国家教育部博士点基金(20050610071)
- 作品数：17 被引量：51H指数：5
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- 相关机构：四川大学都江堰市人民医院贵州省人民医院更多>>
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- MMP-2在缺氧缺血／复氧再灌注损伤新生大鼠星形胶质细胞表达及FDP干预研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究新生大鼠星形胶质细胞(AC)基质金属蛋白酶2(MMP-2)在缺氧缺血/复氧再灌注(复氧)损伤中的变化和1,6-二磷酸果糖(FDP)对AC缺氧/复氧损伤MMP-2表达的影响,为缺氧缺血性脑损伤的机制和治疗提供线索。方法采用免疫激光共聚焦的方法检测体外培养的AC在缺氧/复氧不同时段和给予FDP干预时MMP-2的表达。结果随着缺氧/复氧时间延长,MMP-2蛋白在AC的表达明显增高;FDP保护组及治疗组较相应时段缺氧复氧组MMP-2蛋白表达均明显降低。且随着缺氧/复氧时间延长,AC形态变化明显,主要表现为细胞间连接减少,足突减少;FDP保护12 h组及FDP治疗6 h组,AC形态变化明显减轻。结论在缺氧/复氧损伤时,AC的MMP-2表达增高,AC间的相互连接破坏,影响AC正常形态、功能的维持。FDP可通过降低MMP-2的表达,以维持AC间相互连接和AC的正常形态,减轻缺氧/复氧对AC的损伤。
- 陈蓉姚裕家王予川
- 关键词：复氧1,6-二磷酸果糖
- AQP-4 mRNA在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达及与脑水肿的关系探讨被引量：2
- 2007年
- 目的观察水通道蛋白4 mRNA(aquaporin-4,AQP-4 mRNA)在新生鼠缺氧缺血损伤脑组织的表达,探讨其变化及与脑水肿发生的可能关系。方法健康7日龄SD大鼠共240只,随机分为对照组120只和缺氧缺血性脑损伤模型组(HIBD组)120只。HIBD组经右侧颈总动脉结扎后,吸入8%O21h,建立HIBD模型。对照组仅行假手术,不予颈总动脉结扎和缺氧。两组均于HIBD模型制成后0、6、24、48h和72h分别处死动物(各时间点动物24只),进行脑含水量观察,RealtimePCR检测脑组织AQP-4 mRNA表达。结果HIBD组6、24、48h和72h脑组织含水量均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,HIBD组脑组织AQP-4 mRNA表达在48h内呈下降趋势,72h出现恢复,但仍低于对照组(P<0.05)。结论AQP-4 mRNA在脑组织表达下降可能与脑水肿的发生有关,我们推测AQP-4可能参与了HIBD时脑水肿的调节机制。
- 杨钊姚裕家付雪梅
- 关键词：脑水肿
- 新生鼠缺氧缺血性脑损伤海马区内源性神经干细胞表达及雌激素对其影响的研究
- 2008年
- 目的观察新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)海马区内源性神经干细胞的表达,研究雌激素对HIBD海马区内源性神经干细胞表达的影响。方法本研究将7日龄SD大鼠随机分组(n=8),取HIBD后12h、1、3、7d和14d为观察点,设立5个时间点的模型组和对照组(即假手术组)。采用免疫荧光法检测各时间点海马区的巢蛋白(nestin)表达。雌激素干预实验设立对照组(C3组)、HIBD组(M3组)、空白溶剂组(N3组)及不同剂量17β-雌二醇组[10μg/(kg.d)(L3组)、100μg/(kg.d)(B3组)及1000μg/(kg.d)(H3组)]。使用雌激素各组分别在大鼠HIBD造模后3d,每天颈部皮下注射17β-雌二醇(17-βestradiol,E2)1次,连续3d,空白溶剂组(N3组)在HIBD后注射等量溶剂橄榄油。对所有实验动物腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶50mg/kg,2次/d,共3d。结果HIBD后各组与对照组比较,海马区nestin表达在HIBD后1d开始升高,HIBD后3d达高峰,HIBD后7d仍高于对照组(P<0.05)。17-βE2干预各组(L3、B3及H3组)海马区Brdu阳性细胞数较对照组(C3组)明显增加(P<0.05)。干预组随17-βE2剂量增加,海马区Brdu阳性细胞数增加(P<0.05)。结论新生鼠HIBD后,海马区神经干细胞有激活反应,HIBD后3d最明显;雌激素可以促进HIBD后海马区神经干细胞的增殖。
- 金冬梅姚裕家
- 关键词：新生鼠HIBD神经干细胞雌激素
- NgR在新生大鼠少突胶质前体细胞系的表达和缺氧缺血后变化的意义被引量：5
- 2007年
- 目的观察NgR在新生大鼠少突胶质前体细胞系(OLPs)的表达和细胞定位,以及缺氧缺血(OGD)损伤后的表达变化,探讨其在OLPs损伤后再生抑制中的作用。方法采用改良振荡分离纯化法体外培养OLPs,采用其特异性抗体A2B5、O4和O1作细胞鉴定;用NgR抗体检测其在OLPs表达。用含连二亚硫酸钠的无糖培养基制作OLPs OGD模型,MTT法检测各组细胞存活率;用免疫荧光法和免疫印迹法观察NgR在细胞OGD后的变化。结果OLPs在分离纯化培养后的第1,2和4天均表达NgR,阳性表达位于胞体及突起;细胞OGD后10min,NgR表达出现增强,30min后明显升高,与对照组比较差异具有显著性(均P(0.05);MTT结果显示,OGD30min,细胞存活率较对照组显著降低(P(0.05)。结论OLPs胞体及突起上均表达NgR;OGD后NgR表达明显增强,细胞存活率显著降低,提示NgR可能参与OGD后OLPs的再生抑制过程。
- 唐军姚裕家钟琳
- 关键词：NGR少突胶质前体细胞缺氧缺血损伤新生大鼠
- AQP-4蛋白和AQP-4mRNA在新生鼠缺氧缺血脑组织的表达变化
- 2010年
- 目的探讨新生鼠缺氧缺血损伤脑组织水通道蛋白4的蛋白和mRNA(aquaporin-4,AQP-4)表达的变化及意义。方法健康7d龄SD大鼠共80只,分为对照组和缺氧缺血性脑损伤模型组(HIBD组)。每组动物8只。HIBD组经右侧颈总动脉结扎后,吸入8%O21h,建立HIBD模型。对照组仅行假手术,不予颈总动脉结扎和缺氧。HIBD组于HIBD模型制成后0、6、24、48h和72h分别处死动物(各时间点动物8只),对照组与HIBD组相对应时间点分别处死动物,对两组动物进行脑组织病理学观察,Western Blot免疫印迹法检测脑组织AQP-4蛋白的表达和RealtimePCR检测脑组织AQP-4mRNA的表达。结果 HIBD组在HIBD后6、24、48h和72h脑组织病理学出现脑水肿及软化、梗死等改变,并随缺氧缺血后时间延长病理学改变加重。与对照组比较,HIBD组脑组织AQP-4蛋白和AQP-4mRNA表达从HIBD后6h即开始下降,48h内下降至最低,72h出现恢复,但仍低于对照组(P<0.05)。结论 AQP-4可能参与脑内渗透平衡的重建,AQP-4表达下降可能与HIBD脑组织脑水肿及病理学变化的发生发展有关。
- 杨钊姚裕家陈娟
- 关键词：水通道蛋白4缺氧缺血性脑损伤实时PCR
- 未成熟大鼠缺氧缺血性脑白质损伤中F-actin及RhoA变化被引量：3
- 2007年
- 目的研究丝状肌动蛋白(filament actin,F-actin)和 RhoA 在未成熟大鼠缺氧缺血(hypoxic-ischemia,HI)性脑白质损伤(white matter damage,WMD)中的变化,探讨两者作用及可能存在的关系。方法 2日龄 SD 大鼠(n=184只)随机分为14组:7个时段 WMD 组(HI 后12、24、48、72 h,7、14、28 d)和7个相应时段对照组。采用 Back 方法制作 WMD 动物模型。HE 染色观察脑组织病理学变化,电镜观察超微结构改变。采用荧光免疫组织化学方法(n=80只)和实时荧光定量 PCR(n=80只)分别观察 HI 后12、24、48、72 h,7 d 脑组织中 F-actin 和 RhoA 的变化。结果 (1)光镜和透射电镜检查脑组织,符合 WMD 的病理及超微结构也改变。(2)WMD 组胞膜荧光染色不连续细胞百分比与对照组相比明显增高(P<0.05),WMD 组分别为0.32±0.04,0.43±0.04,0.56±0.03,0.65±0.04,0.87±0.03;对照组为0.02±0.01,0.02±0.01,0.01±0.01,0.02±0.01,0.02±0.01。(3)WMD 组 RhoAmRNA 表达在 HI 后12、24、48、72 h 均明显高于对照组(P<0.05),WMD 组分别为1.205,2.415,4.830,1.500;对照组为0.300,0.375,0.375,0.530。HI 后7 d WMD 组 RhoAmRNA表达接近对照组(P>0.05)。结论 (1)2日龄未成熟大鼠 WMD 模型建立成功。(2)HI 后,F-actin在细胞内分布发生变化:细胞膜上分布减少,胞浆中分布增高,该变化可能与神经细胞生长锥的塌陷和回缩有关。(3)WMD 中 RhoA 可能在一定程度上参与了 F-actin 分布表达的变化,但并不是影响F-actin 的惟一因素。
- 李晋辉姚裕家石晶李德渊
- 关键词：肌动蛋白类
- SD大鼠少突胶质前体细胞系的分离、培养及鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的获取高纯度的少突胶质前体细胞系,并作鉴定。方法根据星形胶质细胞和少突胶质前体细胞系生长时间的差异,细胞黏附特性的不同,利用振荡分离纯化法获得纯化的SD大鼠少突胶质前体细胞,再用添加了神经营养因子(N2)、血小板衍生生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的无血清培养基传代培养。免疫荧光法对表面抗原进行细胞鉴定。结果获得纯度95%以上少突胶质前体细胞,少突胶质祖细胞A2B5、O4抗体阳性;未成熟少突胶质细胞O4、O1阳性;胶质细丝酸性蛋白(GFAP)均为阴性。结论通过振荡分离纯化法及结合少突胶质细胞定向培养基是培养少突胶质前体细胞的可靠方法;N2、PDGF、bFGF的添加可显著提高细胞产量,并使细胞保持在未成熟阶段。
- 唐军钟琳姚裕家陈娟
- 关键词：少突胶质前体细胞细胞培养
- 新生大鼠实验性脑室周围白质软化模型的建立及评价(英文)被引量：2
- 2007年
- 背景:脑室周围白质软化症由于缺乏公认有效的动物模型,影响了对脑室周围白质软化发病机制和干预的研究,因此建立可靠的动物模型来进行脑室周围白质软化症的研究很有必要。目的:制作2日龄SD大鼠脑室周围白质软化动物模型。设计:随机对照动物实验。单位:四川大学华西第二医院儿科。材料:选用36只生后2dSD大鼠,清洁级,雌雄不限,体质量6～8g,由四川大学华西实验动物中心提供,小鼠抗O4由Chemicon公司提供,兔抗胶质纤维酸性蛋白、兔抗β-淀粉样蛋白前体蛋白、兔抗髓鞘碱性蛋白、SABC免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供,兔抗小鼠IgG-FITC由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。方法:实验于2005-05/12在四川大学华西第二医院妇儿实验室完成。随机摸球法将大鼠分为脑室周围白质软化组和对照组,每组18只。脑室周围白质软化组行右侧颈总动脉结扎手术,体积分数为0.06氧气和体积分数为0.94氮气处理4h,分别在缺氧72h,14d及28d取6只处死。对照组只进行右侧颈总动脉分离术而不作结扎及缺氧处理,时间段与脑室周围白质软化组配对。①脑组织病理学观察:各组大鼠经心脏灌注固定行常规苏木精-伊红染色及电镜检查。②免疫组织化学检测:造模72h,采用胶质纤维酸性蛋白、β-淀粉样蛋白前体蛋白、小鼠抗O4免疫组化方法观察脑室周围白质软化组脑组织组织学变化;造模14d,采用兔抗髓鞘碱性蛋白免疫组化方法观察髓鞘碱性蛋白改变。③神经行为学检测:术后28d对两组小鼠进行悬吊试验(大鼠前腿抓住水平玻璃棒,离开桌面45cm记录大鼠掉下的时间,评分标准:1分:<10s;2分:10～30s;3分:30s～2min;4分:2～5min;5分:>5min)、倾斜板试验(大鼠倒置于45°斜面上,记录大鼠转为头向上>135°角度的时间)、旷场试验(无顶方盒箱底用墨线分成9个等分小格,大鼠�
- 石晶姚裕家李晋辉李德渊
- 缺氧缺糖损伤对未成熟大鼠少突胶质前体细胞表达Nogo-A的影响被引量：3
- 2007年
- 目的观察Nogo-A在新生大鼠少突胶质前体细胞系(OLPs)缺氧缺糖(OGD)损伤后的表达变化,探讨其在OLPs损伤后的作用。方法采用改良振荡分离纯化法体外培养OLPs,特异性抗体A2B5、O4和O1作细胞鉴定;用含连二亚硫酸钠的无糖培养基制作OLPsOGD模型,MTT法检测各组细胞存活率;用免疫荧光法和免疫印迹法观察Nogo-A在细胞OGD后的变化。结果Nogo-A在OLPsOGD10min表达较正常对照组增强,30min继续增高,60min最高,差异有统计学意义(P<0.05);MTT结果显示,OGD30min及60min细胞存活率较对照组降低(P<0.05)。结论OLPs在OGD后Nogo-A表达明显增强,细胞存活率降低,提示Nogo-A可能参与OGD后OLPs的再生抑制过程。
- 唐军姚裕家钟琳
- 关键词：少突胶质前体细胞缺氧缺糖
- 趋化因子受体CCR2在新生鼠实验性缺氧缺血损伤脑组织中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的观察新生鼠实验性缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑组织趋化因子受体2(CCR2)mRNA与蛋白质水平的表达变化,探讨其在HIBD中的作用。方法采用结扎7d龄SD大鼠右侧颈总动脉并暴露于8%氧气环境2.5h制作HIBD模型,用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应和SDS-PAGE免疫印迹方法,动态定量监测大脑皮质、海马区脑组织中CCR2mRNA与蛋白质表达水平在HIBD后不同时间点的变化,假手术组为对照组。结果HIBD后24h右侧脑组织CCR2mRNA水平最高,72h仍高于对照组(P<0.05),7d恢复至对照组水平(P>0.05);CCR2蛋白表达量在HIBG后24h最高,高于对照组(P<0.05),3d仍保持高水平表达(P<0.05),7d明显下降。结论HIBD后CCR2mRNA及蛋白质表达水平显著升高,其动态变化过程与脑损伤发展过程一致,提示CCR2参与了新生动物HIBD的发生。
- 冯雪姚裕家
- 关键词：缺氧缺血性脑损伤
