天津市自然科学基金(043803411)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 相关机构：天津市泌尿外科研究所中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
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- 核定位信号肽在异种移植动物模型转人α1,2-岩藻糖苷转移酶基因小鼠制备中的作用
- 2006年
- 目的探讨核定位信号肽(NLS)在转人α1,2-岩藻糖苷转移酶(HT)基因小鼠制备中的作用。方法将受精卵随机分为3组,采用显微注射的方法制备转基因小鼠。实验组:将NIS 转基因构件与人HT转基因构件同时导入细胞质;对照Ⅰ组:将人HT转基因构件导入细胞质;对照Ⅱ组:将人HT转基因构件导入细胞核。应用聚合酶链反应(PCR)、Southern杂交及逆转录 (RT)-PCR等方法检测人HT基因在G0代小鼠体内的整合与表达,应用流式细胞计数(FCM)检测转基因小鼠外周血单核细胞(PBMCs)表面H抗原与α-Gal抗原的表达。结果实验组与对照Ⅰ组 G0代小鼠的出生率33．8％(46／136)及35．4％(23／65)高于对照Ⅱ组10．2％(51／498)(P<0．01),实验组人HT基因的整合率(30．4％,14／46)高于对照Ⅰ组(0,0／23)与对照Ⅱ组(11．8％,6／51,P< 0．01),实验组人HT基因的表达率(19．6％,9／46)也高于对照Ⅰ组(0,0／23)和对照Ⅱ组(5．9％,3／ 51,P<0．01),人HT mRNA在小鼠心、肝、肾和骨骼肌组织中均表达阳性。转基因小鼠PBMCs表面H抗原表达阳性。表达强度为人的85％～190％,同时α-Gal抗原表达显著降低,为正常小鼠的 5％～12％。转基因小鼠已经稳定传3代。结论 NLS基因与目的基因细胞质共注射是制备转基因小鼠简便实用的新方法。
- 刘秉乾王广有马志方李胜芝李光三马腾骧
- 关键词：转基因
