北京市自然科学基金(6042016)
- 作品数：4 被引量：40H指数：3
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- 新孢子虫NcSRS2基因的亚克隆和表达被引量：1
- 2006年
- 本研究根据NcSRS2基因序列设计合成一对引物,将上、下游引物分别引入EcoRI,XhoI酶切位点,用PCR技术从pGEX-NcSRS2重组质粒扩增截去N端疏水氨基酸序列NcSRS2的基因片段(以下称dNcSRS2),插入到pGEX-6p-1质粒的多克隆位点,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,于氨苄阳性LB培养平板上筛选阳性克隆,酶切及PCR鉴定;经IPTG诱导在E.coli中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并纯化。结果表明,新孢子虫dNcSRS2基因体外扩增产物与预期值相符,约1041bp;所构建pGEX-dNcSRS2重组质粒经双酶切与PCR鉴定,与预期结果一致;SDS-PAGE和免疫印迹显示,表达融合蛋白的分子量约为62.6kD,表达效率为32.3%,该蛋白具有特异的免疫反应性,为新孢子虫病诊断试剂盒的研制和疫苗的研制奠定了基础。
- 余劲术刘群汪明
- 关键词：犬新孢子虫NCSRS2基因亚克隆
- 奶牛新孢子虫病流行病学调查及对生产性能的影响
- 奶牛新孢子虫病是由犬新孢子虫(Neospora caninum)引起的多种家畜共患的一种原虫病。该病对牛的危害尤其严重,主要造成孕畜流产、死胎以及新生儿的运动神经系统疾病。本研究采集自北京地区的94份奶牛血清样本和河北地...
- 张昌盛刘群
- 关键词：犬新孢子虫新孢子虫病流行病学奶牛
- 文献传递
- 犬新孢子虫(Neospora caninum)NcSRS2基因的克隆与融合蛋白的表达
- 本研究用新孢子虫Nc-1株接种小鼠,分离脑组织,从脑组织中提取虫体的RNA,对已知的新孢子虫NcSRS2基因序列进行部分取舍,用RT-PCR 方法扩增并克隆出截短的NcSRS2基因,插入到pGEX-6p-1质粒的多克隆位...
- 余劲术刘群
- 关键词：犬新孢子虫NCSRS2基因克隆纯化
- 文献传递
- 牛新孢子虫病和弓形虫病的流行病学调查被引量：28
- 2006年
- 为了调查我国牛新孢子虫和弓形虫的感染情况，应用新孢子虫酶联免疫吸附试验（ELISA）和弓形虫间接血凝试验（IAT）分别检测了来自国内10个省（市、自治区）的262份乳牛、10份肉牛和40份水牛血清。结果显示，乳牛新孢子虫的抗体阳性率为17．2％，弓形虫的抗体阳性率为2．3％，没有检测到既有新抱子虫抗体又有弓形虫抗体的乳牛血清。各牛场所检乳牛血清的新孢子虫抗体阳性率在0～34．4％之间。在水牛和肉牛血清中未检测到新孢子虫抗体和弓形虫抗体。流产乳牛血清的新孢子虫抗体阳性率为20．2％，未流产乳牛为16．1％，其中血清抗体阳性乳牛主要在妊娠中晚期流产。各个年龄段乳牛血清的抗体阳性率差异不显著（P〉0．05）。不同妊娠胎次的乳牛血清抗体阳性率差异不显著（P〉0．05）。确认新孢子虫病在国内大部分牛场存在。
- 于晋海刘群夏兆飞
- 关键词：新孢子虫弓形虫间接血凝试验水牛
- 新孢子虫dNcSRS2重组蛋白间接ELISA的建立及其应用被引量：14
- 2006年
- 利用新孢子虫体外重组表面蛋白dNcSRS2蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立了检测新孢子虫血清抗体的间接ELISA方法。经对多例血清检测表明,所建立的诊断试剂盒重复性好、特异性强、灵敏度高,与进口的IFAT及两种商品化ELISA试剂盒的检测结果相比较,符合率均达到92%以上。应用建立的ELISA方法对236份奶牛血清的新孢子虫抗体进行检测,阳性率为22%。这是国内首次利用重组蛋白建立的诊断试剂盒,该方法的建立将为牛新孢子虫病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段。
- 刘晶余劲术刘群汪明
- 关键词：新孢子虫间接ELISA
- 新孢子虫NcSRS2基因真核表达质粒的构建
- 根据犬新孢子虫NcSRS2基因序列,设计了一对含有Kozak 序列、Pst I 和Xba I 酶切位点的引物。以含有NeSRS2基因的质粒P43为模板,利用聚合酶链反应(PCR)扩增获得NcSRS2ORF 基因片段,用P...
- 赵占中刘群汪明
- 关键词：犬新孢子虫NCSRS2基因
- 文献传递
- 犬新孢子虫NcSRS2基因真核表达质粒的构建被引量：3
- 2005年
- 根据犬新孢子虫NcSRS2基因序列,设计了1对含有Kozak序列、PstⅠ和XbaⅠ酶切位点的引物,以含有NcSRS2基因的质粒P43为模板,经PCR扩增获得NcSRS2ORF基因片段,用PstⅠ和XbaⅠ双酶切该片段,回收得到含有以上2个酶切位点黏端的NcSR2ORF基因,将此基因片段克隆至相同酶切回收后的pcDNA3.1(+)真核表达载体中,获得重组质粒pcNCSRS2。经PCR鉴定、限制性内切酶分析和克隆片段序列测定、比较,证实了重组质粒的正确性。
- 赵占中刘群汪明
- 关键词：犬新孢子虫聚合酶链反应NCSRS2基因
