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籼稻品种Kasalath遗传转化条件的研究被引量：6: 2010年; [目的]探索籼稻品种Kasalath的遗传转化条件,为该品种进一步的分子生物学研究奠定基础。[方法]以籼稻品种Kasalath的愈伤组织为转化受体,应用根癌农杆菌介导法进行遗传转化;从共培养方式、共培养时间、共培养后处理方法等方面优化遗传转化体系。[结果]当愈伤组织与农杆菌共培养时间为2d时的转化效果最好,抗性愈伤组织获得率达84.1%,转化菌的转化率达到73%,且共培养时愈伤组织是否直接接触培养基对转化无明显影响。[结论]遗传转化成功地将外源基因OsMAPK2整合到水稻基因组中。; 王维旭张骥诚刘学群王春台刘新琼; 关键词：愈伤组织农杆菌介导

稻瘟病抗性基因Pi36酵母表达载体的构建与表达: 2010年; 稻瘟病抗性基因Pi36编码卷曲螺旋核苷酸结合位点-富亮氨酸重复序列(CC-NBS-LRR)结构的抗病蛋白。为了深入研究该基因的结构和功能,试验利用双酶切构建了Pi36基因CC结构域的酵母表达载体,通过菌落PCR鉴定和测序验证阳性克隆。然后分别收集培养至不同OD值的酵母细胞提取蛋白,利用Western blotting检测目的蛋白的表达情况。结果表明,目的蛋白成功表达,并且在OD值为1.0的酵母细胞中表达量最大。; 王玲张丹张向明刘新琼; 关键词：稻瘟病酵母表达载体

野生稻NBS类抗病基因同源序列的分离与序列分析被引量：8: 2010年; 为了挖掘野生稻中的抗病资源,根据已克隆的植物抗病基因核苷酸结合位点序列中的保守结构域设计3对简并引物,从疣粒、药用、高秆、宽叶和斑点野生稻基因组DNA中分离出13条NBS类抗病基因类似物,其中11条具有连续的ORF,具有NBS类R基因的保守基元P-loop、kinas-2、kinas-3a和GLPL。在NCBI上进行同源性搜索发现,其中12条RGAs的核苷酸序列与水稻已知的NBS类R基因具有66%～94%的同源性,与其他植物已知R基因具有67%～84%的同源性;其对应的氨基酸序列与水稻已知的NBS类R基因具有43%～93%的同源性,与其他植物已知R基因具有37%～79%的同源性。另外1条的核苷酸序列与水稻假定的NBS类R基因具有76%的同源性,其氨基酸序列与水稻假定的NBS类R基因具有74%的同源性。根据序列分析结果设计6对不同基因特异性引物,并利用RT-PCR技术进行表达分析,结果表明,RN1BD5、RN1BD10、RN1GG2和RN1YY6均能表达,说明这些片段可能是功能性抗病基因的部分序列;而RN1KY9和RN1GG5没有表达,可能是假基因。; 张向明韦靖鸾张丹王春台刘学群刘新琼; 关键词：野生稻抗病基因类似物基因分离

普通野生稻稻瘟病抗性基因Pi36等位基因的克隆与序列分析被引量：2: 2010年; 为了研究稻瘟病抗性基因Pi36的进化机理,以孟加拉国普通野生稻W39、马来西亚普通野生稻W40、印度野生稻L56为材料,对Pi36等位基因进行了克隆和序列分析。测序结果与已知的Pi36和测序品种日本晴以及"93-11"的基因序列进行比较。结果表明,编码区6个品种间的同源性为83%～99%,CC-NBS区域的同源性平均为91%;LRR区域为95%。并且还发现在野生稻W39和W40基因的第二个外显子区域有一个转座子插入。进化分析表明,6个品种从整体上分为3类,L56、日本晴和Pi36聚为一类,说明这3个品种的亲缘关系较近;W39和W40聚为另一类;"93-11"的基因聚为单独的一类,处于独立进化的模式。; 王玲张丹张向明刘新琼; 关键词：稻瘟病抗性基因普通野生稻基因克隆

微量元素对籼稻品种愈伤组织诱导和褐化的影响被引量：5: 2010年; 为了优化籼稻品种的组织培养特性,以N6培养基为基础,分析了微量元素3种不同浓度处理对籼稻品种粤泰B在组织培养中愈伤组织诱导率及褐化率的影响。结果表明:微量元素的浓度对愈伤组织的诱导率影响不大,而对褐化的控制有明显的影响,在1.2倍浓度下愈伤组织的褐化率最低为10.35%,并且愈伤组织致密、状态较好,0.8倍次之,褐化率为26.15%,而一般使用的1.0倍浓度下褐化率为44.55%,褐化情况是最严重的,并且愈伤组织软化,状态很差。; 王维旭张骥诚刘学群王春台刘新琼; 关键词：微量元素籼稻褐化

The effect of the rice blast resistance gene Pi36 on the expression of disease resistance-related genes被引量：3: 2010年; The resistance gene Pi36 confers a stable and high level of resistance against Chinese isolates of the rice blast pathogen Mag-naporthe oryzae.Quantitative real time RT-PCR was used to investigate the expression profiles of various resistance-related genes in both the Pi36/AvPi36 incompatible interactions.Among 17 members of the OsMAPK family,OsMAPK2,OsMAPK4,OsMAPK8 and OsMAPK15 were differentially expressed,as were OsWRKY30,OsWRKY32,OsWRKY64 and OsWRKY67 among the 13 OsWRKY members studied.The induction of the expression of genes from both of these families suggests that both the JA and SA pathways are involved in Pi36-mediated defence.Other genes differentially expressed included the OsbZIP transcription factors,OsNIF1 and OsNIF2,and the NPR1 homologue OsNH2,all of which were reported in the rice blast pathosystem.The in-volvement of these genes illustrates the complexity of the downstream signalling pathways involved in the Pi36/AvrPi36 interaction.; LIU XinQiongLI YuanYuanWANG LiYuanLIU XueQunWANG ChunTaiWANG LingPAN QingHua; 关键词：抗病相关基因抗稻瘟病基因 NPR1基因

籼稻品种Kasalath遗传转化条件研究(摘要)(英文)被引量：4: 2009年; [目的]探索籼稻品种Kasalath的遗传转化条件,为针对该品种进一步的分子生物学研究奠定基础。[方法]以籼稻品种Kasalath的愈伤组织为转化受体,应用根癌农杆菌介导法进行遗传转化;从共培养方式、共培养时间、共培养后处理方法等方面优化遗传转化体系。①共培养条件的优化:愈伤组织接入共培养基时分2组,1组加1层灭菌滤纸,1组不加。②共培养时间的优化:分别于农杆菌液侵染愈伤1,2,3,4 d观察。③共培养后处理方式的优化:方式1,将共培养后的愈伤组织用灭菌蒸馏水冲洗多次至水清亮无混浊悬浮物,然后用含有羧苄青霉素的灭菌蒸馏水浸泡30 min,放置在有3层滤纸的灭菌培养皿中短暂干燥。方式2,将共培养后的愈伤组织置于带2层滤纸的灭菌培养皿中干燥,干燥3 d后取出。2种方式干燥后的愈伤组织均接入含40 mg/L潮霉素筛选压的筛选培养基上,筛选2次,每次2～3周。[结果]Kasalath的愈伤组织经农杆菌侵染后,经过共培养,再经筛选培养出抗性愈伤直至分化成转化苗,共培养时问对于转化效率的影响较大。如果共培养时间过长,将导致农杆菌过度生长,随后的筛选培养中即使加入抗菌的羧苄青霉素也无法抑制其生长,愈伤组织褐化死亡率增大。而共培养时间太短,则影响农杆菌Ti质粒T-DNA的转移,影响转化效率。该研究中当愈伤组织与农杆菌共培养时间为2 d时的转化效果最好,抗性愈伤组织获得率达84.1%,转化菌的转化率达到73%,且共培养时愈伤组织是否直接接触培养基对转化无明显影响。利用PMCG161载体引物PMCGF和PMCGR对所获得的部分转化苗进行PCR检测,23株转化苗中有13株扩出了预期的约750 bp条带,且为阳性转化苗,表明外源基因OsMAPK2已整合到水稻品种Kasalath的基因组中。[结论]经愈伤组织的诱导、共培养、筛选、预分化、分化等步骤,最终成功实现了农杆菌介导的OsMAPK2�; 王维旭张骥诚刘学群王春台刘新琼; 关键词：愈伤组织农杆菌介导

稻瘟病抗性基因Pi36原核表达载体构建·表达与鉴定被引量：2: 2010年; [目的]研究稻瘟病抗性基因Pi36的结构和功能。[方法]利用双酶切构建Pi36基因CC、NBS结构域的原核表达载体,通过菌落PCR鉴定和测序验证阳性克隆。然后分别收集不同浓度IPTG诱导,不同温度30和37℃分别培养的大肠杆菌细胞提取蛋白,利用SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达情况。[结果]当IPTG浓度为1mmol/L、30℃培养3h,目的蛋白表达量最大。[结论]为进一步研究稻瘟病抗性基因Pi36的抗病机理奠定基础。; 王玲张向明刘新琼; 关键词：稻瘟病抗性基因原核表达载体基因克隆

链球菌制剂对NOD鼠脾细胞及血清细胞因子的影响: 2009年; 为了探索链球菌制剂对NOD鼠脾细胞及血清细胞因子的影响,试验以NOD鼠为Ⅰ型糖尿病动物模型,在5～20周龄,皮下注射链球菌制剂,每只0.1 mg,对照组注射0.1 mL生理盐水,分别取未发病鼠、已发病鼠及经链球菌制剂免疫后小鼠的眼底血、脾脏制成脾细胞DMEM悬液,夹心ELISA法测IFN-γ、IL-4的含量。结果发病鼠IFN-γ的分泌量高于链球菌制剂的免疫鼠,而IL-4低于后者。链球菌制剂可能通过调节Th1和Th2型细胞因子的平衡来预防性地治疗糖尿病,从而发挥免疫调节的作用。; 王德彬郑红波刘新琼; 关键词：NOD鼠血清细胞因子

稻瘟病抗性基因Pi36的表达分析被引量：1: 2007年; 为研究稻瘟病抗性基因Pi36的表达模式,利用半定量RT-PCR对抗病亲本Kasalath和感病亲本丽江新团黑谷(LTH)进行了接种前和接种后24 h和48 h的表达分析.结果表明:Pi36无论在接种前还是接种后以及无论在抗病亲本Kasalath还是感病亲本LTH中均有表达,并且各个时间段的表达量没有大的差别.由此说明,Pi36属于组成型而不是诱导型表达的基因.; 张向明李丕顺刘新琼; 关键词：稻瘟病半定量RT-PCR

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