国家自然科学基金(30971912)
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
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- OsWRKY79基因克隆和植物表达载体的构建
- 2011年
- WRKY是植物体中重要的转录因子,克隆水稻OsWRKY79基因将为其在植物体内的定位和功能研究奠定基础。根据GenBank公布的OsWRKY79基因序列设计特异引物,以RT-PCR法从水稻幼苗中克隆OsWRKY79基因,将其亚克隆至含有GFP基因的pBinGFP表达载体中,经菌落PCR和酶切鉴定,成功构建了重组质粒pBinGFP-OsWRKY79。
- 唐馨刘忠渊王小兰
- 关键词：绿色荧光蛋白基因克隆
- 褐飞虱唾液腺中水稻抗性适应基因的分离被引量：1
- 2013年
- 褐飞虱Nilaparvatalugens（StM）是一种危害水稻的重要害虫，在取食水稻时其唾液腺分泌的一些物质能激发水稻产生一系列生理生化反应。为了从褐飞虱唾液腺中得到编码这些分泌物的基因，本研究运用抑制差减杂交法（suppressedsubtractivehybridization，SSH）和镜像选择（mirrororientationselection，MOS）法，分别以取食抗虫水稻B5和敏感水稻TNl的褐飞虱唾液腺cDNA为tester和driver，构建了一个含有768个克隆子的抑制差减杂交文库。经筛选得到102个EST，插入序列长250～1000bp，代表35个单基因。其中28个表达上调，7个表达下调。经GenBank里的blastx在线分析工具分析，除了约1／3的转录序列没有相匹配的蛋白质外，其他EST所代表的氨基酸序列与已知蛋白存在不同程度的相似度，如海藻溏酶、卵黄蛋白原、ca。’结合蛋白、组织蛋白酶B（cathepsinB）、黏液样蛋白（putativemucin—likeprotein）、羧酸酯酶（carboxylesterase）和碳酸酐酶（cah·3carbonicanhydrase）等，且多数蛋白含有信号肽，推测与分泌有关。本研究将为进一步研究刺吸式昆虫中的激发子蛋白奠定了一定的基础。
- 陈鹏宇刘顺枝王小兰
- 关键词：褐飞虱抗虫水稻激发子
- 水稻OsWRKY17基因定位表达载体的构建(英文)
- 2012年
- [目的]研究水稻OsWRKY17基因的生理生化特性,确定OsWRKY17蛋白在植物中的定位。[方法]根据GenBank数据库中OsWRKY17全序列设计引物,进行OsWRKY17的RT-PCR扩增,克隆了OsWRKY17基因,将该片段与带绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒载体pBinGFP重组,将构建正确的表达载体pBinGFP-OsWRKY17通过农杆菌介导的花蕾浸泡法转化到拟南芥中。[结果]经菌落PCR与酶切鉴定表明成功构建了Os-WRKY17基因与GFP融合的植物表达载体pBin-GFP/OsWRKY17,并成功将OsWRKY17基因整合到拟南芥的基因组中,获得了抗性植株。[结论]OsWRKY17基因表达载体的构建为研究该基因的生理生化特性奠定了基础。
- 王小兰唐馨刘忠渊
- 关键词：GFP基因
- At3g13600截短型蛋白的原核表达载体的构建被引量：1
- 2011年
- 拟南芥基因At3g13600编码一种钙调素结合蛋白,序列分析表明,该基因cDNA序列全长1 818 bp,编码一个具有606个氨基酸残基的多肽,推测分子量为68.9 kD;在At3g13600蛋白的N端存在IQ钙调素结合构象.为了从实验上进一步研究该蛋白的钙调素结合特性,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增含IQ序列与否的不同长度的编码区cDNA序列,构建到原核表达载体pET32 a+中.测序结果表明:目的序列已正确克隆到表达载体上,为进一步表达目的蛋白及研究其功能奠定了基础.
- 王小兰周宇彭慧峰刘顺枝田长恩
- 关键词：钙调素结合蛋白表达载体构建
- 水稻OsWRKY78与GFP融合基因的拟南芥转化及亚细胞定位
- 2012年
- [目的]确定OsWRKY78蛋白在植物中的定位。[方法]根据GenBank数据库中OsWRKY78全序列设计引物,进行OsWRKY78的RT-PCR扩增,克隆了OsWRKY78基因,将该片段与带绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒载体pBinGFP重组,并对重组载体进行菌液PCR和酶切验证,最后利用农杆菌介导的花蕾浸泡法将重组载体转化到拟南芥中,对其亚细胞定位进行研究。[结果]试验克隆得到了pBinGFP-OsWRKY78重组载体,经菌落PCR与酶切检测表明构建的表达载体正确,其转化到拟南芥中后得到了转基因植株,荧光显微镜检测结果表明,OsWRKY78基因表达产物主要定位在细胞核中。[结论]该研究结果为深入研究OsWRKY78基因的功能及其在相关信号传导中的作用奠定了基础,也为进一步研究OsWRKY78基因与褐飞虱之间的关系提供了理论依据。
- 刘顺枝张美唐馨王小兰
- 关键词：绿色荧光蛋白基因亚细胞定位
- 农药残留动态的原位衰减全反射红外光谱表征被引量：1
- 2012年
- 原位衰减全反射红外光谱用于农药残留动态研究。通过对果蔬(西红柿)表面敌敌畏和乙酰甲胺磷两种农药的原位表征,发现敌敌畏具有显著的挥发性,喷淋20min后降解达80%,同时,表征CO的1 734cm-1吸收峰在20min转为负峰,结合3 073cm-1吸收峰显著减弱,1 277cm-1吸收峰在减弱的同时发生了显著的红移(30cm-1),表明敌敌畏可能存在一定程度的水解;而喷淋乙酰甲胺磷后120min无明显变化,表明乙酰甲胺磷相对稳定。
- 姚焱张平陈绮洁刘文峰曾娟谢建军孙莉丽王小兰
- 关键词：农药敌敌畏乙酰甲胺磷
- OsMT-1-4c基因原核表达载体的构建、表达及重金属抗性研究被引量：2
- 2017年
- 为研究水稻抗重金属的特性,构建了水稻金属硫蛋白(metallothionein,MT)原核表达载体PGEX4T-3-Os MT-1-4c,并转化到Rossetta菌株中诱导表达,得到大小为33.643 k Da的GST-Os MT-1-4c重组蛋白。将得到的沉淀用1×PBS溶解并在低温下超声破碎,离心并电泳检测,然后纯化得到融合蛋白。并在重金属Cd^(2+)胁迫下诱导表达重组载体和空载体菌株,发现能表达GST-Os MT-1-4c蛋白菌株比表达GST蛋白菌株抗重金属的能力强。
- 唐伟张美王小兰
- 关键词：金属硫蛋白原核表达
- 水稻OsWRKY17基因定位表达载体的构建
- 2012年
- [目的]研究水稻OsWRKY17基因的生理生化特性,确定OsWRKY17蛋白在植物中的定位。[方法]根据GenBank数据库中Os-WRKY17全序列设计引物,进行OsWRKY17的RT-PCR扩增,克隆了该基因,将该片段与带绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒载体pBinG-FP重组,将构建正确的表达载体pBinGFP-OsWRKY17通过农杆菌介导的花蕾浸泡法转化到拟南芥中。[结果]经菌落PCR与酶切鉴定表明成功构建了OsWRKY17基因与GFP融合的植物表达载体pBinGFP-OsWRKY17,并成功将OsWRKY17基因整合到拟南芥的基因组中,获得了抗性植株。[结论]OsWRKY17基因表达载体的构建为研究该基因的生理生化特性奠定了基础。
- 王小兰唐馨刘忠渊
- 关键词：GFP基因
- 水稻OsWRKY78与GFP融合基因的拟南芥转化及亚细胞定位(英文)被引量：1
- 2012年
- [目的]确定OsWRKY78蛋白在植物中的定位。[方法]根据GenBank数据库中OsWRKY78全序列设计引物,进行OsWRKY78的RT-PCR扩增,克隆了OsWRKY78基因,将该片段与带绿色荧光蛋白(GFP) 基因的质粒载体pBinGFP重组,并对重组载体进行菌液PCR和酶切验证,最后利用农杆菌介导的花蕾浸泡法将重组载体转化到拟南芥中,对其亚细胞定为进行研究。[结果]试验克隆得到了pBinGFP-OsWRKY78重组载体,经菌落PCR与酶切检测表明构建的表达载体正确,其转化到拟南芥中后得到了转基因植株,荧光显微镜检测结果表明,OsWRKY78基因表达产物主要定位在细胞核中。[结论]该研究结果为深入研究OsWRKY78基因的功能及其在相关信号传导中的作用奠定了基础,也为进一步研究OsWRKY78基因与褐飞虱之间的关系提供了理论依据。
- 刘顺枝张美唐馨王小兰
- 关键词：GENEFLUORESCENTGENEVECTORSUBCELLULAR
- 何首乌及其提取物的漫反射和衰减全反射红外光谱研究被引量：4
- 2013年
- 采用漫反射和衰减全反射两种红外光谱分析何首乌及其提取物。结果表明,以丙酮为提取剂时,何首乌其提取物中,韧皮部的有效成分含量最高,木质部的有效成分含量最低;通过两种方式的比较,发现何首乌及提取物的红外谱图存在一定的差异,何首乌在3 576和3 147cm-1有两个平缓的吸收峰,而提取物则在3 351cm-1有一强吸收峰,表明提取物中的OH…活性成分较多;同时,何首乌在931,859,766和709cm-1处有明显的吸收,而其提取物则没有,这也表明提取的是活性成分。
- 姚焱陈绮洁张平刘文峰孙莉丽杜文卿佘婷慧康小龙王小兰
- 关键词：何首乌
