国家自然科学基金(30300185)
- 作品数：3 被引量：20H指数：2
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- 人β防御素2腺病毒表达载体的构建及其在大鼠真皮多能干细胞中的表达被引量：7
- 2006年
- 目的构建和鉴定人β防御素2(HBD2)的重组腺病毒表达载体,并观察其转染大鼠真皮多能干细胞(dMSCs)后的表达。方法反转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HBD2全长cDNA,亚克隆至穿梭质粒(pAdTrack-CMV)中,然后转化含骨架质粒(pAdEasy-1)的大肠杆菌B J5183,通过同源重组产生腺病毒载体质粒。PacⅠ酶切阳性的重组质粒后转染293细胞,包装出重组病毒载体。用所得重组腺病毒感染dMSCs细胞,并采用RT-PCR和荧光免疫组织化学检测其在dMSCs中的表达情况。结果经测序、酶切及聚合酶链反应(PCR)鉴定,表明已成功地扩增到HBD2全长cDNA,并将其顺序克隆到穿梭质粒和骨架质粒中,进而组装出腺病毒表达载体。经RT-PCR和免疫组织化学证实构建的病毒载体可感染dMSCs,并有效表达HBD2。结论本实验成功地构建了含HBD2基因的腺病毒表达载体,并证实其可在dMSCs中表达。
- 李楠肖桃元粟永萍宗兆文徐辉王军平冉新泽刘志君
- 关键词：人Β防御素2腺病毒载体真皮多能干细胞
- 重组人Β防御素2在真皮多能干细胞中的表达及抗菌活性的测定被引量：2
- 2006年
- 目的检测重组人Β防御素2(HUMANΒ-DEFENSIN2,HBD2)腺病毒表达载体在大鼠真皮多能干细胞(DERMALMULTIPOTENT STEM CELLS,DMSCS)中的表达,并观察重组HBD2的体外抗菌活性。方法将含有HBD2重组腺病毒转染DMSCS,RT-PCR、荧光免疫化学、WESTERN BLOTTING检测HBD2的表达情况,ELISA测定培养上清中HBD2的浓度,K-B纸片扩散法检测上清对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等标准菌株的杀灭效果。结果RT-PCR、荧光免疫化学和WESTERNBLOTTING的结果显示转染后HBD2可在DMSCS中有效地表达,上清中HBD2的浓度为743.6NG/ML,K-B纸片法显示HBD2对上述标准菌株有明显的杀灭效应。结论HBD2重组腺病毒表达载体在DMSCS可高效表达,并对大肠埃希菌等标准菌株有杀灭效应。
- 李楠肖桃元粟永萍徐辉王军平宗兆文冉新泽董世武刘志君
- 关键词：人Β防御素2真皮多能干细胞
- hBD_2修饰真皮多能干细胞促进感染创面修复的初步实验研究被引量：12
- 2006年
- 目的观察人β防御素2(humanβdefensin2,hBD2)修饰的大鼠真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)移植后对细菌感染创面修复的影响。方法制作大鼠全层皮肤切割伤伴感染模型,点状注射的方法将hBD2腺病毒载体转染修饰的dMSCs移植到伤口,通过测定痂下菌量及创面愈合面积百分率和创面愈合时间等评价hBD2修饰的dMSCs局部移植的促愈效果。结果和局部单纯移植dMSCs组和单纯损伤组相比,hBD2修饰的dMSCs移植组痂下菌含量低(P<0.05),且创面愈合时间明显缩短(P<0.05)。结论hBD2修饰的dMSCs可有效地促进大鼠感染创面的修复。
- 李楠肖桃元粟永萍徐辉王军平宗兆文董世武冉新泽刘志君
- 关键词：人Β防御素2真皮多能干细胞创面修复
