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慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞穿孔素的表达被引量：1: 2003年; 目的　了解慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞 (PBL)穿孔素 (PFP)的表达情况及其与疾病的关系。方法　用抗人PFP单克隆抗体 ,采用免疫组化染色法 ,观察慢性乙型肝炎患者PBL中总的PFP阳性细胞的百分率。结果　慢性乙型肝炎PBL中PFP表达水平与正常对照组之间存在明显差异。; 章金春李芳秋武建国; 关键词：穿孔素外周血淋巴细胞慢性乙型肝炎

人穿孔素羧基端肽段的表达纯化与活性鉴定被引量：3: 2001年; 穿孔素 ,即成孔蛋白 (poreformingprotein ,PFP) ,其溶细胞作用与免疫调节和自身免疫病以及其它多种疾病过程中的免疫性病理损伤相关 .为得到足够量的PFP建立与之相关的免疫学研究手段用于基础和临床研究 ,在已克隆人PFPcDNA的基础上 ,用基因工程方法表达了人PFPC端 12 4个氨基酸肽段 (hPFP C) ,并通过谷胱甘肽琼脂糖亲和层析获得纯化的GST/hPFP C融合蛋白 ,经凝血酶酶切和再次亲和层析去除GST部分 ,得到了纯化的hPFP C蛋白 .纯化的hPFP C蛋白与兔红细胞共育 ,呈现钙依赖的溶血活性 .; 周向阳李芳秋武建国; 关键词：穿孔素溶血活性

颗粒酶A诱导Caspases非依赖性细胞死亡被引量：1: 2004年; 颗粒酶A(granzyme A,GzmA),是存在于细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和天然杀伤细胞(NK细胞)的细胞毒颗粒中含量最多的一种丝氨酸蛋白酶,在穿孔素(perforin)协同作用下通过颗粒胞吐(granule exocytosis)释放进入在杀伤细胞和靶细胞之间形成的免疫突触(immunological synapse),然后进入靶细胞的细胞浆,并在细胞核聚集,诱导一种caspases非依赖性细胞死亡。GzmA靶向作用于一种与内质网结合的特殊的复合体——SET复合体,其包含3种GzmA底物:核小体装配蛋白SET、DNA结合蛋白HMG-2、具有碱基切除修复作用的核酸内切酶Apel。SET复合体还含有一种抑癌蛋白pp32和一种具有脱氧核糖核酸酶(DNase)活性的NM23-H1。当GzmA作用于SET复合体时释放出NM23-H1并激活其DNase活性,也阻断了Apel对DNA损伤的修复作用,在DNA上形成单链的缺刻。这是一种新发现的由GzmA诱导的细胞凋亡途径。; 缪家文李芳秋; 关键词：丝氨酸蛋白酶细胞凋亡免疫效应分子

人穿孔素C肽段的单克隆抗体和免疫血清的制备和鉴定: 2001年; 目的 :制备人穿孔素特异性单克隆抗体和免疫血清。　方法 :利用基因重组技术获得穿孔素 (PFP) C端 12 5个氨基酸的肽段免疫 Balb/ c小鼠和家兔。经取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合 ,筛选分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,并用 Western印迹和免疫组化法鉴定所制备的单克隆抗体。　结果 :获得 4个稳定的分泌抗 rh PFP- C的杂交瘤细胞株 ,腹水抗体的 EL ISA滴度为 1∶ 3.2× 10 3～ 1∶ 6 .4× 10 6。兔免疫血清的滴度为 1∶ 3.2× 10 4。　结论 :利用重组人穿孔素肽段可制备出高特异性、高滴度的单克隆抗体和免疫血清。; 李芳秋周向阳秦卫松武建国; 关键词：穿孔素单克隆抗体免疫血清

人穿孔素氨基端肽段的原核表达与纯化被引量：6: 2001年; 目的 :用基因工程方法表达人穿孔素 (PFP)氨基端肽段 ,并加以纯化。　方法 :构建表达人 PFP蛋白 N端118个氨基酸肽段 (h PFP- N)的重组质粒 ,转化 E. coli BL 2 1菌株 ,经异丙基 -β- D-硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。在十二烷基肌氨酸钠存在下以超声处理 ,使得到的融合蛋白包涵体溶解。通过谷胱甘肽琼脂糖柱亲和层析获得纯化的 GST/h PFP- N融合蛋白 ,经凝血酶酶切去除 GST部分。　结果与结论 :p GEX- KG质粒能够高效表达 GST/h PFP- N融合蛋白 ,经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析和凝血酶酶切后得到纯化的 h PFP- N蛋白。; 秦卫松李芳秋武建国; 关键词：穿孔素基因重组纯化

重组人穿孔素肽段的体外杀伤肝癌细胞活性被引量：7: 2003年; 目的 :以肝癌细胞系SMMC 772 1作为靶细胞 ,观察重组人穿孔素 (PFP)N端肽段 (rhPFP N)及C端肽段 (rh PFP C)体外杀伤肿瘤细胞的活性。　方法 :用大肠杆菌表达PFP N和PFP C与谷胱甘肽转移酶 (GST)的融合蛋白 ,对表达产物进行纯化 ,将不同浓度的GST rhPFP C或GST rhPFP N加入体外培养的人肝癌细胞SMMC 772 1,2 4h后用镜检和MTT法检测细胞存活情况。　结果 :用GST rhPFP N或GST rhPFP C处理后 ,可见SMMC 772 1细胞膜溶解和细胞破裂。用MTT法检测 ,实验组A值显著低于对照组 (P <0 .0 0 1)。GST rhPFP C和GST rhPFP N浓度为 2 .5ml L时 ,其杀伤活性分别为 33.38%和 5 .90 %。　结论 :rhPFP C和rhPFP N对人肝癌细胞SMMC 772 1均有明显的杀伤活性 ,rhPFP C对SMMC 772 1的杀伤活性显著高于rhPFP N。; 李芳秋黄敏文郝志宾; 关键词：穿孔素杀伤活性肝癌细胞

颗粒酶A诱导一种新奇的caspases非依赖性细胞死亡: 颗粒酶A(granzyme A,GzmA),是存在于细胞毒T淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK)细胞浆中的一种丝氨酸蛋白酶,在穿孔素协(perforin)同作用下通过颗粒胞吐(granule exocytosis)诱...; 缪家文李芳秋; 关键词：细胞死亡; 文献传递

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江苏省自然科学基金(BK99157)