国家自然科学基金(31360063)
- 作品数：8 被引量：29H指数：3
- 相关作者：王迎春郑琳琳王佳秦晓春党振华更多>>
- 相关机构：内蒙古大学内蒙古和信园蒙草抗旱绿化股份有限公司包头市园林科技研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金内蒙古自治区教育厅基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 绵刺肌动蛋白基因的分离及特性分析被引量：3
- 2017年
- 本研究采用兼并PCR(polymerase chain reaction)和RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术分离了绵刺(Potaninia mongolica Maxim.)肌动蛋白基因(Actin,Pm Actin)c DNA序列,该序列包含有1 134 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码377个氨基酸,预测蛋白分子量为41.8 k D,理论等电点为5.48;基因组DNA序列长度为1 134 bp,无内含子。该序列与其他植物Actin的一致性较高,核苷酸均高于88%,氨基酸则均高于96%。系统进化分析显示:Pm Actin与同属蔷薇科的草莓、碧桃,扁桃和蔷薇及葡萄科的葡萄Actin蛋白聚为一个亚类,与草莓Actin蛋白亲缘关系最为接近。RT-PCR分析显示,该基因在根、茎、叶中的表达量无明显变化,该结果验证了Pm Actin基因可作为分子内标的可靠性,为深入开展该植物的分子生物学研究提供理论依据。
- 李宁宁王雪郑琳琳林晓飞王迎春
- 关键词：绵刺肌动蛋白基因结构系统进化分析
- 唐古特白刺叶和茎黄酮含量分析被引量：7
- 2014年
- 采用高效液相色谱串联质谱技术对唐古特白刺叶和茎中甲醇提取物进行黄酮成分的定性分析,共识别出12种黄酮成分,包括槲皮素衍生物3种、山奈素衍生物2种、异鼠李素衍生物7种。通过标准品进行半定量分析表明,唐古特白刺茎中黄酮含量达到14.44mg/g,叶中黄酮总含量为42.43mg/g。
- 高喆王佳特布沁王迎春
- 关键词：唐古特白刺黄酮
- 长叶红砂液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因的克隆及表达特性被引量：3
- 2015年
- 为研究长叶红砂(Reaumuria trigyna)离子转运分子机制,利用RT-PCR和RACE技术,克隆到其液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(NHX1)的全长cDNA片段,命名为RtNHX1(NCBI序列号为KR919802)。结果表明:RtNHX1的cDNA片段全长2 622bp,开放阅读框1 662bp,5′非编码区509bp,3′非编码区451bp,编码553个氨基酸,推测分子量为60.91kD。该蛋白含有12个跨膜结构域,为疏水蛋白,与其他植物液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白NHX1的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR对其在NaCl胁迫下的表达检测显示,不同时间和不同浓度NaCl胁迫下,RtNHX1表达量变化均呈先升高后降低趋势,在100mmol/L NaCl胁迫6h和200mmol/L NaCl胁迫后达到最高,表达量分别超过或约是对照的3倍,一定程度反应出RtNHX1参与长叶红砂的盐胁迫应答,是该植物离子转运体系的重要元件。
- 董禄禄秦晓春党振华
- 关键词：长叶红砂CDNA实时荧光定量PCRNACL胁迫
- 长叶红砂黄烷酮-3-羟基转移酶3基因(RtF3H3)的克隆、表达分析及酵母表达载体的构建被引量：2
- 2015年
- 黄烷酮-3-羟基转移酶(F3H)是植物黄酮合成途径上游的一个关键酶,它催化黄烷酮C3位羟化,形成二氢黄酮醇。构建长叶红砂Rt F3H3基因酵母表达载体,为进一步研究Rt F3H3基因功能奠定基础。基于高通量转录组测序结果,利用RT-PCR技术克隆获得长叶红砂F3H3(Rt F3H3,GenBank登录号LC055546)基因,其开放阅读框长1 014 bp,编码338个氨基酸,推测蛋白分子量为38.46 k Da,理论等电点为5.7。通过定量RT-PCR研究发现,Rt F3H3在茎中表达量较高,在根和叶中表达量较低。不同程度Na Cl(100,300,500 mmol/L)和不同时间UV(12,24,36 h)胁迫都能诱导Rt F3H3基因表达量升高。另外,构建了Rt F3H3基因酵母表达载体,为进一步研究Rt F3H3基因功能奠定基础。
- 张慧荣赵萍萍冯杰王迎春郑琳琳
- 关键词：长叶红砂定量RT-PCR真核表达载体
- 珍稀泌盐植物长叶红砂两个WRKY转录因子的克隆及表达分析被引量：6
- 2014年
- 根据长叶红砂转录组数据信息,选取在盐胁迫处理后表达上调明显且注释结果为WRKY转录因子的两个cDNA片段。通过cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends,RACE）,从长叶红砂中克隆获得2个WRKY基因。在NCBI数据库比对与拟南芥AtWRKY33同源性分别为79%和87%,因此命名为RtWRKY33-1和RtWRKY33-2。其中RtWRKY33-1的cDNA全长2163bp,开放阅读框（open reading frame,ORF）长度为1681bp,编码573个氨基酸;RtWRKY33-2的cDNA全长2155bp,开放阅读框长度为1776bp,编码591个氨基酸。氨基酸序列分析表明这两个基因均具有两个WRKY结构域,属于典型的I类WRKY转录因子。蛋白结构预测分析发现,两个蛋白的一级结构和二级结构在WRKY结构域的氨基酸序列和结构特性的相似性较高,但是在非保守结构域部分,尤其是N末端（1-80aa之间）、第1个WRKY结构域之前（190-240aa之间）和两个WRKY结构域之间（430-450aa之间）等位置的差异明显,可能对两个基因功能有一定影响。半定量RT-PCR分析表明,4种非生物胁迫均能诱导这两个基因的表达,但是盐、冷和ABA对RtWRKY33-2诱导尤为明显,同时RtWRKY33-2对干旱胁迫的响应更快,因此这两个基因在长叶红砂抵御非生物胁迫的应答反应中发挥的作用可能不同。本研究为深入探索WRKY33转录因子在长叶红砂中的作用机制奠定了基础。
- 王佳郑琳琳顾天培王学峰王迎春
- 关键词：长叶红砂WRKY转录因子克隆
- 珍稀泌盐植物长叶红砂(Reaumuria trigyna)愈伤组织诱导及增殖被引量：2
- 2015年
- 以珍稀泌盐植物长叶红砂(Reaumuria trigyna)成熟种子和不同发育阶段幼苗的不同部位为外植体,对其愈伤组织诱导和增殖进行了系统研究。结果表明:在添加3.0mg·L-12,4-D、1.0mg·L-1 NAA、0.5mg·L-1 6-BA、30g·L-1蔗糖和6.0g·L-1琼脂,pH为5.8的MSO培养基中,出愈率达70%以上,生长量高于其他培养基,是该植物愈伤组织诱导的最佳培养体系;7d下胚轴和25d的幼苗较适合愈伤组织诱导,可形成淡黄色疏松愈伤组织,且褐化程度相对较低;适宜的继代周期为30~40d,随着传代次数增加,愈伤组织颜色变淡,生长速度加快;NaCl浓度为50mmol·L-1和100mmol·L-1时促进愈伤组织生长,盐浓度过高则导致其生长受抑,甚至死亡。
- 党振华秦晓春王迎春
- 关键词：愈伤组织增殖
- 唐古特白刺蛋白激酶基因NtCIPK2超表达载体构建及紫花苜蓿转化研究被引量：5
- 2013年
- 环境因素如高盐、干旱或冷冻等严重制约着豆科重要牧草紫花苜蓿的生长发育和产量。根据已发表的盐生植物唐古特白刺蛋白激酶基因NtCIPK2的序列信息(序列号KC823044),利用PCR方法扩增其编码区cDNA,连接pMD-19Tsimple载体并测序,测序结果表明所克隆的DNA片段长度为1362bp,与GenBank上公布的序列完全一致。在此基础上构建植物超表达载体pPZP221-NtCIPK2,采用CaCl2冻融法将该表达载体转入农杆菌GV3101中,然后通过农杆菌介导的方法转化紫花苜蓿的下胚轴,形成愈伤组织后经庆大霉素筛选培养,最终获得7株抗性幼苗。对抗性幼苗进行庆大霉素基因的PCR检测,结果表明,NtCIPK2基因成功整合到紫花苜蓿基因组中,进一步对其进行外源基因的RT-PCR检测,发现只有3株幼苗中的外源基因实现了过量表达,这可能是由于基因插入位点的差异引发的基因沉默所致。本研究的开展为进一步分析转化植株在各种逆境胁迫条件的表现及其遗传稳定性,培育具有多重抗逆能力的苜蓿品种,促进苜蓿产业发展奠定基础。
- 郑琳琳王佳贺龙梅王学峰王迎春
- 关键词：紫花苜蓿
- 长叶红砂咖啡酸-O-甲基转移酶(RtCOMT)基因的克隆及蛋白纯化被引量：1
- 2016年
- 长叶红砂(Reaumuria trigyna)是内蒙古东阿拉善-西鄂尔多斯地区特有双子叶盐生小灌木,有极强的耐盐抗旱性,入药可以治疗湿疹、皮炎等疾病,具有一定的药用价值。咖啡酸-O-甲基转移酶(RtCOMT)是一个重要的甲基化酶,主要调控木质素合成过程中中间产物及木质素的变化。基于高通量测序结果,利用RT-PCR技术克隆获得长叶红砂COMT(RtCOMT)基因,构建RtCOMT原核表达载pET32a-RtCOMT,并将其转化大肠杆菌,重组阳性菌经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳检测。结果表明:RtCOMT基因开放阅读框长1 023bp,编码340个氨基酸,推测蛋白分子质量37.24ku,理论等电点(pI)6.71,发现该基因在大肠杆菌中正常表达得到与预期大小一致的融合蛋白。采用Ni-IDA His-Bind亲和层析方法对RtCOMT重组蛋白进行纯化,体外获得目的蛋白。
- 张慧荣冯杰赵萍萍王迎春
- 关键词：长叶红砂COMT基因原核表达蛋白纯化
