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神经干细胞移植防治骨骼肌失神经肌萎缩的电生理研究被引量：10: 2007年; 目的探讨采用神经干细胞移植的方法防治骨骼肌失神经萎缩的可行性。方法采用机械分离的方法从孕14～16d的SD孕鼠中获取神经干细胞，并于神经元限定性培养基中进行传代培养，制备神经干细胞单细胞悬液。采用切断右侧胫神经的方法建立腓肠肌失神经支配的动物（SD大鼠）模型。将108只SD大鼠按注射药物的不同随机分为3组，每组36只大鼠。实验组：将神经干细胞悬液注射到切断的胫神经远端。损伤组：注射等量的生理盐水。对照组：注射等量的细胞培养液。术后8、12周采用HRP逆行示踪技术检测失神经骨骼肌重获神经再支配的情况，并应用肌肉电生理方法对重获神经再支配的骨骼肌进行功能评价。结果术后8、12周实验组用电刺激细胞移植部位的腓肠肌，均可引出肌肉收缩活动；且随着时间的延长，单次收缩的波幅、速度，和强直收缩的时间和强直收缩波幅的恢复率均进一步得到改善。对照组和损伤组均未能引出肌肉活动。结论神经干细胞移植能够实现失神经骨骼肌的神经再支配，并且能够与骨骼肌建立起功能性突触连接，有效预防骨骼肌的萎缩。; 王德华徐建光周文俊李继峰顾玉东; 关键词：周围神经电生理学肌萎缩神经干细胞移植

胚胎大鼠脊髓神经干细胞体外培养和分化的研究被引量：7: 2004年; 目的　探讨脊髓源性神经干细胞的培养方法和体外分化特性。　方法　从孕龄 15天的胚胎大鼠脊髓组织中分离获得神经干细胞 ,采用含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的无血清限定性培养基培养并进行干细胞体外分化 ,细胞免疫荧光化学方法鉴定分化结果。　结果　胚胎脊髓中可分离得到大量的神经干细胞 ,培养 10天左右可获得干细胞球 ;用细胞免疫荧光化学法鉴定干细胞分化 ,可见其中含有神经元和星形胶质细胞。　结论　无血清限定性培养基是脊髓源性神经干细胞的良好培养基 ;; 王德华徐建光姜浩李继峰汪洋王劼周国民顾玉东; 关键词：胚胎脊髓神经干细胞分化

神经营养因子-3诱导大鼠脊髓神经干细胞分化为胆碱能神经元的实验研究被引量：2: 2007年; 目的观察神经营养因子-3（NT-3）在体内外能否诱导脊髓源性神经干细胞分化为胆碱能神经元。方法从孕龄15d的胚胎sD大鼠脊髓组织中分离获得脊髓源性神经干细胞。体外诱导分化研究：实验组在培养脊髓源性神经干细胞时，去除表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子加入NT-3进行诱导；对照组则单纯培养脊髓源性神经干细胞。体内诱导分化研究：实验组将去除表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子加入NT-3的脊髓源性神经干细胞混合悬液移植于成年SD大鼠切断胫神经远端，对照组则移植未加NT-3脊髓源性神经干细胞悬液。细胞免疫荧光化学法鉴定分化结果。结果经NT-3诱导的脊髓源性神经干细胞用细胞免疫荧光化学法鉴定，体内外培养均可检测到胆碱乙酰基转移酶阳性细胞，而对照组则未检测到胆碱乙酰基转移酶阳性细胞。结论 NT-3在体内外均可诱导脊髓源性神经干细胞分化为胆碱能神经元。; 林森徐建光胡韶楠徐文东徐雷顾玉东汪洋周国民; 关键词：脊髓干细胞胆碱能神经元神经营养因子-3

神经干细胞移植再支配失神经骨骼肌的实验研究被引量：8: 2004年; 目的探讨采用神经干细胞移植的方法使失神经骨骼肌重获神经再支配的可行性。方法将108只SD大鼠按注射药物的不同随机分为3组,每组36只大鼠。切断右侧胫神经建立腓肠肌失神经实验模型。实验组:将神经干细胞悬液注射到切断胫神经的远端。对照组:注射等量的细胞培养液。损伤组:注射等量的生理盐水。术后8、10、12周采用免疫组织化学、HRP逆行示踪技术和神经形态学的方法,检测失神经骨骼肌是否重新获得移植神经干细胞的再支配。结果术后8周局部即可检测到分化的神经元和神经胶质细胞,其再生的轴突与靶肌肉已经建立神经突触连接。术后10、12周时,再生的神经纤维进一步增多。结论周围神经断伤后局部用神经干细胞移植能够使远端失神经骨骼肌重新获得神经再支配。; 王德华徐建光姜浩李继峰顾玉东; 关键词：神经干细胞移植神经再支配周围神经损伤骨骼肌萎缩

不同移植时间对胚胎脊髓源性神经干细胞体内分化为神经元影响的实验研究被引量：2: 2008年; 目的探讨不同移植时间对胚胎脊髓源性神经干细胞体内分化为神经元影响，为胚胎脊髓源性神经干细胞移植防治骨骼肌失神经萎缩的最佳移植时间点的选择提供实验依据。方法从孕龄14dSD大鼠胚胎脊髓组织中分离、获得并鉴定脊髓源性神经干细胞。90只SD大鼠分为9组，分别于胫神经切断后0、1、2、3、4、6、8、12及16周，移植胚胎脊髓源性神经干细胞至切断胫神经远端神经外膜下，移植后4周取胫神经冰冻切片行免疫组化方法计数神经元数量并进行图像分析。结果损伤后1周移植时，神经元数量最多，其次为损伤后6周，损伤后16周组无神经元存在。结论对胚胎脊髓源性神经干细胞体内移植后分化为神经元影响最小的时间点是损伤后1周，因此我们可以推断胚胎脊髓源性神经干细胞移植防治骨骼肌失神经萎缩的最佳移植时间点是损伤后1周。; 林森徐建光胡韶楠徐文东徐雷顾玉东汪洋周国民; 关键词：干细胞神经元

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国家自然科学基金(30271308)