云南省自然科学基金(2010ZC234)
- 作品数：7 被引量：16H指数：2
- 相关作者：吴涛陈少瑜陈海云宁德鲁李勇杰更多>>
- 相关机构：云南省林业科学院云南省森林植物培育与开发利用重点实验室国家林业局更多>>
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- 23个云南八角品种的指纹图谱构建被引量：1
- 2012年
- 运用RAPD-PCR分子标记技术从22条扩增效果好的RAPD引物中筛选出两条具有扩增效果好、多态性高、条带清晰的特征引物:G11(TGC CCG TCGT)和M18(CAC CAT CCGT)。这两条特征引物能够将23个云南八角品种完全区分开,从而建立了23个云南八角品种的指纹图谱,为云南八角的物种亲缘关系鉴定和遗传多样性分析提供科学参考。
- 陈海云陈少瑜宁德鲁吴涛耿树香李勇杰
- 关键词：指纹图谱
- 八角基因组DNA的提取方法被引量：2
- 2012年
- 采用4种植物基因组DNA提取方法(CTAB法、SDS法、高盐法、试剂盒法)对八角基因组DNA进行提取试验。结果表明,对传统CTAB法稍加改良可以得到较为理想的提取效果,改良的内容包括①在加入CTAB提取缓冲液之前,先用CTAB-free缓冲液抽提1～2次;②将CTAB提取缓冲液中CTAB的用量从2%提高到3%;③提取缓冲液的用量由样品干重的10倍增加到60倍。用改良CTAB法提取的DNA经RAPD-PCR扩增,条带清晰,其质量能够满足分子标记的要求。
- 陈海云吴涛耿树香白平陈少瑜宁德鲁
- 关键词：基因组DNA改良CTAB法凝胶电泳
- 八角高质量的基因组DNA提取新方法被引量：1
- 2014年
- 为了从八角叶片中提取高质量的基因组DNA,设计了7种DNA提取方法。结果表明,实验方法7提取的基因组DNA溶液无色透明,经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测呈现出一条清晰的条带,蛋白、多糖、酚类物质等去除较彻底;PCR扩增及限制性内切酶消化证明,该DNA样品能够满足后续实验的要求。
- 陈海云陈少瑜吴涛谷丽萍李勇杰宁德鲁
- 关键词：DNA提取方法PCR酶切
- 基于RAPD标记的云南23个八角优良无性系的聚类和遗传多样性分析被引量：8
- 2013年
- 利用RAPD分子标记技术对云南省的23个八角优良无性系进行了聚类和遗传多样性分析。从筛选出的22条引物中,共扩增出197个位点,其中多态性位点183个,平均多态性比率为92.89%。采用成对算术平均数的非加权成组配对法(UPGMA)对Nei’s的一致度进行的聚类分析结果表明,在23个八角无性系中,广南7号与广南9号的遗传距离最近,广南9号与富宁3号的遗传距离最远。在遗传距离为0.142 5处将23个八角无性系分为4个类群。试验数据表明,其八角无性系间的遗传距离与地理距离的相关性不大。遗传多样性分析结果表明,云南23个八角优良无性系间存在较高的遗传多态性和丰富的遗传基础。
- 陈海云宁德鲁陈少瑜李勇杰吴涛谷丽萍
- 关键词：RAPD标记聚类遗传多样性分析
- 正交试验优化八角ISSR-PCR反应体系被引量：1
- 2014年
- 利用正交试验设计研究Taq DNA聚合酶、DNA模板、引物(UBC 886)、dNTP、Mg2+浓度5个因素对云南八角ISSR-PCR反应的影响,建立其最佳反应体系。结果表明:25μL的反应体系中5个因子的最佳水平为:Mg2+3 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U、DNA模板0.016 ng、引物0.8μmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L。PCR最佳反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,46℃退火45 s,72℃延伸1 min,40次循环;72℃最后延伸7 min,4℃保存。
- 冯丹宁德鲁陈少瑜李勇杰张艳丽吴涛陈海云
- 关键词：正交设计
- 八角ISSR-PCR反应体系的建立及引物筛选研究被引量：5
- 2013年
- 以文山、广西2个居群6个单株的八角嫩叶为研究材料,以八角叶片基因组DNA为模板,在分析归纳相关树种ISSR-PCR体系的基础上,确定一个反应体系并对ISSR引物库进行筛选,同时结合正交设计针对具体引物进行体系优化。结果表明,八角的ISSR-PCR反应体系(25μL)为DNA模板0.003～0.016 ng,Taq DNA聚合酶0.5～1.0 U,dNTPs 0.2 mmol.L-1,Mg2+浓度2.5～3.0 mmol.L-1,引物浓度0.6～0.8μmol.L-1。扩增程序为,94℃预变性5 min;94℃变性30 s,引物特异温度退火45 s,72℃延伸1 min,40个循环;72℃最后延伸7min;4℃保存。获得效果稳定并具有多态性的ISSR引物13条。研究结果可为八角遗传多样性分析和种质资源鉴定等研究奠定基础。
- 吴涛陈海云陈少瑜宁德鲁冯丹李勇杰张艳丽
- 关键词：DNA模板引物筛选
- 八角RAPD-PCR反应体系的建立及引物筛选研究被引量：2
- 2012年
- 在提取高质量八角基因组DNA的基础上,通过对其RAPD反应体系的Taq DNA聚合酶、dNTPs浓度、Mg2+浓度、引物浓度等因子的优化,建立了稳定、重复性高的八角RAPD-PCR反应体系。研究结果表明,在25μL PCR反应体系中,含1.0 UTaq DNA聚合酶,0.15 mmol.L-1 dNTPs,2.0 mmol.L-1 Mg2+,2.0μmol.L-1引物,20～80 ng模板。最佳反应程序为,94℃预变性5 min,扩增后94℃变性30 s,31～37℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;72℃完全延伸7 min,4℃保存。在建立RAPD-PCR反应体系的基础上,从240条RAPD引物中筛选出15条扩增条带清晰、稳定性好的引物,并通过各引物的退火温度梯度实验,确定了各引物的最适退火温度。
- 陈海云陈少瑜宁德鲁吴涛耿树香谷丽萍白平李勇杰
- 关键词：RAPD-PCR引物
