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荧光辅助糖电泳用于果胶水解产物中寡糖的分析研究被引量：8: 2009年; 荧光辅助糖电泳(FACE)是首先用荧光衍生化试剂对糖类分子的还原端进行衍生化标记,然后在一定浓度的聚丙烯酰胺凝胶上进行分离的分析方法,可同时分析中性糖与酸性糖.将该方法用于果胶寡糖的分离分析,对影响FACE的诸多因素如荧光试剂的种类、用量,荧光衍生化时间、温度,分离胶浓度及盐、酸等进行了考察,对果胶寡糖的FACE条件进行了优化,结果显示:每1.2mg无酸且不含盐的果胶寡糖中,加入0.2mol/L的ANTS溶液3.75μL,1.0mol/L的NaBH3CN溶液5μL,40℃衍生化反应16h后,在浓度为38%的分离胶上电泳分离,取得良好的分离效果.在该实验条件下,果胶多糖酸水解后得到聚合度为2～16的果胶寡糖混合物,与质谱分析结果基本一致.该方法快速、简捷、灵敏、分辨率高,费用低,为果胶多糖可控性降解的监测和果胶寡糖的分离分析提供了技术手段.; 孙静李健军黄琳娟王仲孚; 关键词：果胶

基于电喷雾电离质谱(ESI-MS)的苯胺稳定同位素标记对还原性寡糖(链)的定性定量分析方法被引量：12: 2010年; 建立了一种基于电喷雾电离质谱的苯胺稳定同位素标记对还原性寡糖链进行定性及相对定量分析的研究方法.用苯胺标记乳糖标准品,优化了影响标记效率的各种因素,在弱酸性环境下,选择糖链/苯胺/硼氢氰化钠的摩尔比为1∶1.2∶10,于70℃反应15 min即可标记完全;同时考察了4对d0/d5苯胺标记的麦芽糊精寡糖在电喷雾电离质谱中的线性、动态范围以及重现性.结果表明,在15倍动态范围内,相对定量方法呈良好的线性关系(R=0.9986)和重现性(CV=10.20%).为进一步验证定量方法的可靠性,将其应用于人奶中游离寡糖(HMOs)和牛奶中游离寡糖(BMOs)的分析.研究结果表明,人奶中的乳糖含量高于牛奶,人奶游离寡糖比牛奶游离寡糖种类复杂,且岩藻糖基化程度高.该方法成本低廉,标记效率高且后处理方法简单方便,适于微量样品通量化分析,对差异糖组的研究有重要意义.; 薛向东张萍王仲孚黄琳娟; 关键词：电喷雾电离质谱

果胶多糖可控性降解及果胶寡糖的制备被引量：5: 2017年; 目的建立一套果胶多糖可控性降解和果胶寡糖分离分析的完整方法。方法采用酸水解和生物酶法等不同降解方法对柑橘果胶多糖进行可控性降解,以所得果胶寡糖的聚合度范围及相对含量为指标,确定最优降解条件,对降解所得的果胶寡糖进行分离分析。结果以果胶酸为底物,用果胶酶40℃反应1h,可得聚合度范围1~5的寡聚半乳糖醛酸混合物;经强阴离子交换树脂Dowex-1×4分离、薄层色谱和电喷雾电离质谱检测,得到聚合度范围1~5的单一聚合度的半乳糖醛酸寡糖。结论建立的果胶多糖可控性降解和果胶寡糖分离的分析方法为果胶多糖的系统研究提供了参考。; 李健军许昭王仲孚黄琳娟; 关键词：果胶半乳糖醛酸降解电喷雾质谱

Pronase E酶解释放糖蛋白N-糖链的方法及荧光标记衍生物的LC-MS分析被引量：11: 2010年; 建立了一种用非特异性酶链酶蛋白酶E(Pronase E)从糖蛋白上释放N-糖链的方法.以牛胰核糖核酸酶B(Ribo B)和鸡白蛋白(Chicken Albumin)为材料,用Pronase E代替N-糖苷酶F(PNGase F)释放N-糖链.当蛋白酶质量与糖蛋白质量比为1∶1时,得到只带一个天冬氨酸(Asn)的闭环N-糖链,称其为糖氨酸(gly-can-Asn),这样既为糖链引入了天然的-NH2活性基团,同时还保持了糖链原有的还原端闭环结构.以9-氯甲酸芴甲酯(Fmoc-Cl)为衍生试剂对解离后的糖氨酸进行衍生,采用高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI/MS)对Fmoc-Cl糖氨酸衍生物进行分析,建立了糖蛋白的Pronase E酶解、微量糖氨酸的Fmoc-Cl衍生以及糖氨酸衍生物的HPLC-ESI/MS分析方法,该方法保持了N-糖链的天然结构,便于以-NH2为功能基团进一步进行荧光标记、分离制备以及糖链与蛋白质的相互作用研究.; 徐莎张萍黄琳娟王仲孚; 关键词：PRONASE 糖蛋白电喷雾质谱荧光标记

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国家高技术研究发展计划(2007AA10Z338)