辽宁省高校创新团队支持计划(LT2010064)
- 作品数：32 被引量：171H指数：9
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- 知母皂苷对Aβ_(25-35)引起小脑颗粒细胞损伤的保护作用及其机制探讨被引量：6
- 2012年
- 目的观察知母皂苷对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)激活小鼠巨噬细胞引起小脑颗粒细胞损伤的保护作用及探讨其作用机制。方法小鼠小脑颗粒细胞与腹腔巨噬细胞联合培养及腹腔巨噬细胞单独培养,损伤组加入Aβ25-35(20μmol/L),保护组同时加入不同质量浓度知母皂苷(10、30、100μmol/L)。联合培养的细胞通过免疫组化染色观察微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达和测定乳酸脱氢酶(LDH)。单独培养的巨噬细胞用ELISA法和Griess法分别测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和一氧化氮(NO)。Western blot检测巨噬细胞磷酸化p38MAPK表达水平。结果知母皂苷组可使MAP-2表达阳性的小脑颗粒细胞数目较Aβ25-35组明显增加,LDH漏出量减少;巨噬细胞培养液中IL-1β和NO生成量减少以及巨噬细胞磷酸化p38MAPK表达水平明显降低。SB203580也能抑制Aβ25-35引起的IL-1β和NO生成量增加。结论 知母皂苷通过抑制Aβ25-35激活巨噬细胞p38MAPK通路,使IL-1β和NO表达水平降低,从而对小脑颗粒细胞起到保护作用。
- 刘卓金英隋海娟闫恩志
- 关键词：知母皂苷炎症白介素-1Β微管相关蛋白-2
- 知母皂苷对脂多糖引起巨噬细胞分泌TNF-α和NO的影响及机制被引量：14
- 2013年
- 目的:观察知母皂苷是否能抑制脂多糖引起的小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子TNF-α和NO释放并探讨PI3K/Akt/p70S6K信号转导通路的影响。方法:小鼠腹腔巨噬细胞培养24 h,加入不同浓度知母皂苷(1、10和100μmol/L)或加入不同的阻断剂(PI3K特异性阻断剂LY294002、Akt特异性阻断剂TCBN),之后加入脂多糖(10 mg/L)继续培养。ELISA法和Griess法分别测定巨噬细胞培养上清液中TNF-α和NO的含量;免疫化学荧光染色法观察巨噬细胞磷酸化p70S6K表达水平的改变。结果:加入脂多糖作用2 h巨噬细胞上清液中TNF-α开始含量明显增加,24 h达高峰。知母皂苷(1、10和100μmol/L)、LY294002(20μmol/L)和TCBN(10μmol/L)均可不同程度的抑制脂多糖引起的巨噬细胞TNF-和NO产生增加。知母皂苷(100μmol/L)可减少脂多糖引起的小鼠腹腔巨噬细胞磷酸化p70S6K表达增加。结论:知母皂苷显著抑制脂多糖引起的巨噬细胞炎症因子TNF-α和NO释放,其作用机制与知母皂苷下调PI3K/Akt/p70S6K信号转导通路表达有关。
- 刘卓隋海娟闫恩志刘婉珠金英
- 关键词：知母皂苷巨噬细胞脂多糖肿瘤坏死因子-Α
- 阿魏酸钠对脂多糖引起的大鼠海马炎症反应的抑制作用及其机制探讨被引量：6
- 2013年
- 目的研究阿魏酸钠抑制脂多糖所致大鼠海马炎症反应的信号传导机制。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、阿魏酸钠组(100、200 mg/kg)。对照组、模型组大鼠灌胃等量生理盐水,阿魏酸钠组大鼠灌胃给予不同剂量阿魏酸钠(100、200 mg/kg)。3周后,模型组、阿魏酸钠组脑室注射脂多糖建立损伤模型,对照组注射等量生理盐水。取海马CA1区,Western蛋白印迹观察白介素-1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶3/6抗体(MKK3/MKK6)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶P38(p38MAPK)、磷酸化活化转录因子2(ATF-2)表达。RT-PCR检测IL-1β和iNOS的mRNA表达水平。结果阿魏酸钠(100、200 mg/kg)可对抗脑室内注射脂多糖引起的IL-1β、iNOS表达增加,抑制磷酸化的MKK3/6、p38MAPK和ATF-2表达(P<0.01)。结论阿魏酸钠通过抑制p38MAPK信号传导通路激活对抗脂多糖引起的海马炎症反应。
- 闫恩志范莹隋海娟刘婉珠刘卓金英
- 关键词：阿魏酸钠脂多糖海马
- 阿魏酸钠对淀粉样β蛋白片段1-42引起的培养海马神经元损伤的保护作用及机制被引量：1
- 2013年
- 目的研究阿魏酸钠对β蛋白片段1-42所致培养海马神经元损伤的保护作用及机制。方法原代培养海马神经元,阿魏酸钠(50、100、200μmol·L-1)预处理6 h后,加入50 nmol·L-1的Aβ1-42作用72 h,MTT法测海马神经元细胞存活率,应用倒置相差显微镜和微管相关蛋白-2(MAP-2)免疫荧光染色观察神经元树突的生长,Western蛋白印迹法检测海马神经元磷酸化mTOR和p70s6K蛋白表达。结果与对照组相比,Aβ1-42引起海马神经元细胞的存活率明显降低(P<0.01),可使培养海马神经元出现明显退行性改变,表现为树突串珠样改变和突起回缩,树突总长度和末梢分支数明显减少,磷酸化的mTOR和p70s6K蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。应用阿魏酸钠(50、100、200μmol·L-1)预处理6 h可明显对抗Aβ1-42引起的神经元损伤及蛋白表达的改变(P<0.01)。结论阿魏酸钠通过上调磷酸化的mTOR/p70s6K对抗Aβ1-42引起的海马神经元损伤。
- 闫恩志范莹隋海娟刘婉珠金英
- 关键词：阿魏酸钠Β淀粉样蛋白海马神经元
- 知母皂苷元对体外培养皮层神经元树突发育的影响及信号转导机制被引量：8
- 2011年
- 目的探讨知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对大脑皮层神经元树突发育的促进作用及其信号转导机制。方法选用出生0～24 h的Sprague-Dawley(SD)大鼠乳鼠,取皮层神经元进行体外细胞培养,4 d后用于实验。倒置相差显微镜测量培养神经元树突分支总长度(TDBL)、一级树突数目(PDN)、最大分支级数(MBO)和神经元胞体面积。West-ern blot法观察神经元p-PDK1、p-Akt473及p-mTOR蛋白表达。结果形态学观察结果显示SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显促进树突发育,表现为树突分支总长度增加、一级树突数目增多、最大分支级数增大及胞体面积增大,并呈明显浓度依赖。SAR 30+LY组、SAR 30+TCBN组、SAR 30+Rapa组的神经元树突总长度、一级树突数目、最大分支级数及胞体面积较SAR30μmol.L-1组明显降低。Westernblot结果显示SAR 30也可明显增加p-PDK1、p-Akt473及p-mTOR蛋白表达水平。SAR 30+LY组明显降低神经元p-PDK1、p-Akt473及p-mTOR的蛋白表达水平。SAR 30+TCBN组明显降低神经元p-Akt473及p-mTOR的蛋白表达水平。SAR 30+Rapa组明显降低神经元p-mTOR的蛋白表达水平。结论 SAR对体外培养皮层神经元树突的发育有促进作用,这种作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号转导通路有关。
- 王金宁董燕隋海娟张永兴
- 关键词：知母皂苷元皮层神经元信号转导通路蛋白激酶B雷帕霉素靶蛋白
- 阿托伐他汀对谷氨酸引起大鼠神经元损伤保护作用机制的研究被引量：6
- 2010年
- 目的探讨阿托伐他汀对谷氨酸所致培养大鼠皮层神经元损伤保护作用的机制。方法 MTT法测定细胞存活率;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western blot检测活性的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。结果谷氨酸(100μmol.L-1)可使神经元细胞存活率下降,细胞凋亡百分比明显增加,活性的caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。阿托伐他汀明显对抗谷氨酸诱导的神经元存活率下降及细胞凋亡百分比增加,同时明显抑制活性的caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。磷酯酰肌醇-3激酶(phos-phoinositide3-kinase,PI3K)/磷酸化蛋白激酶B(protein ki-nase B,Akt)通路特异性阻断剂LY294002(10μmol.L-1)能抑制阿托伐他汀对抗谷氨酸引起神经元细胞存活率下降,细胞凋亡百分比增加及活性caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加的作用。结论阿托伐他汀能够明显对抗谷氨酸引起的皮层神经元损伤作用,这种作用可能与激活PI3K/Akt信号转导通路有关。
- 丁奇董燕金英隋海娟
- 关键词：阿托伐他汀谷氨酸神经元
- 吡格列酮对Aβ_(25-35)引起的皮层神经元损伤保护作用部分机制的研究被引量：3
- 2010年
- 目的研究吡格列酮对抗淀粉样β蛋白片段25-35(Amyloid-β,Aβ25-35)所致培养皮层神经元损伤作用的机制。方法取培养7d大鼠乳鼠大脑皮层神经元,Aβ组加入Aβ25-35(20μmol.L-1)作用24h;吡格列酮组和各种阻断剂组,先加入吡格列酮(0.1、1、10μmol.L-1)或各种阻断剂作用1h,然后加入Aβ25-35(20μmol.L-1)作用24h;正常对照组加入等量培养基。MTT法测定细胞存活率;免疫荧光染色法测定活性的caspase-3细胞内定位;Westernblot检测活性的caspase-3表达水平;Griess法测定培养细胞上清液中一氧化氮(NO)含量。结果神经元经NSE和NF200免疫荧光鉴定,其阳性率可达90%以上。Aβ25-35(20μmol.L-1)可使神经元细胞存活率下降、caspase-3表达明显增加,同时神经元培养液中的NO含量也明显增加。吡格列酮可明显抑制Aβ25-35诱导的神经元细胞存活率下降、抑制caspase-3表达的增加,吡格列酮还可明显抑制Aβ25-35诱导的神经元培养液中NO含量增加,且呈浓度依赖性。GW9662(10μmol.L-1)能明显对抗吡格列酮对Aβ25-35诱导的神经元细胞存活率下降、活性的caspase-3表达增加、NO增加的抑制作用。SP600125(5μmol.L-1)、SB203580(20μmol.L-1)和SMT(1mmol.L-1)可明显对抗Aβ25-35诱导的神经元细胞存活率下降及培养液中NO含量增加。结论吡格列酮能够明显的抑制Aβ25-35引起的皮层神经元损伤作用,这种作用可能与激活PPARγ受体、抑制JNK信号传导通路和p38MAPK信号传导通路有关。
- 董燕丁奇金英隋海娟刘卓闫恩志
- 关键词：吡格列酮阿尔采末病C-JUN氨基末端激酶神经元
- 知母皂苷元对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用研究被引量：11
- 2013年
- 目的观察知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用。方法大鼠乳鼠大脑皮层神经元,培养7 d后用于实验。倒置相差显微镜观察神经元树突生长发育情况;用MTT法测定细胞活力;Ho-echst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测神经元SYP、caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。结果形态学观察结果显示谷氨酸可明显抑制神经元树突的生长发育,表现为神经元树突总长度明显降低、一级树突数目明显减少、最大分支级数明显减少及胞体面积缩小。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显抑制谷氨酸对神经元树突生长发育的抑制作用,并呈明显浓度依赖。MTT和Ho-echst33258核染色结果显示谷氨酸可降低神经元细胞活力及增加神经元细胞凋亡百分比。SAR(10、30、100μmol.L-1)能明显对抗谷氨酸引起的神经元细胞活力降低及细胞凋亡百分比增加。Western印迹结果显示谷氨酸可明显降低SYP蛋白表达水平及增加活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。SAR(10、30、100μmol.L-1)可明显对抗谷氨酸引起SYP蛋白表达降低及活性caspase-3、钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。结论知母皂苷元能够明显对抗谷氨酸引起的皮层神经元损伤作用。
- 王琦隋海娟屈文慧郁盛雪金迎新刘卓金英
- 关键词：知母皂苷元谷氨酸皮层神经元突触素
- 知母皂苷对脂多糖诱导巨噬细胞炎症介质释放影响被引量：6
- 2013年
- 目的观察知母皂苷是否能对抗脂多糖(LPS)引起的小鼠腹腔巨噬细胞炎症介质释放并探讨丝裂原活化蛋白激酶(MARK)信号转导通路影响。方法实验设对照组,脂多糖组,知母皂苷低、中、高剂量组和阻断剂组,Griess法测定巨噬细胞培养上清液一氧化氮(NO)含量变化;酶联免疫吸附法测定巨噬细胞培养上清液中白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;免疫化学染色法观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达。结果加入脂多糖作用2 h,巨噬细胞上清液中NO含量明显增加,24 h达高峰,知母皂苷(10、30、100μmol/L)可抑制脂多糖引起的IL-1β、TNF-α、NO增加和iNOS表达增多,100μmol/L知母皂苷组IL-1β、TNF-α和NO水平分别从(698.8±32.0)ng/L、(257.4±27.3)ng/L和(181.0±19.9)μmol/L下降到(382.7±48.9)ng/L、(111.6±23.9)ng/L和(82.6±18.1)μmol/L;SP600125和SB203580均可不同程度抑制脂多糖引起的巨噬细胞IL-1β、TNF-α和NO增加;S-甲基异硫脲可完全对抗脂多糖引起NO释放。结论知母皂苷明显抑制脂多糖引起的巨噬细胞炎症因子释放,其机制与下调p38MAPK和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路表达有关。
- 刘卓隋海娟闫恩志刘婉珠金英
- 关键词：知母皂苷脂多糖炎症介质
- 知母皂苷对脂多糖引起星形胶质细胞炎症因子释放的影响及机制被引量：9
- 2012年
- 目的研究知母皂苷(SAaB)对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞(AC)炎症因子释放的抑制作用及JNK信号传导通路对其的影响。方法实验设对照组、LPS组、SAaB组和阻断剂组。ELISA法和Griess法分别测定各组AC培养液中TNF-α和NO的含量;Western blot检测AC磷酸化JNK和磷酸化c-Jun蛋白表达水平的改变;免疫荧光染色法观察AC的磷酸化ATF-2蛋白表达水平。结果 AC在LPS(10mg.L-1)刺激下TNF-α和NO的分泌、磷酸化JNK1、磷酸化c-Jun和磷酸化ATF-2蛋白表达水平与正常对照组比较均明显增高。特异性JNK特异性阻断剂SP600125(10μmol.L-1)可明显抑制LPS引起的TNF-α和NO产生增加以及磷酸化ATF-2蛋白表达水平;SAaB(1、10、100μmol.L-1)则可明显降低TNF-α和NO产生,下调磷酸化JNK、磷酸化c-Jun和磷酸化ATF-2的蛋白表达水平。结论 SAaB能明显抑制LPS诱导的大鼠皮层AC炎症因子的释放,这种作用可能与其下调JNK信号转导通路有关。
- 刘卓隋海娟闫恩志刘婉珠金英
- 关键词：知母皂苷脂多糖炎症因子C-JUN氨基末端激酶转录因子C-JUN
