。研究结果表明,sIgM λ轻链是DT40细胞膜表面上IBDV的重要结合位点之一,这为进一步利用DT40细胞研究IBDV感染B淋巴靶细胞的分子机制提供了重要线索。; 罗俊滕蔓邓瑞广杨继飞赵东柴书军叶世同孙玉梅张改平; 关键词：传染性法氏囊病病毒

鸡源细胞基因沉默及快速筛选的实用型双标记RNAi载体被引量：1: 2011年; 利用人H1 RNA启动子、EGFP基因及Neomycin抗性基因,构建用于禽类细胞基因持续沉默和快速筛选的实用型RNAi载体。在将pCDNA3.1(+)载体上的SV40启动子替换为鸡源的β-actin启动子后,装入EGFP基因表达框以及用于驱动外源shRNA转录的人H1 RNA启动子,构建成同时具有EGFP和Neomycin抗性双标记的RNAi载体,并为载体引入独特设计的含媒介序列的多克隆位点以方便外源shRNA编码小片断插入后的快速筛选,载体设计非常实用。插入靶向EGFP和sIgMλ基因的shRNA编码序列后分别瞬时转染DF-1和DT40细胞,结果显示靶基因表达得到了明显抑制。联用EGFP和Neomycin双标记快速筛选sIgMλ轻链基因稳定沉默的DT40细胞克隆的结果也证实,H1启动子转录shRNA的干扰效果是高效的,双标记筛选策略不仅有效而且方便、快捷。; 李培培游雷鸣罗俊鄂魏蒋志政郅玉宝张改平王爱萍; 关键词：EGFP RNAI载体

鸡传染性法氏囊病病毒在DT40细胞中的增殖规律被引量：3: 2009年; 为了系统地研究IBDV弱毒在DT40细胞系中的增殖规律,作者探讨了IBDV弱毒株对DT40细胞的侵染性以及不同培养条件对IBDV在该细胞中增殖的影响。结果表明,在基础维持液培养条件下,IBDV TAD和HN32个弱毒株均不需要传代适应过程即可直接感染DT40细胞,并在其中增殖;而在细胞最佳生长液条件下,IBDV可伴随宿主细胞的快速分裂而增殖,并可在较长培养时间内进行连续、大量的病毒收获。本研究表明DT40细胞可以作为深入探讨IBDV分子致病机制的良好靶细胞模型,其同时也可能为生产IBDV商品化疫苗提供一种潜在便捷的工具细胞。; 罗俊滕蔓樊剑鸣邢广旭李乔木杨艳艳张改平; 关键词：IBDV 病毒增殖疫苗制备

DT40细胞sIgMλ轻链基因敲除载体的构建: 2009年; 从鸡B淋巴DT40细胞系中克隆-βactin启动子,替换pCDNA3.1(+)载体中的SV40启动子,构建-βactin启动子驱动的Neomycin抗性基因表达框。将克隆的sIgMλ轻链基因两侧各约2 kb的序列插入到抗性表达框的两侧作为同源臂。PCR、酶切以及测序结果表明成功构建了靶向sIgMλ轻链基因的置换型打靶载体pCDNA-act-neo-HR。为建立sIgMλ轻链基因敲除的DT40细胞模型,探究sIgMλ轻链在IBDV感染DT40细胞过程中的作用奠定了基础。; 游雷鸣罗俊王爱萍张改平卜丹郭亚男祈艳华; 关键词：基因敲除同源重组

DT40细胞sIgMλ轻链基因的克隆鉴定及原核表达: 2009年; 本研究利用RT-PCR技术,从鸡法氏囊淋巴瘤细胞系DT40中扩增sIgMλ轻链基因并在E.coli中进行了表达。序列分析结果表明,sIgMλ轻链基因全长852nt,含有一个长度为657nt的ORF及长度为195nt的3'-UTR,该基因与鸡Igλ基因的序列同源性为95%,差异位点主要存在于λ轻链的可变区。氨基酸序列预测结果表明,DT40sIgMλ蛋白与鸡Igλ蛋白的序列同源性为92.6%。构建的原核表达载体pET-λ在E.coliBL21(DE3)中成功的获得大量表达。本实验为进一步研究sIgM在IBDV感染法氏囊B淋巴细胞中的作用奠定了基础。; 罗俊樊剑鸣滕蔓王方雨王丽叶世同孙玉梅张改平; 关键词：传染性法氏囊病病毒

应用EPF抗血清进行奶牛超早期妊娠诊断的研究被引量：2: 2010年; 为了建立一种快速、高效的奶牛早期和超早期妊娠诊断的方法,采用多肽合成仪合成了早孕因子(EPF)的部分肽段(MC29),将MC29与载体蛋白BSA连接后免疫Balb/C小鼠,制备EPF抗血清,用EPF抗血清阻断ELISA对6头奶牛进行超早期妊娠诊断。结果表明:妊娠10～21d的4头奶牛血清检测均为阴性,2头未妊娠奶牛血清均为阴性,该结果与输精2个月后的直肠检查和B超鉴定的结果相一致。说明应用EPF抗血清进行阻断ELISA可以准确的进行奶牛超早期妊娠诊断。; 权凯张改平杨苏珍尹慧茹; 关键词：早孕因子 ELISA 超早期妊娠诊断奶牛

早孕因子的生物学特性及其在动物繁殖领域中的应用被引量：8: 2009年; 早孕因子(early pregnancy factor,EPF)最初发现于孕鼠血清,是妊娠哺乳动物血清中存在的一种具有免疫抑制和生长调节作用的妊娠相关蛋白。EPF的氨基酸序列包括102个氨基酸残基,与伴侣蛋白10(chaperonin 10,Cpn10)高度同源,是Cpn10在细胞外发挥的效应,对温度、酸碱度的耐受性较强,无动物及品种特异性。其生物学特性主要体现在抑制免疫和生长调节两方面:①EPF具有抑制母体的免疫反应而使精子、胚胎免受免疫排斥的作用,也是目前最早确认妊娠的生化标志之一;②EPF能促进肿瘤细胞的生长,也能促进烧伤、溃疡等伤口的愈合。由于EPF能增强抗淋巴细胞血清抑制T细胞花环的形成,因此,玫瑰花环抑制试验是检测EPF活性的经典方法。EPF在动物繁殖领域可用于动物的早期、超早期妊娠诊断,妊娠中断的检测,胚胎移植后的成活情况检测,在评价雄性繁殖力和繁殖免疫疾病的治疗等方面有着重要价值。; 权凯张改平; 关键词：早孕因子

鸡传染性法氏囊病病毒河南分离株HeYD VP2基因高变区基因克隆及序列分析被引量：3: 2011年; 为初步确定新分离的鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)河南株HeYD的毒力,根据GenBank数据库中已报道的IBDV基因组序列,设计合成了1对VP2基因高变区特异性引物,应用RT-PCR方法对分离自河南省某发病鸡场的IBDV野毒株HeYD的VP2基因高变区进行了基因克隆及序列分析,并与其他参考毒株高变区进行了序列比对。序列分析结果表明,HeYD株的VP2基因高变区具有IBDV超强毒株典型的氨基酸序列特征,即222位(A)、256位(I)、294位(I)和299位(S),表明HeYD为超强毒株。利用VP2基因高变区序列构建基因进化树,发现HeYD株与国内超强毒株如xin-1、GX8-99以及国外超强毒株如日本的OKYM和欧洲的DV86毒株亲缘关系较近。; 鄂巍张改平罗俊滕蔓王兴涛王爱萍; 关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因高变区基因克隆

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河南省基础与前沿技术研究计划项目(082300433201)