国家自然科学基金(30872992)
- 作品数：18 被引量：42H指数：6
- 相关作者：秦宜德顾芳何晓光郑欣张文晓更多>>
- 相关机构：安徽医科大学安徽新华学院合肥市红十字会中心血站更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 牛乳铁蛋白抗菌肽抗肺癌细胞增殖及其作用机制研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨牛乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)抗人肺癌细胞功能及其作用机制。方法体外培养人肺腺癌A549细胞株,实验分为:阴性对照组、LfcinB处理组和阳性对照组。采用MTT法检测LfcinB对人肺腺癌A549细胞增殖的影响,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率。结果与阴性对照组比较,不同浓度的LfcinB均对A549细胞增殖有抑制作用,其中以10-2g/L浓度LfcinB的抑制率最高(P<0.01)。与阴性对照组比较,不同浓度的LfcinB作用于A549细胞24、48、72 h后,G0/G1期细胞略有减少,S期细胞逐渐增多,G2/M期细胞略有减少,且在72 h结果最为显著(P<0.01)。Lf-cinB在10-6～10-2g/L浓度范围内作用48、72 h均可诱导A549细胞凋亡,随着药物浓度增高,诱导凋亡作用加重,有明显的剂量效应关系。结论 LfcinB能显著抑制人肺腺癌A549细胞增殖,使细胞阻滞于S期,并诱导细胞凋亡。
- 石皖荣邓松华秦宜德徐文竹
- 关键词：A549细胞细胞增殖
- 乳源免疫调节肽对人卵巢癌SKOV3细胞生长及凋亡的影响被引量：7
- 2009年
- 目的:探讨乳源免疫调节肽对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞生长和凋亡的影响。方法:不同浓度乳源免疫调节肽对体外培养的SKOV3细胞作用24、48、72及96 h后,应用MTT法检测细胞的生长抑制情况,采用HE染色、透射电子显微镜观察及FCM分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果:乳源免疫调节肽对SKOV3细胞有增殖抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),且增殖抑制作用具有时间和浓度依赖性。HE染色和电子显微镜下均观察到用药后出现凋亡细胞的形态学特征。FCM检测发现,乳源免疫调节肽作用后细胞的凋亡率与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),其中3×10-4g/L PGPIPN(Pro-Gly-Pro-Zle-Pro-Asn)组的细胞凋亡率最高,达29.4%。结论:乳源免疫调节肽可以抑制体外培养的人卵巢浆液性乳头状囊腺癌SKOV3细胞的增殖,并可诱导其凋亡。
- 李素萍郭晓婕贾晓益顾芳刘忠秦宜德
- 关键词：卵巢肿瘤细胞培养技术细胞SKOV3
- FTZ-2,a Diterpenoid induced apoptosis of t（8;21） leukemia cells
- ＜正＞Acute myeloid leukemia（AML） is a heterogeneous disease and is classified based on the presence of specific ...
- Tingting Feng~1 Changlin Tian~2 Handong Sun~3 GuangbiaoZhou~2 Yide Qin~1 (1 College of Basic Medical Sciences,Anhui Medical University,Hefei 230032
- 关键词：UBIQUITINAPOPTOSIS
- 文献传递
- 乳源免疫调节肽体外抑制人卵巢癌细胞侵袭和转移被引量：10
- 2013年
- 目的探讨乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人卵巢癌细胞株(SKOV3)侵袭和转移的影响。方法 Transwell小室测定其侵袭力和迁移力,细胞划痕实验测定细胞运动能力,细胞克隆形成实验观察SKOV3的克隆形成能力,用MTT法比较PGPIPN对SKOV3、人正常肝细胞株LO2和小鼠永生化成纤维细胞株(MEFS)的生长抑制情况,检测PGPIPN的细胞毒性。结果 Transwell试验中,与空白对照组相比,浓度为1 mg.L-1和10 mg.L-1的PGPIPN明显抑制了SKOV3的侵袭和转移(P<0.01),抑制率分别为20.20%和23.78%;划痕实验显示对细胞的运动能力得到了明显的抑制;平板法的克隆形成实验结果较明显,与空白对照组相比,1 mg.L-1和10 mg.L-1的PGPIPN抑制率分别为32.50%和38.11%;PGPIPN抑制SKOV3细胞生长,对正常细胞无明显影响。结论乳源免疫调节肽能够抑制人卵巢癌细胞的侵袭和转移。
- 魏彩秦宜德郑欣何晓光张文晓杨浩然
- 关键词：顺铂卵巢癌细胞
- 乳源抗菌-免疫调节融合肽对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响
- 2014年
- 目的研究乳源抗菌-免疫调节融合肽(AIFP)对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用MTT法测定AIFP对卵巢癌细胞株SKOV3细胞和原代培养的卵巢癌细胞增殖的影响;流式细胞术测定AIFP对SKOV3细胞和原代卵巢癌细胞凋亡、周期的影响;并用RT-PCR检测AIFP对SKOV3细胞及原代癌细胞凋亡和周期相关基因表达水平的影响,以探讨其可能机制。结果 MTT法显示,AIFP对卵巢癌细胞的增殖具有抑制作用,且具有时间和剂量依赖性,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,AIFP诱导卵巢癌细胞的凋亡,具有剂量和时间依赖性,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。RT-PCR结果表明,AIFP可以影响细胞凋亡和细胞周期相关基因(Akt、CDC25C和cyclinB1)的表达。结论 AIFP上调卵巢癌细胞凋亡和周期相关基因Akt、CDC25C和cyclinB1的表达,对卵巢癌细胞株SKOV3具有抑制增殖和促进凋亡的作用。
- 唐宜桂李小勤刘琛雷婷秦宜德
- 关键词：SKOV3增殖凋亡
- 人MUC16基因启动子区域的初步分析
- 2009年
- 目的分析人MUC16基因的转录起始位点和重要的调控区域,确定人MUC16基因的核心启动子可能存在区域。方法用生物信息学分析人MUC16基因启动子所在区域。培养SKOV3细胞株并提取细胞基因组DNA,用PCR技术扩增启动子区域的594(-1 844/-1 250/)、548(-1 798/-1 250)、326(-1 576/-1 250)和170 bp(-1 420/-1 250)的启动子片段,分别构建重组PGEM-T质粒,再克隆入荧光素酶报告基因载体PGL3载体,构建PGL3-170、PGL3-326、PGL3-548和PGL3-594重组表达质粒。用脂质体介导的方法瞬时转染SKOV3细胞,测定荧光素酶的表达活性。结果成功构建4种人MUC16基因启动子片段的荧光素酶报告基因表达体系,分别为PGL3-170(-1 420/-1 250)、PGL3-326(-1 576/-1 250)、PGL3-548(-1 798/-1 250)和PGL3-594(-1 844/-1 250),各缺失片段在SK-OV3细胞中均有活性。MUC16的核心启动子5′端可能为PGL3-326的3′端,3′端固定在-1 250处,5′端由-1 844向-1420移动时启动子活性逐渐增强,且变化幅度较大,提示这一区间内可能存在重要的顺式作用元件。结论成功构建了人MUC16基因启动子片段的荧光素酶报告基因载体,确定人MUC16基因的核心启动子区域。
- 王超秦宜德王巍顾芳
- 乳源免疫调节肽抗人卵巢癌的实验研究被引量：6
- 2009年
- 目的:通过荷人卵巢癌裸鼠模型,研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)的抑癌作用。方法:建立荷人卵巢癌裸鼠模型,皮下接种肿瘤细胞后,分别用0.9%氯化钠液(NS组),低剂量PGPIPN(2.5×10-4mg/L)(PGPIPN1组),高剂量PGPIPN(5.0×10-4mg/L)(PGPIPN2组),0.2ml隔日腹腔注射;氟尿嘧啶(5-Fu)(30mg/kg·d)(5-Fu组)通过腹腔注射。种植5周后处死裸鼠,测量荷人卵巢癌裸鼠的体重、瘤重、脾重,计算抑瘤率、脾指数,观察PGPIPN对卵巢癌肿瘤的抑制作用,并通过HE染色、DNA凝胶电泳分析技术观察PGPIPN对卵巢癌细胞及其DNA的影响。结果:荷人卵巢癌裸鼠经PGPIPN治疗后出现肿瘤体积缩小,PGPIPN2组抗瘤效果优于PGPIPN1组,同时还能改善荷人卵巢癌裸鼠的体质,提高荷人卵巢癌裸鼠的生存质量,增强SKOV3裸鼠免疫功能。组织病理学检查发现:PG-PIPN1组可见小片状瘤细胞发生凋亡,PGPIPN2组可见瘤细胞大片发生凋亡。PGPIPN组的瘤组织中提取的DNA进行琼脂糖电泳均出现特征性DNA梯形电泳条带。结论:PGPIPN有明显的抑瘤效应,可诱导人卵巢癌细胞发生凋亡。这为卵巢癌的治疗提供了新方法。
- 顾芳秦宜德董华胜王超周艳江良梁
- 关键词：免疫调节肽荷人卵巢癌裸鼠人卵巢癌细胞细胞凋亡
- 筛选和鉴定抗卵巢癌活性六肽的靶点蛋白
- 2014年
- 目的采用pull-down技术筛选乳源抗癌六肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上的靶点蛋白(受体)并进行鉴定。方法以PGPIPN的序列为参照,设计出PGPIPN基因,以BamHⅠ/XhoⅠ为酶切位点,将PGPIPN基因构建到表达质粒载体pGEX-4T-1中,转化到E.coli BL21中,用诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)低温诱导表达的谷胱甘肽S转移酶(GST)标签融合蛋白作为诱饵蛋白;从SKOV3中提取的总蛋白作为捕获蛋白,运用GST pulldown技术,筛选出靶点蛋白质,运用SDS-PAGE电泳进行初步鉴定,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的PGPIPN孵育鉴定。结果 SDS-PAGE电泳中有两条条带,一条为诱饵蛋白,一条为目的条带,在免疫荧光显微镜下观察到荧光PGPIPN结合到该条带上。结论筛选和鉴定了PGPIPN作用于卵巢癌细胞上的靶蛋白,为研究其抗癌的作用机制及其信号转导通路奠定了基础。
- 李小勤唐宜桂刘琛雷婷秦宜德
- 关键词：GST诱饵蛋白
- 乳铁蛋白抗菌-乳源免疫调节融合肽的表达纯化及其基因对SKOV3细胞的影响
- 2014年
- 目的构建并鉴定牛乳铁蛋白抗菌-乳源免疫调节融合肽(简称LIFP)基因的重组载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达和纯化,获得较高纯度的融合肽;研究LIFP基因体外对卵巢癌细胞SKOV3的影响,为基因治疗卵巢癌提供基础。方法以GENBANK报道的牛乳铁蛋白抗菌肽(LFCINB)与乳源免疫调节肽(PGPIPN)的序列为参照,以连接臂GGGGS连接两种肽,合成融合肽LIFP基因,并在其5’端加入凝血酶FXA识别的酶切位点。将LIFP基因构建到表达载体PGEX-KG中,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定后,采用最优表达条件诱导重组载体在大肠杆菌BL21中表达,超声裂菌后,SDS-PAGE和Western-blot鉴定融合蛋白(LIFP-GST),通过AKTA层析系统纯化融合蛋白,FXA酶切后,高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)鉴定LIFP的表达;将LIFP基因构建到PLJM1载体[含CMV启动子和绿色荧光蛋白(GFP)中,获得PLJM1-LIFP慢病毒表达载体,经PCR检测及测序鉴定后,与慢病毒包装质粒通过LIPOFEETAMINE 2000共转染至包装细胞293T,包装产生病毒液,并测定其滴度;体外培养人卵巢癌细胞SKOV3,重组慢病毒感染细胞后,MTT法观察融合肽对SKOV3细胞的生长抑制作用,HOECHST33258染色观察细胞核形态的变化。结果PCR和测序证实成功构建了PGEX-KG-LIFP重组载体;WESTERN-BLOT结果显示成功诱导LIFP的高表达;HPLC显示获得较高纯度LIFP;MS显示氨基酸序列与目的肽一致;成功构建PLJM1-LIFP慢病毒表达载体,三质粒共转染293T细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光。包装慢病毒产生病毒悬液的滴度为1.2×108TU/ml;重组病毒感染SKOV3细胞后,MTT结果显示融合肽对体外培养的SKOV3细胞生长具有抑制作用(P<0.05),荧光显微镜观察到凋亡细胞典型的形态学特征。结论成功诱导表达纯化融合肽,并初步证实对体外SKOV3有生长抑制和诱导细胞凋亡作用。
- 张文晓秦宜德
- 关键词：融合肽慢病毒载体
- 卵巢癌细胞中乳源免疫调节肽受体蛋白的筛选被引量：1
- 2012年
- 目的乳源免疫调节肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上进行受体蛋白的筛选。方法异硫氰酸荧光素(FITC)标记PGPIPN,作用于SKOV3观察其细胞定位;从SKOV3中提取作用部位的蛋白;通过NHS-activated亲和层析柱进行分离和纯化受体蛋白质,SDS-PAGE的初步鉴定。结果在激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光标记肽结合于SKOV3的胞膜上。通过提取膜蛋白和亲和层析法成功筛选了受体膜蛋白。结论 PGPIPN的作用位点位于细胞膜上,其抗癌作用可能通过胞膜结合蛋白而启动信号转导通路,为进一步探讨其抗癌机制奠定基础。
- 何晓光郑欣任明强张文晓杨浩然魏彩顾芳秦宜德
- 关键词：免疫调节肽受体蛋白
