山西省卫生厅科技攻关计划项目(200622) 作品数:10 被引量:23 H指数:2 相关作者: 邓勇志 李立元 徐一君 陈丽 付芳芳 更多>> 相关机构: 山西医科大学第二医院 华中科技大学 更多>> 发文基金: 山西省卫生厅科技攻关计划项目 山西省自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
小鼠心脏移植CD40的表达变化及意义 2010年 目的 检测小鼠颈部心脏移植后排斥反应过程中CD40的变化及意义.方法 建立小鼠颈部心脏异位移植模型.实验分3组,即同系移植组、同种移植组和同种环孢菌素A(CsA)治疗组.各组于术后1 d、3 d和7 d动态检测供心的病理改变,免疫组织化学方法测供心CD40表达情况,并记录移植心脏存活时间.结果 同系移植组移植心脏存活时间最长,移植后排斥反应最轻.术后第7天,同种移植组CD40表达水平明显高于同品系组(P〈0.05).结论 移植心脏CD40分子表达与排斥反应的发生密切相关,动态监测CD40对移植心脏的预后评估具有重要意义. 李立元 徐一君 邓勇志 陈丽 徐俊文 王倩 杨雪峰 马捷关键词:心脏移植 排斥反应 CD40 重组pEGFP-N1-H2Bl质粒载体诱导心脏移植免疫耐受 被引量:1 2010年 目的 探讨H2-Bl基因诱导小鼠心脏移植免疫耐受的机制和效果.方法 建立小鼠颈部心脏异位移植模型,供体心脏经主动脉根部灌注H2-Bl质粒真核表达载体后进行心脏移植.实验分4组:对照组、环孢素A(CsA)组、H2-Bl质粒转染组、H2-Bl质粒转染+CsA组.各组于术后1、3和7天各动态枪测供心病理改变,免疫组织化学方法测供心CD40表达情况,流式细胞仪检测供心血清中Th1/Th2细胞因子变化,记录移植心脏存活时间.结果 对照组移植后排斥反应最重,其余组与之比较均有所减轻,以H2-Bl质粒转染+CsA组排斥反应最轻.免疫组化显示术后7天时H2-Bl质粒转染组CD40与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),CsA组、H2-Bl+CsA组CD40与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).H2-Bl+CsA组Th2细胞因子表达较其余组增加而Th1细胞因子则减少,到术后7天时各组Th细胞因子与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,其余各组小鼠供心存活天数均延长(P<0.05).结论 H2-Bl基因干预可一定程度诱导移植心脏免疫耐受,延长同种异体小鼠颈部移植心脏存活时间. 李立元 徐一君 陈丽 邓勇志 马捷 付芳芳关键词:心脏移植 免疫耐受 TH1/TH2 CD40 Blastocyst MHC基因转染延长小鼠移植心脏存活时间 2010年 目的 探讨Blastocyst MHC基因经供心冠状动脉转染对移植心脏存活时间的影响。方法分别以近交系健康雄性Balb/c小鼠和C57BL/6小鼠为供、受者,制备小鼠颈部心脏移植模型,对照组供心以0~4℃托马斯Ⅱ溶液灌注;环孢素A(CsA)组供心用前述方法灌注,术后受者腹腔注射CsA5mg·g^-2·d^-1;转染组供心以含BlastocystMHC基因转染质粒的托马斯Ⅱ溶液灌注;联合处理组供心以含BlastocystMHC基因转染质粒的托马斯Ⅱ溶液灌注,术后腹腔内注射CsA。观察各组移植心脏存活时间和组织学变化,测定移植心脏组织中BlastocystMHC基因mRNA表达以及外周血CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)及CD3+CD8+T淋巴细胞的变化。结果CsA组、转染组和联合处理组移植心脏存活时间较对照组明显延长(P〈0.05),其中以联合处理组最为显著,达(20.50±5.61)d。转染组术后1、3d的BlastocystMHC基因mRNA表达水平较对照组明显升高(P〈0.05)。术后7d,联合处理组的排斥反应程度最轻,其冠状动脉内膜增生也最轻。术后7d,CsA组和联合处理组Treg细胞明显多于对照组(P〈0.05),而CD3+CD8+T淋巴细胞明显少于对照组(P〈0.05)。结论移植前转染BlastocystMHC基因能够通过上调Treg细胞、抑制CD3+CD8+T淋巴细胞而延长小鼠移植心脏存活时间,与CsA联合有协同作用。 徐一君 李立元 陈丽 邓勇志 马捷 付芳芳关键词:主要组织相容性复合物 移植物存活 Th1/Th2细胞因子与移植免疫耐受的研究进展 被引量:5 2010年 免疫排斥反应是影响器官移植术后存活率的最重要的因素,应用免疫抑制剂具有很多的不良反应,诱导免疫耐受是解决移植术后排斥反应的最佳方法。Th1/Th2细胞因子的动态平衡在移植耐受中起重要作用,Th1向Th2偏离是移植耐受的机制之一。现对Th1与Th2之间的关系及其在移植免疫、免疫耐受中的最新进展进行综述。 李立元 邓勇志关键词:器官移植 免疫耐受 TH1/TH2细胞因子 调节性T细胞在免疫耐受方面的研究进展 2009年 CD4+CD25+foxp3+调节性T细胞(CD4+CD25+foxp3+regu-latory T cell,以下简称"Treg")为一类具有免疫抑制功能的独立的T细胞群,约占外周CD4+T细胞的5%~10%,是机体维持自身免疫耐受的重要组成部分.自1995年日本学者Sakaguchi等[1]首次报道Treg细胞以来,越来越多的研究证明这群T细胞在免疫病理、移植物耐受、阻止自身免疫反应、肿瘤免疫和维持机体免疫平衡等方面发挥着重要作用.…… 徐一君 邓勇志关键词:调节性T细胞 FOXP3 免疫耐受 调节性T细胞在不同品系小鼠心脏移植后的变化及意义 2010年 目的探讨不同品系小鼠颈部心脏移植后调节性T细胞的变化及意义。方法建立小鼠颈部心脏异位移植模型,实验分2组,受体小鼠均为C57BL/6,供体分别为BALB/c和C57BL/6小鼠。比较两组供心存活时间、排斥反应程度,流式细胞仪测定CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)及CD3+CD8+T细胞水平。结果术后第7天,异基因组Tregs水平明显低于同基因组(P〈0.05),而CD8+T细胞却明显高于同基因组(P〈0.05)。结论Tregs水平高低与心脏移植后免疫耐受的发生、发展密切相关,可作为心脏移植后免疫耐受的监测指标,对移植物的预后估计和急性排斥反应的早期诊断具有重要的临床意义。 徐一君 李立元 陈丽 邓勇志 马捷 付芳芳关键词:心脏移植 排斥反应 CD4+CD25+调节性T细胞 CD8+T细胞 H2-Bl基因转染对小鼠血管平滑肌细胞生物学行为的影响 2011年 目的:H2-Bl基因转染小鼠血管平滑肌细胞(VSMC),观察其凋亡、增殖和抗外周血单个核细胞(PBMC)杀伤性等生物学行为的变化,探讨借鉴母胎免疫耐受模型防治心脏移植术后免疫排斥反应的机制。方法:0.5mg/L空质粒、0.5mg/LH2-Bl质粒、1.0mg/LH2-Bl质粒转染小鼠血管平滑肌细胞后,采用实时荧光定量PCR、流式细胞术、酶标仪检测不同时间质粒的转染效率、H2-Bl基因mRNA的表达量、转染VSMC的凋亡与增殖情况以及PBMC对靶细胞的毒性作用。结果:荧光定量PCR结果显示,基因组的H2-Bl基因mRNA表达量明显高于对照组(P<0.001)。H2-Bl基因促进VSMC凋亡,转染24h后0.5mg/LH2-Bl质粒组、1.0mg/LH2-Bl质粒组与空白对照比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。H2-Bl基因抑制VSMC增殖,转染24h和48h后0.5mg/LH2-Bl质粒组、1.0mg/LH2-Bl质粒组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。细胞毒性试验在转染24h后,0.5mg/LH2-Bl质粒组、1.0mg/LH2-Bl质粒组细胞毒性均较空白对照明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:pEGFP-N1-H2B1质粒载体转染小鼠VSMC后,能够有效促进其凋亡,抑制其增殖,降低PBMC对靶细胞的毒性作用,诱导免疫耐受。 陈丽 李立元 徐一君 李红芳 邓勇志 边云飞 马捷关键词:血管平滑肌细胞 凋亡 增殖 外周血单个核细胞 大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定 被引量:17 2007年 目的探讨以简便、高效的方法获取血管平滑肌细胞,为相关研究提供实验材料。方法采用组织贴块法进行原代培养,胰酶消化法传代,并应用相差显微镜和平滑肌肌动蛋白对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果90%的组织块接种存活,培养5代的平滑肌细胞纯度达98%以上。镜下可见培养细胞呈典型的“峰-谷状”样生长,免疫组化染色显示胞浆内平滑肌肌动蛋白阳性表达。结论本法简便、可靠,短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞,可作为研究心血管疾病良好的体外模型。 马丽 刘苏健 邓勇志 孙宗全 栗一帆关键词:血管 细胞 主动脉 H2-Bl基因转染对小鼠内皮细胞凋亡与增殖的影响 2010年 目的转染pEGFP-N1-H2B1质粒载体至小鼠血管内皮细胞(VEC),观察H2-Bl基因对小鼠VEC凋亡与增殖的影响,探讨借鉴母胎免疫耐受模型预防心脏移植术后免疫排斥反应的机制。方法 0.5μg/ml空质粒、0.5μg/mlH2-Bl质粒、1.0μg/mlH2-Bl质粒转染小鼠VEC后,采用实时荧光定量PCR、流式细胞仪、酶标仪检测不同时间质粒的转染效率、H2-Bl基因mRNA的相对表达量、转染VEC的凋亡与增殖情况。结果荧光定量PCR结果显示,0.5μg/ml、1.0μg/mlH2-Bl质粒组的H2-Bl基因mRNA表达量均高于对照组(P<0.05,P<0.001)。H2-Bl基因促进VEC凋亡,转染48h、72h后1.0μg/mlH2-Bl质粒组与空白对照、0.5μg/ml空质粒比较,差异有统计学意义(P<0.05)。H2-Bl基因抑制VEC增殖,转染24h、48h、72h后0.5μg/mlH2-Bl质粒组、1.0μg/mlH2-Bl质粒组分别与空白对照组、0.5μg/ml空质粒组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 pEGFP-N1-H2B1质粒载体转染小鼠VEC后,能够有效促进其凋亡,抑制其增殖,减弱小鼠VEC活性,诱导免疫耐受。 陈丽 付芳芳 李立元 徐一君 李红芳 邓勇志 郝斌关键词:内皮细胞 质粒 转染 细胞增殖 细胞凋亡 H2-B1基因转染小鼠内皮细胞对其免疫原性的影响 2010年 目的 转染pEGFP-N1-H2B1质粒载体至小鼠血管内皮细胞(VEC),观察导入H2-B1基因后VEC免疫原性的变化,探讨借鉴母胎免疫耐受模型诱导心脏移植术后免疫耐受的机制.方法 以未处理的VEC为对照,采用流式细胞仪和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别于转染H2-B1基因后24、48、72 h检测质粒转染效率以及H2-B1基因的mRNA相对表达量;将同源小鼠外周血单个核细胞(PBMC)和VEC按100:1和10:1两种不同效靶比混合,观察PBMC对靶细胞杀伤活性的变化.结果 H2-B1基因组H2-B1基因在VEC中的mRNA表达量明显高于对照组(0.5mg/L组,P〈0.05;1.0 mg/L组,P〈0.01).H2-B1基因转染48 h后,当效靶比为100:1时,与对照组细胞毒性14.29%比较,0.5 mg/L基因组细胞毒性为4.28%,提示转染H2-B1基因组PBMC对VEC的毒性作用明显降低(P〈0.05).结论 H2-B1基因可能具有免疫调节功能,可降低VEC的免疫原性,抑制PBMC对VEC的杀伤活性,诱导免疫耐受. 陈丽 付芳芳 徐一君 李立元 李红芳 邓勇志关键词:免疫原性 血管内皮细胞