大庆市科技局资助项目(SGG2006-010)
- 作品数：5 被引量：75H指数：5
- 相关作者：侯喜林朴范泽王红刘鹏周玉龙更多>>
- 相关机构：黑龙江八一农垦大学更多>>
- 发文基金：大庆市科技局资助项目黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛副流感病毒3型的分离鉴定被引量：25
- 2009年
- 从黑龙江省某牛场患有呼吸道疾病的病牛鼻液中分离到1株病毒,该病毒能在MDBK细胞上增殖并产生特征性细胞病变,对分离毒株进行理化特性、RT-PCR鉴定及序列测定与分析,结果发现该病毒为RNA病毒,具有血凝性,对乙醚、氯仿极其敏感,不耐热,对酸的抵抗力差;分离株与GenBank中已发表的病毒株N基因片段的同源性为82.6%～99.1%,结果表明分离的病毒为牛副流感病毒3型毒株,命名为BPIV3DQ1株。根据GenBank上发表的牛副流感病毒3型核衣壳蛋白N基因序列,设计合成了一对特异性引物,能扩增704bp的目的片段,可以检测出10个TCID50/100μL病毒核酸。
- 刘鹏侯喜林周玉龙朴范泽
- 关键词：RT-PCR
- 牛呼吸道合胞体病毒的分离鉴定被引量：26
- 2009年
- 从黑龙江省某牛场患有呼吸道疾病的病牛鼻汁中分离到1株病毒,并对其进行了系统鉴定。结果该病毒株能在Vero细胞上增殖并产生特征性的合胞体形态的细胞病变;病毒对5-碘脱氧尿核苷不敏感,对酸、氯仿、乙醚均敏感,不耐热,56℃加热30 min可被灭活,且无血凝性和血吸附特性;该病毒能被牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）标准阳性血清中和;应用特异性引物,通过反转录-聚合酶链式反应可从病毒细胞培养物中扩增出BRSVN基因中596 bp的特异性片段,并且分离株与GenBank中BRSV毒株N基因相应片段的核苷酸序列同源性为97.8%-99.3%。以上结果表明所分离到的病毒为牛呼吸道合胞体病毒,命名为BRSV HJ株。
- 王红侯喜林朴范泽
- 关键词：牛呼吸道合胞体病毒
- 牛呼吸道合胞体病毒重组N蛋白间接ELISA方法的建立及应用被引量：13
- 2010年
- 【目的】以纯化的牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)HJ株重组N蛋白作为包被抗原,对各项条件进行优化,确定判定标准,建立检测BRSV抗体的间接ELISA方法。【方法】将已构建的重组菌BL21(DE3)进行诱导表达,获得重组N蛋白。利用电洗脱法对表达产物进行纯化,并用Western blot对表达产物进行鉴定。以纯化后的重组N蛋白作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立检测BRSV抗体的间接ELISA诊断方法。【结果】成功表达并纯化了BRSV HJ株重组N蛋白,Western blot检测结果证明表达产物具有良好的反应原性。以重组N蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。交叉试验结果表明重组N蛋白与牛无浆体病(Anaplasmosis)、牛传染性鼻气管炎(IBRV)和牛副流感(BPIV)阳性血清均不发生交叉反应。与中和试验(SNT)相比较,该方法的特异性、敏感性和符合率分别为85.0%、90.9%和87.7%。采用本试验建立的间接ELISA方法对黑龙江省的牡丹江、佳木斯、鹤岗和大庆4个地区牛场的600份牛血清进行了检测,结果表明,黑龙江省部分地区BRSV的抗体阳性率为27.33%。【结论】本研究建立的间接ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,利用该方法初步证实黑龙江省部分地区存在牛呼吸道合胞体病。这一研究为牛呼吸道合胞体病诊断试剂盒的研制奠定了基础,并为该病的诊断与流行病学调查提供有效的技术手段。
- 王红余丽芸侯喜林朴范泽翟延庆
- 关键词：牛呼吸道合胞体病毒重组N蛋白间接ELISA
- 牛呼吸道合胞体病毒RT-PCR检测方法的建立被引量：13
- 2008年
- 根据GenBankTM上发表的牛呼吸道合胞体病毒核衣壳蛋白N基因序列,设计合成了一对特异性引物,扩增大小为596bp的目的片段,通过特异性试验、敏感性试验和重复性试验建立了牛呼吸道合胞体病毒的RT-PCR检测方法。所建立的牛呼吸道合胞体病毒的RT-PCR方法与牛腺病毒、牛副流感病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛无浆体均无交叉反应,该方法的敏感性可达1TCID50。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异性强和重复性好等特点,可作为牛呼吸道合胞体病毒检测的一种方法。
- 王红朴范泽侯喜林
- 关键词：牛呼吸道合胞体病毒
- 牛传染性鼻气管炎病毒DQ株gD基因表达及其间接ELISA方法的建立和初步应用被引量：7
- 2011年
- 以原核表达的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)重组gD蛋白作为包被抗原,建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。构建pET30a-gD重组质粒,在大肠杆菌中表达IBRV重组gD蛋白,Western-blot检测该重组蛋白具有良好的免疫活性。通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为2.5μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶200,酶标二抗最佳稀释倍数为1∶5 000,与病毒中和试验、全病毒ELISA方法的检测结果符合率分别为87.5%、92.5%。用该法对黑龙江部分地区采集到的863份牛血清样品进行检测,结果阳性率为82.27%。本试验建立的间接ELISA方法可用于IBR的检测和流行病学调查。
- 董华兴侯喜林谢金鑫张佩鑫柳强刘鹏王延涛
- 关键词：牛传染性鼻气管炎病毒间接ELISA抗体检测
