国家自然科学基金(30271314)
- 作品数：11 被引量：33H指数：3
- 相关作者：蔡宣松梅炯张立智钱光薛华明更多>>
- 相关机构：同济大学附属同济医院复旦大学上海市杨浦区中心医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- p53基因与骨肉瘤治疗及其预后的相关性(英文)被引量：7
- 2004年
- 骨肉瘤的发生是多基因、多步骤、多阶段、多重损伤并存的过程,众多情况下认为是由于细胞核DNA分子受破坏,细胞不能修复受损的DNA分子,其继续存在并复制可激活癌基因和(或)抑癌基因异常,发展成为骨肉瘤。在细胞抑癌基因中p53基因研究最广泛,50%人类肿瘤与p53基因突变有关。动物试验证实:存在p53基因突变的转基因鼠中除了淋巴瘤和肺腺癌外,骨肉瘤的发生率最高。p53基因的突变和失活影响着骨肉瘤的发生、发展、预后。随着少数p53基因治疗进入临床实验阶段,目前p53的基因治疗研究也出现了一些新的策略。随着分子生物学手段的不断发展和完善,基因治疗的安全性和有效性的提高,p53基因治疗将在骨肉瘤的治疗中体现出不可估量的作用。
- 张立智蔡宣松
- 关键词：P53基因骨肉瘤预后抑癌基因
- 腺病毒介导干扰RNA对荷人骨肉瘤裸鼠VEGF表达的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:探讨AD-VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤裸鼠瘤体组织以及血液中VEGF表达的影响。方法:应用VEGF高表达人骨肉瘤细胞系MG-63制备荷骨肉瘤裸鼠模型;成瘤组动物随机分为3组,AD-VEGF-siRNA组15只;AD-EGFP组15只;PBS组15只。另留取3只裸小鼠,未接种肿瘤细胞,未注射药物。成瘤裸鼠瘤体内分别注射上述各组药物,隔天1次,200μl/次,共5次,病毒总量2×109PFU。接种后第11天、14天、17天实验各组分别处死3只裸小鼠,用ELISA法检测各组荷瘤小鼠血液和瘤体组织中VEGF蛋白表达情况。试验结束(第19天)处死剩余裸小鼠,用RT-PCR及免疫组化技术检测裸小鼠瘤体组织VEGF的表达,用ELISA法检测各组荷瘤小鼠血液和瘤体组织中VEGF蛋白的表达。结果:1)各组裸小鼠约在接种5天成瘤;2)用AD-VEGF-siRNA处理后,RT-PCR检测发现裸小鼠瘤体组织的VEGFmRNA表达水平明显低于两对照组(P<0.05);3)免疫组化检测发现AD-VEGF-siRNA组VEGF蛋白表达明显减少;4)ELISA检测发现成瘤组小鼠血清VEGF蛋白水平明显高于未作任何处理的健康裸小鼠组(P<0.05),在各时间段AD-VEGF-siRNA组血液及瘤体组织中VEGF蛋白的表达水平明显低于两对照组(P<0.05)。结论:AD-VEGF-siRNA在体内可以抑制荷骨肉瘤裸小鼠瘤体VEGF基因的表达及血液中VEGF的水平;应用siRNA腺病毒表达载体技术为骨肉瘤抗血管生成的治疗提供了借鉴。
- 薛华明梅炯蔡宣松钱光胡牧王家骐涂意辉
- 关键词：RNA骨肉瘤腺病毒载体
- 腺病毒介导VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤裸鼠移植瘤生长的影响被引量：5
- 2007年
- 目的:观察腺病毒介导的VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤细胞株MG63裸鼠移植瘤生长的影响。方法:将Ad-VEGF-siRNA感染MG63,用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)法检测细胞体外增殖活力,反转录-聚合酶链反应(reverse transeription-poly-merase chain reaction,RT-PCR)法检测VEGF抑制效果。建立裸鼠移植瘤模型,定期瘤内注射Ad-VEGF-siRNA,观察裸鼠致瘤率、肿瘤体积、抑瘤率及免疫组化法检测肿瘤组织中bcl-2的表达。结果:感染Ad-VEGF-siRNA能明显抑制MG63细胞的生长,瘤灶内注射Ad-VEGF-siRNA后裸鼠移植瘤的质量和体积均显著低于对照组(P<0.01)。TUNEL染色显示肿瘤细胞凋亡增加,免疫组化结果提示肿瘤组织中bcl-2表达明显减少(P<0.01)。结论:Ad-VEGF-siRNA可有效而特异地阻断VEGF基因表达,抑制裸鼠移植瘤生长,促进肿瘤细胞的凋亡。
- 钱光梅炯董有海蔡宣松
- 关键词：骨肉瘤基因疗法血管内皮生长因子类
- 腺病毒介导的血管内皮生长因子小干扰RNA对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的研究被引量：2
- 2008年
- 目的观察腺病毒介导的血管内皮生长因子（VEGF）的短发夹状小分子干扰RNA（siRNA）对骨肉瘤细胞株MG63增殖和凋亡的影响。方法将携带VEGF短发夹状siRNA的腺病毒载体Ad．VEGF—siRNA感染MG63。噻唑蓝（MTT）比色分析细胞体外增殖力，Hochst染色、流式细胞术观察细胞凋亡。建立30只裸鼠移植瘤模型，Ad—VEGF—siRNA组瘤内注射Ad—VEGF—siRNA病毒纯化液0．2ml，通过免疫组织化学技术，观察肿瘤组织中MG63细胞的增殖和凋亡。结果与对照组比较，Ad．VEGF．siRNA组MG63细胞生长减慢，Hoechst染色可见到典型的凋亡细胞，24、48、72h凋亡率分别为7．27％、12．01％和20．09％。Ad—VEGF—siRNA明显抑制移植瘤生长，抑瘤率达40．7％。Tunel染色可见MG63细胞典型凋亡特征，同时肿瘤组织中PCNA、bcl-2表达明显减少（P〈0．01）。结论Ad—VEGF．siRNA可高效而特异地阻断VEGF基因表达，抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡。
- 钱光梅炯董有海胡牧薛华明蔡宣松
- 关键词：血管内皮生长因子腺病毒基因疗法骨肉瘤
- 骨肉瘤细胞外体培养中仿血管发生现象被引量：2
- 2004年
- 目的对骨肉瘤血管产生机理进行初步的研究,观察骨肉瘤细胞是否有仿血管发生的能力。方法应用Ⅰ型胶原蛋白凝胶的三维培养基对骨肉瘤细胞进行培养,观察骨肉瘤细胞在三维培养基中是否可形成血管样结构,并运用电镜、光镜观察这些血管样结构的形态学构成。结果电镜、光镜下观察到骨肉瘤细胞在Ⅰ型胶原蛋白凝胶的三维培养基中能够形成血管样结构。结论骨肉瘤细胞体外能够自身形成血管样结构,具有仿血管发生的能力。
- 贾永伟蔡宣松梅炯程黎明俞光荣张世民
- 关键词：骨肉瘤血管生成
- 以血管内皮生长因子及血管内皮生长因子受体为靶点抗肿瘤血管生成的基因治疗被引量：2
- 2005年
- 钱光梅炯蔡宣松
- 关键词：血管内皮生长因子受体血管网抗肿瘤血管生成靶点基因治疗自分泌
- RNAi抑制骨肉瘤细胞KDR蛋白表达的研究被引量：3
- 2006年
- 目的研究siRNA表达载体对骨肉瘤MG63细胞KDR蛋白表达的抑制作用。方法构建pSuper质粒,化学合成2段编码发卡RNA序列、靶向KDR基因的寡核苷酸,克隆进pSuper的pol IIIH I启动子的下游,重组构建抑制KDR表达的siRNA质粒,并转染入骨肉瘤MG63细胞,W estern b lot检测转染后KDR基因在蛋白水平表达的变化。结果酶切后电泳鉴定正确的重组质粒小量扩增后测序,证实成功构建了KDR siRNA表达质粒,转染入细胞后,有效抑制了KDR基因在蛋白水平的表达。结论成功构建的siRNA表达载体有效抑制了骨肉瘤MG63细胞KDR蛋白的表达,为进一步分析骨肉瘤中KDR基因的功能及肿瘤治疗奠定了研究基础。
- 张立智蔡宣松钱志康周家钤袁峰黄伟达
- 关键词：骨肉瘤RNAIKDRMG63
- 内皮前驱细胞与肿瘤新生血管发生的关系
- 2005年
- 薛华明梅炯蔡宣松
- 骨肉瘤细胞体外培养中仿血管发生现象(英文)被引量：2
- 2003年
- 目的 对骨肉瘤肿瘤血管产生机制进行初步的研究,观察骨肉瘤细胞是否有仿血管发生的能力。方法 应用Ⅰ型胶原蛋白凝胶的三维培养基对骨肉瘤细胞进行培养,观察骨肉瘤细胞在三维培养基中是否可形成血管样结构,并运用电镜、光镜观察这些血管样结构的形态学构成。结果 电镜、光镜下观察到骨肉瘤细胞在Ⅰ型胶原蛋白凝胶的三维培养基中能够形成血管样结构。结论 骨肉瘤细胞体外能够自身形成血管样结构,具有仿血管发生的能力。
- 梅炯贾永伟蔡宣松
- 关键词：骨肉瘤细胞培养
- 骨肉瘤细胞的仿血管发生被引量：2
- 2008年
- 目的探讨骨肉瘤细胞的仿血管发生现象，骨肉瘤细胞是否具有血管形成相关基因的表达。方法应用Ⅰ型胶原蛋白凝胶和Matrigel的三维培养基对骨肉瘤细胞进行培养，并运用电镜、光镜观察这些类血管样结构的形态学构成；应用逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测骨肉瘤细胞血管形成相关基因（VEGF、Flt-1、KDR、Ang-1、Tie-2、Ang-2、Tie-1、EPHA2、CD31、Thrombin、VE-Cadherin）的表达。结果电镜、光镜下观察到骨肉瘤细胞在I型胶原蛋白凝胶和Matrigel的三维培养基中能够形成良好的类血管样的管道结构；骨肉瘤细胞类内皮细胞和内皮前驱细胞，具有血管形成相关基因（VEGF、Flt-1、KDR、Ang-1、Tie-2、EPHA2、CD31、Thrombin、VE-Cadherin）的表达。结论骨肉瘤细胞具有仿血管发生的能力和血管形成相关基因的表达，三维培养是研究肿瘤细胞仿血管发生现象较好的工具。
- 张立智蔡宣松梅炯黄煌渊
- 关键词：骨肉瘤细胞培养基因表达
