国家教育部博士点基金(20050610050)
- 作品数：22 被引量：141H指数：7
- 相关作者：王树人苏娟智艳芳黄彦生张敬各更多>>
- 相关机构：四川大学河南省人民医院四川大学华西医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因启动子甲基化修饰及mRNA表达的影响
- 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(HVSMCs)5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因启动子甲基化修饰及其mRNA表达的影响。方法正常人脐动脉血管平滑肌细胞体外培养,在培养基中加入临床高Hcy血...
- 王丽珍张敬各王树人
- 关键词：同型半胱氨酸5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶DNA甲基化
- 文献传递
- 抗体新功能的发现：催化水的氧化作用
- 2008年
- 彭克军黄玉珊王树人
- 关键词：抗体单线态氧过氧化氢臭氧
- 高半胱氨酸在平滑肌细胞中介导DNA甲基化及机制的研究(英文)被引量：13
- 2007年
- 高同型半胱氨酸血症是引起动脉粥样硬化一个重要独立的危险因子,可以引起基因DNA甲基化表型改变和蛋白质表达失调,但是基因甲基化表型改变的特点和动脉粥样硬化是否有关及其机制,到目前为止还没有研究清楚.在平滑肌细胞培养的基础上研究高同型半胱氨酸血症对DNA甲基化的影响,高半胱氨酸诱导DNA甲基化表型改变的特征及潜在的机制.高半胱氨酸加入人脐静脉平滑肌培养24h后,高效液相检测SAM和SAH的浓度,实时RT-PCR和蛋白质印迹检测SAH水解酶mRNA和蛋白质表达.通过内源性DNA甲基转移酶活性变化、基因组DNA接受甲基的能力、甲基化限制性内切酶分析检测DNA甲基化水平的变化.结果显示,随着高半胱氨酸浓度的增加,SAH水平增加,SAM和SAM/SAH比率下降,SAH水解酶水平下降,但DNA甲基转移酶活性增加,用不同甲基化限制性内切酶分析发现C↓CGG序列更容易甲基化.由此可以推测,不同剂量的高半胱氨酸引起细胞损害效应的机制也不同,在低、中度高同型半胱氨酸血症,高半胱氨酸主要通过干扰高同型半胱氨酸的代谢途径影响基因表达表型修饰,在高度高同型半胱氨酸血症可能氧化应激、凋亡、炎症等发挥了更重要的作用.
- 姜怡邓张建中黄英苏娟张敬各王丽珍韩晓群王树人
- 关键词：高半胱氨酸DNA甲基转移酶DNA甲基化SAM
- 同型半胱氨酸、半胱氨酸在动脉粥样硬化发病机制中作用的对照研究被引量：3
- 2009年
- 目的以动脉粥样硬化(As)病灶中的主要细胞类型—血管平滑肌细胞为模型,对比研究同型半胱氨酸(Hcy)和半胱氨酸(Cys)在致As发病效应上的异同,以期为Hcy作为As独立危验因子的分子机制提供有比较的证据。方法体外培养人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs),用不同浓度的Hcy和Cys作用于细胞24h后:(1)用分光光度比色法测定细胞中SOD和MDA的含量;(2)流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR方法检测caspases-3 mRNA的表达;(3)MTT法测定细胞的增殖率;(4)用1000μmol/LHcy和Cys分别作用VSMCs24、48和72h后,MS-PCR法检测ERα启动子区甲基化的状态,半定量RT-PCR法检测ERα mRNA的表达。结果(1)Hcy可导致细胞内MDA、SOD呈剂量依赖性增加,Cys使MDA、SOD增加的效应远弱于Hcy(P<0.01)。(2)流式细胞术、caspases-3 mRNA的表达和MTT试验的结果显示,Hcy、Cys对血管平滑肌细胞凋亡率和增殖率的影响差异不太明显。(3)Hcy显著增加ERα基因启动区的甲基化修饰,并使ERα mRNA的表达进行性减少。Cys不影响ERα启动子区的甲基化状态,对ERα mRNA表达的影响也远小于Hcy。结论氧化应激对DNA甲基化修饰的影响可能在Hcy致As发病的机制中占据着重要的地位,这也可能是Hcy和Cys在As发病机制中作用不同的重要原因。
- 苏娟王生兰黄玉珊姜怡邓王树人
- 关键词：同型半胱氨酸半胱氨酸动脉粥样硬化血管平滑肌细胞
- 多梳基因EZH2与BMI-1在动脉粥样硬化大鼠主动脉中的过表达和EZH2的磷酸化被引量：2
- 2009年
- 目的检测EZH2与BMI-1在动脉粥样硬化大鼠主动脉中的表达改变,以及磷酸化蛋白激酶B-磷酸化EZH2通路在动脉粥样硬化大鼠主动脉中的表达变化,以探讨动脉粥样硬化发病中DNA甲基化修饰异常的上游表观遗传机制。方法建立大鼠动脉粥样硬化模型,通过血脂生物化学分析以及主动脉HE染色切片鉴定动脉粥样硬化模型。取胸腹主动脉内膜、中膜为标本,逆转录聚合酶链反应检测EZH2和BMI-1的mRNA表达,免疫组织化学法检测蛋白激酶B和EZH2蛋白磷酸化在动脉粥样硬化主动脉中的变化。结果模型组EZH2和BMI-1的mR-NA表达明显高于正常对照组(P<0.05和P<0.01)。模型组中蛋白激酶B和EZH2蛋白的磷酸化程度均明显高于正常对照组(P<0.01)。结论EZH2和BMI-1的mRNA在动脉粥样硬化病损动脉中显示共同高表达;且磷酸化EZH2蛋白和磷酸化蛋白激酶B蛋白表达在动脉粥样硬化病损动脉中平行上调,提示EZH2和BMI-1的共同高表达和蛋白激酶B介导的EZH2磷酸化可能是动脉粥样硬化发病过程中的早期表观遗传机制紊乱。
- 晏咏朗李丽娟谢静谢景王树人
- 关键词：动脉粥样硬化EZH2BMI-1蛋白激酶B
- 门冬氨酸钾镁抗心律失常及抗氧化损伤的机制研究被引量：6
- 2007年
- 目的探讨门冬氨酸钾镁对冠心病心绞痛和冠心病心律失常患者的氧化应激态及脂质氧化损伤的保护效应,及其对心律失常影响的可能机制。方法采用单盲随机原则将98例冠心病心绞痛和冠心病心律失常患者随机分为试验组（65例）和对照组（33例）。试验组在心血管疾病常规治疗基础上加用门冬氨酸钾镁,而对照组仅用心血管疾病常规治疗。两组分别在用药前和用药1周时检测血浆中还原型谷胱甘肽（GSH）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）、丙二醛（MDA）及氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）的含量,并连续监测24h心律。结果与对照组比较,试验组用药后1周GSH含量及GSH/GSSG比值均明显升高（P均〈0.01）,而GSSG、MDA及ox-LDL的含量均明显下降（P均〈0.01）。试验组期前收缩总数减少86.5%,对照组期前收缩总数只减少了47.4%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;且患者氧化应激态指标（GSH/GSSG比值、MDA、ox-LDL）的改善与期前收缩总数的减少呈显著的直线相关关系（P均〈0.01）。连续应用门冬氨酸钾镁1周未发现有药物不良反应事件发生。结论门冬氨酸钾镁能显著改善冠心病心绞痛和冠心病心律失常患者机体的氧化应激态,降低脂质氧化损伤程度,并对频发期前收缩有良好的治疗效应。门冬氨酸钾镁对频发期前收缩的治疗效果与其抗氧化损伤效应间具有显著的相关性,提示氧化应激可能是冠心病心律失常的发生机制之一。
- 智艳芳黄彦生许波实王树人
- 关键词：门冬氨酸钾镁谷胱甘肽丙二醛氧化低密度脂蛋白
- 同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因启动子甲基化修饰及mRNA表达的影响被引量：5
- 2007年
- 目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(HVSMCs)5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因启动子甲基化修饰及其mRNA表达的影响。方法正常人脐动脉血管平滑肌细胞体外培养,在培养基中加入临床高Hcy血症相关浓度及极高浓度的Hcy(0、30、100、200、500和1000μmol/L),并孵育72h,以MS-PCR分析MTHFR启动子区域甲基化状态,采用RT-PCR测定MTHFR mRNA的表达水平。结果不同浓度Hcy处理人血管平滑肌细胞后,其MTHFR基因启动子区域出现去甲基化,甲基化水平明显降低。RT-PCR结果显示MTHFR mRNA表达增加。结论Hcy可促进人血管平滑肌细胞MTHFR启动子区域去甲基化,并使MTHFR mRNA表达增加。
- 王丽珍张敬各王树人
- 关键词：同型半胱氨酸5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶DNA甲基化
- 动脉粥样硬化病人雌激素受体基因的甲基化与高同型半胱氨酸血症关系的研究被引量：16
- 2008年
- 目的探讨动脉粥样硬化(AS)患者雌激素受体(ER-α)基因启动子区CpG岛的甲基化改变,及其与血总同型半胱氨酸(tHcy)水平的关系。方法82例研究对象分为AS组(54例),对照组(28例),所有入选对象均行颈部血管彩超检查。巢式甲基化特异性PCR(nMSP)法检测研究对象ER-α启动子区CpG岛的甲基化状态,荧光生化法检测血tHcy水平,spearman等级相关分析甲基化程度与tHcy的相关关系。结果54例AS患者中有38例ER-α基因启动子区CpG岛甲基化,甲基化率为70.4%;28例健康对照者中有8例ER-α基因启动子区CpG岛甲基化,甲基化率为28.6%;两组甲基化率差异有显著性(P<0.05)。同时,AS组tHcy水平显著高于对照组(P<0.05),经spearman等级相关分析,ER-α基因启动子区甲基化程度与tHcy相关系数为r=0.809(P<0.05)。且随tHcy升高,AS病损程度亦递次加重。结论AS患者ER-α基因启动子区CpG岛高度甲基化,且甲基化程度与血tHcy浓度呈正相关,提示高Hcy血症很可能通过干扰ER-α基因的甲基化而促进AS的发生、发展。
- 智艳芳黄彦生李著华张瑞明王树人
- 关键词：雌激素受体Α甲基化同型半胱氨酸动脉粥样硬化
- 半胱氨酸对人血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察半胱氨酸(Cys)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响。方法采用组织贴块法体外培养人VSMCs,用不同浓度的Cys培养液孵育细胞24h,用MTT法检测VSMCs增殖,流式细胞术检测VSMCs凋亡,RT-PCR法检测bax mRNA的表达。结果体外培养的人VSMCs在终浓度为100、200、500和1000μmol/LCys的培养液中孵育24h后的吸光度(A)值均高于对照组(P<0.05),表明Cys可诱导人VSMCs增殖;但同时,VSMCs凋亡细胞数明显高于对照组(P<0.05),bax的表达增强,表明Cys亦诱导了人VSMCs凋亡。结论浓度较高时半胱氨酸可同时诱导VSMCs增殖和凋亡。
- 苏娟王生兰徐一洲李丽娟王树人
- 关键词：半胱氨酸血管平滑肌细胞增殖凋亡
- 体外培养对家兔血管平滑肌细胞细胞周期和超微结构的影响
- 2010年
- 目的探讨体外传代培养对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)细胞周期和超微结构的影响,确认体外培养对VSMCs增殖和细胞表型的影响。方法选择以未经培养传代的VSMCs和体外培养的第四代VSMCs作对比研究,采用流式细胞术检测VSMC细胞周期,透射电镜观察VSMCs的形态学特征,确定其表型转换及增殖特征。结果电镜观察显示,未经培养传代的VSMCs胞浆中肌丝分布丰富、均匀,并可见到收缩表型VSMCs的典型结构——密斑,内质网、高尔基复合体等细胞器相对较少;而体外培养至第四代时VSMCs胞浆中肌丝明显减少,内质网、高尔基复合体明显增多。流式检测结果显示,体外培养至第四代时的VSMCs和原代细胞比较,细胞增值率增加;G0/G1期细胞减少,S期细胞增多。结论VSMCs体外培养至第四代,在细胞增殖的同时,即可从典型的收缩表型转化为合成表型,提示VSMCs是一种很容易去分化的细胞,体外培养可使VSMCs增殖并伴表型转化。
- 王生兰刘辉琦刘杰王树人
- 关键词：血管平滑肌细胞表型体外培养细胞周期
