北京市教育委员会科技发展计划(KZ200810025012)
- 作品数：11 被引量：43H指数：5
- 相关作者：李俊发卜祥宁张楠江君杨巍巍更多>>
- 相关机构：首都医科大学滨州医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市教育委员会科技发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蛋白激酶Cgamma参与低氧预适应减轻脑中动脉阻塞所致小鼠缺血性脑损伤
- 目的探讨低氧预适应（HPC）对脑中动脉阻塞（MCAO）所致脑缺血性损伤的影响及其可能的机制。方法借助已建小鼠整体HPC和脑MCAO模型,应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色、Nissl染色、SDS-PAGE和W...
- 梁婧杜建丽封素娟刘旭张彩艳张楠卜祥宁李俊发
- 文献传递
- 低氧预适应对缺血脑组织的保护作用及其蛋白激酶C亚型特异性信号转导机制研究
- 目的:脑缺血/低氧预适应(I/HPC)内源性保护现象的发现,为临床缺血/低氧性脑疾病尤其是脑卒中的防治带来了新希望,即缺血/低氧预处理组织器官对继发严重缺血/低氧刺激产生耐受,但目前其发生发展机制尚不清楚。我们曾报道,经...
- 李俊发
- 关键词：蛋白激酶C蛋白质组学信号转导
- 文献传递
- 蛋白激酶CβⅡ和γ参与低氧预适应降低脑中动脉阻塞所致鼠脑缺血性损伤被引量：5
- 2009年
- 目的探讨低氧预适应（HPC）对脑中动脉梗塞（MCAO）小鼠脑的保护作用,以及缺血皮层内经典型蛋白激酶C（cPKC）βⅡ和γ膜转位水平的改变。方法健康雄性BALB/c小鼠（18-22 g,8-10周）随机分为：H0假手术（n=6）,H0缺血（n=6）,H4假手术（n=6）和H4缺血（n=6）组。运用整体低氧预适应模型和脑中动脉梗塞缺血模型,结合2,3,5氯-化三苯基四氮唑（TTC）染色、SDS聚-丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和蛋白印迹（W estern blot）等分子生物学技术,观察脑梗死面积、缺血区密度值和水肿率,以及MCAO小鼠缺血皮层组织内PKCβⅡ和γ膜转位水平的变化。结果研究发现,HPC可明显减小MCAO导致的鼠脑梗死面积（P〈0.05）,降低缺血区吸光度值（P〈0.05）和水肿率（P〈0.05）;与H0假手术组相比,缺血组小鼠皮层半影区cPKCβⅡ和γ膜转位水平显著降低（P〈0.05）;与H0缺血组小鼠皮层半影区相比,H4缺血组小鼠皮层半影区内PKCβⅡ和γ膜转位水平明显增高（P〈0.05）。结论HPC可能通过增加MCAO小鼠皮层组织内cPKCβⅡ和γ的膜转位水平,对缺血损伤起保护作用。
- 杨巍巍江君卜祥宁张楠谢培伦张伯民李俊发
- 关键词：低氧预适应蛋白激酶C膜转位
- 低氧预适应对小鼠缺血脑的保护及其p38 MAPK机制的实验研究被引量：8
- 2009年
- 目的观察低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)降低脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)所致小鼠缺血性脑损伤的作用,探讨在HPC脑保护作用中p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)的变化。方法60只健康雄性BALB/c小鼠(18g～22g,8周～10周)分为:常氧假手术组(H0sham),常氧缺血组(H0),HPC假手术组(H4sham)和HPC缺血组(H4),每组15只。运用整体低氧预适应模型和脑中动脉梗死缺血模型,结合神经行为学评价、氯化三苯基四氮唑(TTC)染色、免疫组织化学和蛋白印迹(Westernblotting)技术,观察HPC对小鼠脑缺血损伤的影响以及皮质组织内p38MAPK磷酸化水平和蛋白表达量的变化。结果研究发现,HPC可明显改善小鼠缺血后神经行为学表现,减小MCAO导致的鼠脑梗死面积,减轻半影区神经元的丢失,降低缺血区水肿率和密度值;与H0假手术组相比,缺血组小鼠皮质半影区p38MAPK磷酸化水平显著增高;与常氧缺血组小鼠皮质半影区相比,HPC缺血组小鼠皮质半影区内p38MAPK磷酸化水平增高更加明显。结论p38MAPK信号转导通路可能参与了HPC对小鼠局灶性缺血脑的保护作用。
- 刘旭封素娟张彩艳卜祥宁张楠闫睿王芊芸李俊发
- 关键词：低氧预适应P38丝裂原激活蛋白激酶磷酸化水平
- 脑衰蛋白反应调节蛋白-2参与低氧预适应减轻小鼠脑缺血损伤被引量：4
- 2009年
- 目的研究参与低氧预适应(HPC)的经典型蛋白激酶CβⅡ(cPKCβⅡ)相互作用的脑衰蛋白反应调节蛋白-2(CRMP-2)对缺血脑是否有保护作用。方法成年雄性BALB/c小鼠随机分为常氧(Nor)、HPC、常氧假手术(Nor+sham)、HPC假手术(HPC+sham)、常氧缺血(Nor+I)和HPC缺血(HPC+I)等6组(每组n=6)。应用小鼠整体HPC和脑中动脉梗死(MCAO)致脑局部缺血模型,结合免疫沉淀、双向凝胶电泳和质谱等技术,分离和鉴定与cPKCβⅡ相互作用蛋白;利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)技术,分析CRMP-2磷酸化和蛋白降解水平在脑HPC和缺血中的变化。结果与Nor组比,HPC鼠脑皮层组织内有10种与cPKCβⅡ相互作用蛋白的表达发生了明显变化,其中CRMP-2在膜相关蛋白组分中的表达量升高,而在胞质蛋白组分中的表达量降低。在脑缺血模型中,与Nor+Sham组相比,Nor+I组小鼠脑皮层缺血核心区(Ic)CRMP-2磷酸化水平明显降低(P<0.05,n=6);与Nor+I组相比,HPC+I组小鼠脑皮层Ic区内CRMP-2磷酸化水平明显增高(P<0.05,n=6)。脑缺血可导致CRMP-2发生水解并伴随着大量55ku水解片段(BDP)的出现,但与Nor+I组相比,HPC+I组小鼠脑皮层缺血半影区(P)内CRMP-2水解片段减少,水解率明显降低(P<0.05,n=6)。结论CRMP-2参与了HPC缓解小鼠脑缺血Ic区内CRMP-2磷酸化水平的降低和减少P区内CRMP-2水解片段从而减轻缺血脑组织的损伤。
- 张彩艳封素娟刘旭卜祥宁张楠郑雅欣袁晓文李晓光李俊发
- 关键词：低氧预适应大脑中动脉阻塞
- 低氧预适应小鼠脑组织内CaMKⅡ磷酸化水平增高被引量：1
- 2010年
- 目的探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMKⅡ)在小鼠脑低氧预适应(HPC)发生发展中的作用。方法成年雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照(H0)、早期(H1～H4)和延迟性(H5～H6)低氧预适应等共计7组,制备小鼠HPC模型;用Western blot并结合GelDoc凝胶成像系统,检测小鼠脑组织内CaMKⅡ磷酸化水平和蛋白表达量;用免疫组化检测小鼠脑皮层和海马CaMKⅡ磷酸化水平。结果与H0组小鼠相比,H3～H5组海马和皮层的CaMKⅡ磷酸化水平明显升高(P<0.05);而H1～H6组的皮层和海马的CaMKⅡ蛋白表达量无明显变化;H3、H6组皮层和海马p-CaMKⅡ阳性细胞数目增多和灰度增强。结论CaMKⅡ磷酸化水平的升高可能参与了小鼠脑HPC的发生发展过程。
- 李海涛江君杨巍巍卜祥宁韩松李俊发
- 关键词：低氧预适应海马皮层
- 蛋白激酶C epsilon介导低氧预适应对小鼠缺血性脑的保护作用
- 目的脑缺血/低氧预适应（I/HPC）是一种内源性保护机制,可使组织细胞对继发严重的缺血/低氧刺激产生耐受。本研究旨在探讨低氧预适应（HPC）对小鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）所致脑缺血性损伤的影响及新奇型蛋白激酶C eps...
- 杜建丽梁婧封素娟刘旭张彩艳张楠卜祥宁李俊发
- 文献传递
- 低氧预适应小鼠脑皮层内与nPKC epsilon相互作用蛋白的鉴定
- 目的低氧预适应是一种机体内源性保护机制,指轻度的低氧刺激可诱使组织或细胞对随后发生的重度持续性缺血/低氧产生耐受能力。我们以往的研究表明,蛋白激酶C epsilon（nPKC epsilon）的膜转位激活可能参与了脑HP...
- 封素娟刘旭张彩艳卜祥宁张楠梁婧杜建丽李俊发
- 关键词：低氧预适应蛋白表达量
- 文献传递
- 简易高效分离培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞方法的建立被引量：1
- 2011年
- 目的建立一种高效分离、培养大鼠胸主动脉血管内皮细胞的方法。方法用Wistar大鼠(200～250 g),无菌条件下开胸取胸主动脉,去除血管外膜,制备长约1.0～1.5 mm动脉环。将血管环垂直置于干燥的培养皿中,并向血管环内加入含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养液、静止培养;24 h血管环贴壁后,加入培养液;3～4 d内皮细胞长出,弃血管环,并经0.25%胰蛋白酶消化传代。用形态学、免疫细胞化学及流式细胞分析等方法,鉴定血管内皮细胞标志物,vWF的表达。结果培养3～4 d时有细胞自主动脉环内迁移出并贴壁生长,细胞汇合后呈现典型的"铺路石"样内皮细胞特征;免疫组化和流式细胞分析结果示,vWF表达阳性率可高达98.3%±0.2%。结论用改良的植块培养方法,不需要胶原及内皮细胞生长补充物,较传统酶消化法更为经济、高效,且简便易行,适用于细小血管内皮细胞的分离与培养。
- 韩松曲彦明李俊发
- 关键词：内皮细胞胸主动脉
- P38 MAPK-BCL-xL途径参与低氧预适应减轻小鼠脑缺血性损伤被引量：3
- 2010年
- 目的探讨P38丝裂原激活蛋白激酶(P38 MAPK)-BCL-xL抗凋亡途径在低氧预适应(HPC)保护小鼠缺血脑组织中的作用。方法 SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为4组:常氧假手术(NS)、常氧缺血(NI)、HPC假手术(HS)和HPC缺血(HI)组。利用小鼠整体HPC模型、脑中动脉梗死(MCAO)致脑皮层局部缺血模型及P38 MAPK抑制剂SB203580的干预,用原位末端标记法(TUNEL)观察神经细胞凋亡;用蛋白印迹(Western blot)检测抗凋亡蛋白BCL-xL的表达;用免疫沉淀技术探讨BCL-xL与P38 MAPK之间的相互作用。结果 HPC可明显减少缺血皮层半影区内神经细胞凋亡数量,提高半影区线粒体内BCL-xL蛋白水平;侧脑室注射P38 MAPK抑制剂SB203580可消除HPC在缺血半影区内的抗凋亡作用;免疫沉淀结果提示,BCL-xL与P38 MAPK可能存在直接相互作用。结论 HPC可能通过P38 MAPK-BCL-xL抗凋亡途径实现对缺血脑组织的保护作用。
- 梁婧杜建丽朱熠婧赵丽罗艳琳李俊发
- 关键词：低氧预适应BCL-XLP38MAPK
